Xác định gián tiếp số lượng tế bào bằng cách đếm số lượng các khuẩn lạc tạo thành khi nuôi cấy trên môi trường đặc ppsx

Xác định gián tiếp số lượng tế bào bằng cách đếm
số lượng các khuẩn lạc
tạo thành khi nuôi cấy trên môi trường đặc:
1. Nguyên tắc của phương pháp: cấy một thể tích
dung dịch mẫu nhất định
lên môi trường đặc trưng trong hộp petri, sau đó đếm
số khuẩn lạc mọc lên sau một
thời gian nuôi cấy nhất định. Khi đó ta coi mỗi khuẩn
lạc là kết quả của sự phát
triển từ 1 tế bào hay bào tử.
2. Phương pháp cấy mẫu:
- Dùng pipet vô trùng lấy 0, 1 ml (tương đương 2
giọt) dung dịch mẫu cho
vào mỗi hộp petri.
- Dùng que gạt dàn thật đều trên khắp mặt thạch để
tách riêng rẽ từng tế bào.
Chú ý: ghi vào nắp hộp petri nồng độ pha loãng của
dịch cấy và ngày cấy.
- Mỗi mẫu cấy 3 nồng độ liên tiếp, mỗi nồng độ cấy
ít nhất 3 hộp petri, sau
đó lấy kết quả trung bình.
- Đặt các hộp petri đã cấy vào tủ ấm có nhiệt độ và
thời gian thích hợp cho
từng nhóm vi sinh vật.
- Sau đó lấy ra và đếm số khuẩn lạc trong từng hộp
petri.
3. Cách đếm:
- Lấy bút chì kẻ 2 hoặc đường chéo ở đáy hộp petri
(tuỳ theo số khuẩn lạc
mọc ít hay nhiều) chia hộp thành 4 hoặc 8 phần, đánh
dấu thứ tự từng phần từ 1 – 4

hoặc từ 1 – 8.
- Đếm số khuẩn lạc từng phần, nhớ đánh dấu các
khuẩn lạc đã đếm để tránh
trùng lặp.
- Số lượng tế bào vi sinh vật trong 1 gam đất được
tính theo công thức sau:
1
N = X . . M . K
V
Trong đó: N là số tế bào vi sinh vật hay số đơn vị
hình thành khuẩn lạc (CFU)
trong 1 gam đất
X là số khuẩn trung bình trong mỗi hộp petri ở cùng
độ pha loãng.
V là thể tích dung dịch mẫu cấy vào mỗi hộp petri.
M là độ pha loãng dùng để cấy.
K là hệ số khô kiệt của đất (K = 100/(100 – x), x là
độ ẩm của đất)
Chú ý: độ pha loãng thích hợp nhất là độ pha loãng
mà số khuẩn lạc đếm
được trong mỗi hộp petri sau khi nuôi cấy là 50 – 150
khuẩn lạc (đối với vi khuẩn,
xạ khuẩn) và 30 – 50 khuẩn lạc đối với nấm.