quy trình cụ thể tinh sạch sản phẩm PCR để dùng tạo dòng
Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (69.49 KB, 3 trang )
PCR là một kỹ thuật phổ biến trong sinh học phân tử nhằm khuyếch đại (tạo ra nhiều bản sao) một đoạn DNA
mà không cần sử dụng các sinh vật sống như E. coli hay nấm men. PCR được sử dụng trong các nghiên cứu sinh
học và y học phục vụ nhiều mục đích khác nhau, như phát hiện cácbệnh di truyền, nhận dạng, chẩn đoán
những bệnh nhiễm trùng,tách dòng gene, và xác định huyết thống.
nguyên liệu: Các thành phần phản ửng của PCR:
Theo Too H. P. (2001) các thành phần cơ bản của một phản ứng PCR bao gồm:
- Khuôn mẫu (template): ADN đích
- Primer
- Bốn dNTP (2’– deoxynucleoside – 5’ – triphosphate): dATP, dTTP, dGTP, dCTP
- Taq polymerase
- Dung dịch đệm
- Mg2+
- Chất phụ trợ (additive): được sử dụng để tăng hiệu quả khuếch đại
Thông thường sau khi chạy PCR, trong trường hợp tốt nhất là chỉ có 1 sản phẩm duy nhất
(đặc hiệu) thì mẫu vẫn còn bị lẫn tạp với 1 lượng primer, dNTP dư và enzyme DNA polymerase.
II TINH SẠCH
1 nguyên lý chung của tinh sạch
Trong quá trình tinh sạch có sử dụng dung dịch đệm rửa giải phải đúng yêu cầu và liều
lượng
Cột tinh sạch phải được điều chỉnh mức chinh xác
Thao tác đúng trình tự và cẩn thận trong quá trình thực hiện
2 các phương pháp tinh sạch
Phương pháp Sepharose CL-6B
Phương pháp Sephacryỉ S-3Q0/S-500
Phương pháp Sephadex 74
Phương pháp Sephadex G-50
Phương pháp Micron- ỉ 00
Phương pháp guanidine-HCỈ
Phương pháp điện đi agarose.
Phương pháp SPRIR
Phương pháp kết tủa
Trong đó ta chọn phương pháp điện di agarose.
!"#
$%&'()*+, %.%/) �%+!12"#00."03
-+
4567"#03-+8-59-50#:/
457;+0.<<&="#>010+ =-59.)."&&"+.?6@%#A-B'
C#595D
457.0&"1E")."&&"+.F>0"#:G##H%"#I6JK#0&"1E"
457L*<&#MNOJP.-Q300."0QA@R6@&SD
45@7T1UVWX8-Y)."&&"+.F5Z>/%T=45O7[03M8
-"%#'%-\*&%TN-("&&"+.F
457]SQ%T03#'%.).(V-BT1UN:8MN-V&^6&S
45_7L"%#'%6JJJJ^`&S.J'NP
(#'%0)a#)%.%b-590Z8(&,a-59#.1c8d
-VN.#)/,-\3e25N-Q%b=&'f
45g7.:%).V#59h01E"5Z>Ai#67@".\f%bD8#'%
6JJJJ^`&S.J'NP
[03%b-59#'%j-b3(&,8-\k:%-V5l01m).e
%V#59-%h01E"n>ko02%bi#67@0Q)#'%-\o0
2)&=%3e%.%/bd:-V#).-\3e25N-Q%b&'
f
456J7p,V0)-Y)."&&"+.?6@%#%
p,V.%b-0=03c%b)-Y).%V"&&"+.?3(n\f68@%#%
-'#)%b3\%>-\-/>%b=&'f
45667]S@JKq#"#.1E"c).VWX
]S@Jq#++U-%"#.1E"-\c).VWX%)0%.)."&&"+.F%Z#)%b3\%
>%r-s#)-\o02%b)T1U-"%-#'%
4567MN-V&^6&S
[03-59V++U-%0:MN-V&^-\m-U++U83e25N
-Qf,M0%b3\%>
4567p'%6JJJJ^`&S.6&SNP8#,V08-*<&#
tQ)#'%.6&S-\#)%%b)bd:N-V.-\-2%12..%b
3e3e1Uu%
4567L+2&T%2&T%50:"#00."J_v8-Q
6JJw.J&S-\3\%03Qx2
[03#'%2%b&'f)3\%>0Q)-+:"#00."-\q"%3Qx2-V
d0%b3\%>)%b&'f
yQ#*
L+00."#)&5Z&(&+u#)%).3Qx25%.%/
(a-"%#2&T%/5o+r..+^
[2&T%03-593e^#b&,
