quy trình cụ thể tinh sạch sản phẩm PCR để dùng tạo dòng

LOGO
www.trungtamtinhoc.edu.vn
Đề tài: quy trình cụ thể tinh
sạch sản phẩm PCR để dùng
tạo dòng
GVHD: TS.ĐẶNG ĐỨC LONG
Nhóm svth : Đoàn Ngọc Sinh
Trần Duy Sơn
Nguyễn Đình Tấn
Nguyễn Thị Tâm
Nguyễn Bá Thạch
Nguyễn Thị Thân
Trần Thị phương Thảo
Võ Thị Thanh Thảo
www.trungtamtinhoc.edu.vn
Tổng quan
I. Giới thiệu chung về PCR
II. Tinh sạch
1. Nguyên lý chung của tinh sạch
2. Phân loại các phương pháp tinh sạch
3. Quy trình tinh sạch
4. kết luận
www.trungtamtinhoc.edu.vn
I. Giới thiệu chung về PCR

nhằm khuyếch đại (tạo ra nhiều bản
sao) một đoạn DNA mà không cần
sử dụng các sinh vật sống như
E.coli hay nấm men.
nghiên cứu sinh học và y học
phục vụ nhiều mục đích khác

nhau, như phát hiện cácbệnh
di truyền, nhận dạng, chẩn
đoán những bệnh nhiễm trùng,
tách dòng gene, và xác định
huyết thống.
www.trungtamtinhoc.edu.vn
Nguyên liệu
www.trungtamtinhoc.edu.vn
II TINH SẠCH
Trong quá trình tinh sạch có sử dụng
dung dịch đệm rửa giải phải đúng yêu
cầu và liều lượng
Cột tinh sạch phải được điều chỉnh
mức chinh xác
Thao tác đúng trình tự và cẩn thận
trong quá trình thực hiện
ĐÚNG YÊU
CẦU
1 nguyên tắc chung của tinh sạch
www.trungtamtinhoc.edu.vn
2 các phương pháp tinh sạch
Phương pháp Sepharose CL-6B

Phương pháp Sephacryỉ S-3Q0/S-500
Phương pháp Sephadex 74
Phương pháp Sephadex G-50
Phương pháp guanidine-HCl
Phương háp kết tủa
Phương pháp SPRIR
Phương pháp điện đi agarose

www.trungtamtinhoc.edu.vn
Quy trình tinh sạch DNA từ gel

Bước 1: Gel sau khi chạy điện di, được đưa lên hệ thống uv.

Bước 2: Dùng dao sắc cắt phần gel chứa band DNA cần
được tinh sạch cho vào eppendoft 1.5ml (đã cân trọng lượng
trước).

Bước 3: Cho capture buffer vào eppendorf chứa gel trên với
tỷ lệ l0mg gel ~ 10µl capture buffer.

Bước 4: Đậy nắp lại ủ ở 60°c cho đến khi agarose tan hết (5-
15 phút).

Bước 5: Chuẩn bị cột GFX, đặt vào eppendorf tương ứng với
số mẩu cần tinh sạch.

Bước 6: Sau khi ủ, đem ly tâm để tập trung mẩu ở đáy
eppendorf.

Bước 7: Hút hết mẩu sau khi ly tâm cho vào các cột đã chuẩn
bị ở trên, ủ ở nhiệt độ phòng 1 phút.
www.trungtamtinhoc.edu.vn

Bước 8: Đem ly tâm 10000 vòng/phút trong 30giây ở 4°C.

Bước 9: Cho thêm vào cột lượng wash buffer tương ứng (tỉ
lệ 1:5 theo thể tích mẫu tinh sạch), ly tâm 10000 vòng/phút
trong 30 giây ở 4°C


Bước 10: Lấy cột ra và đặt vào eppendoft 1.5ml mới.

Bước 11: Hút 50µl elution buffer nhỏ vào cột GFX.

Bước 12: ủ ở nhiệt độ phòng 1 phút.

Bước 13: Ly tâm 10000 vòng/phút trong 1 phút ở 4°C, lấy
cột ra, đậy nắp lại.

Bước 14: Điện di sản phẩm tinh sạch với sản phẩm chưa
tinh sạch trên gel agarose 0.8 %, hiệu điện thế 100V trong
30 phút để kiểm tra kết quả tinh sạch.
www.trungtamtinhoc.edu.vn
Kết luận

Điện di agarose là phương pháp dễ làm
và cho kết quả như mong muốn

Quá trình tinh sạch sẽ đem lại sản phẩm
sạch tối ưu sử dụng cho tạo dòng

Sản phẩm sau khi được tinh sạch không
còn lẫn tạp chất
=> Quá trình tạo dòng đạt hiệu quả cao.
LOGO
www.trungtamtinhoc.edu.vn
www.themegallery.com
Thank You !
Add your company slogan