PHƯƠNG PHÁP NHUỘM VI SINH VẬT pdf

PHƯƠNG PHÁP NHUỘM VI SINH VẬT - Quan
sát vi sinh vật trên tiêu bản cố định. Phương pháp
nhuộm đơn,
nhuộm Gram:
1. Các đặc điểm của tiêu bản cố định:
Quan sát tiêu bản cố định là là một phương pháp phổ
biến trong nghiên cứu
vi sinh vật vì nó có những ưu điểm sau:
- Thao tác tuy phức tạp nhưng tiêu bản có màu sắc
đẹp, giữ được lâu.
- Không sợ lây nhiễm khi làm việc với vi sinh vật gây
bệnh.
- Cho phép ta quan sát rõ ràng hình dạng, cấu tạo của
tế bào cũng như dễ
dàng đếm số lượng tế bào.
2. Cách làm tiêu bản:
a. Làm vết bôi:
Đặt một giọt nước sạch vào giữa phiến kính, sau đó
dùng que cấy đã khử
trùng lấy một vòng que cấy vi sinh vật cho vào giọt
nước và dàn đều ra. Trường hợp
nuôi cấy trên môi trường lỏng thì dùng pipet để lấy
dung dịch nghiên cứu. Hơ khô
phiến kính đã có vi sinh vật trên ngọn lửa đền cồn
hoặc để khô tự nhiên ta được một
vết mờ trên phiến kính gọi là vết bôi.
Chú ý:
- Lượng vi sinh vật lấy vừa phải.
- Vết bôi tròn, gọn, thật mỏng.
- Các tế bào vi sinh vật được dàn đều, dễ quan sát.
b. Cố định vết bôi:

- Việc cố định vết bôi nhằm các mục đích sau:
+ Giết chết vi sinh vật để chúng dễ bắt màu và an
toàn khi tiếp xúc (nếu là vi
sinh vật gây bệnh).
+ Gắn chặt vi sinh vào phiến kính để lúc nhuộm
không bị rửa trôi.
- Các cách cố định:
+ Cố định bằng nhiệt: dùng kẹp gỗ để kẹp phiến kính,
hơ mặt dưới của
phiến kính qua lại trên ngọn lửa đèn cồn 2 – 3 lần
(chừng vài ba giây), tránh không
để tiêu bản quá nóng.
+ Cố định bằng hoá chất:
* Nhúng vết bôi vào cồn 95o khoảng 10 – 15 phút rồi
sấy khô.
* Ngâm trong axeton 5 phút.
* Sấy bằng hơi formol 10 – 15 giây.
3. Phương pháp nhuộm đơn:
Nhuộm đơn là dùng 1 loại thuốc nhuộm để nhuộm.
Các loại thuốc nhuộm
thường dùng để nhuộm đơn là:
- Fuchsin kiềm.
- Xanh metylen.
- Tím gentian.
- Đỏ trung tính.
Phương pháp nhuộm: đặt tiêu bản đã cố định lên giá
rồi nhỏ vài giọt thuốc
nhuộm phủ kín vết bôi. Sau 1 – 2 phút, đổ thuốc
nhuộm đi và rửa nhẹ bằng nước
sạch tới khi nào thấy nước rửa chảy qua vết bôi

không còn màu nữa là được. Để tiêu
bản khô dần hoặc thấm khô bằng giấy thấm. Khi tiêu
bản khô hẳn đem quan sát
dưới kính hiển vi.