tạo dòng và biểu hiện enzymelipase từ bacillus subtilis trong tế bào chủ escherichia coli
Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (591.38 KB, 27 trang )
Bộ giáo dục và đào tạo
Trường Đại Học Mở Tp.HCM
Khoa công nghệ sinh học
Bacillus subtilis
!Escherichia coli
ĐT VN ĐÊ
Enzyme Lipase được ứng dụng rộng rãi
trong tất cả các ngành công nghiệp: chế
biến thực phẩm, dược phẩm, hóa dầu
Enzyme Lipase được tìm thấy ở một số
loài thực vật, động vật, đặc biệt hiện diện ở
nhiều loài vi sinh vật (Candida Sp,
Aspergillus oryzae, Bacillus subtilis…).
Giới thiệu về enzyme Lipase
•
Lipase: có trọng lượng phân tử từ 19-20 kDa,
hoạt động thủy phân liên kết ester carboxyl của
acylglycerols để giải phóng các axit béo và
glycerol.
•
Phản ứng thủy phân triacylglycerol
•
Sự hoạt động của lipase phụ thuộc vào pH
•
Lipase không cần cofactor nhưng các cation
hóa trị 2 như Ca
2+
thì kích thích lipase hoạt
động. Lipase bị ức chế mạnh bởi CO
2+
, Ni
2+
,
Hg
2+
và Sn
2+
và bị ức chế yếu bởi Zn
2+
, Mg
2+
,
EDTA và SDS.
• Hoạt động tối ưu của lipase khoảng 30-35
0
C
• Ứng dụng của lipase:
-
Công nghệ chế biến thực phẩm: tăng hương vị
trong sản phẩm sữa và các loại thực phẩm khác
như thịt, rau, trái cây, sản phẩm sữa và bia.
- Công nghiệp chất béo và dầu.
- Trong dược phẩm, sản xuất dầu sinh học, sản
xuất vật liệu sinh học, công nghiệp chất tẩy
rửa, tổng hợp hữu cơ, công nghiệp giấy và bột
giấy, sản xuất hóa chất nông nghiệp, và trong
quản lí môi trường…
Lipase được tìm thấy nhiều trong tự nhiên,
nhưng lipase từ vi khuẩn thì có ý nghĩa thương
mại hơn vì giảm chi phí sản xuất, ổn định cao,
sẵn có hơn lipase thực vật và động vật.
Aspergillus oryzae : Tổng hợp acid béo.
Aspergillus sp: Tổng hợp hương vị.
Bacillus subtilis: Sản xuất bánh mì.
Candida rugosa: Tổng hợp hương vị.
Kĩ thuật tạo dòng:
Phương pháp xác định hoạt tính
!" #$
$"
%&
'()*+,
/01/234
-5
6
7897:
;
%<<
6
=>7?@)
A7BCD=EF75G" ;)
1HI1)
;
JBKBL
6
BM+7"M:
;
$N"<:75)85
)OP@ ;">I$=QR7
F7>7?$
;
-75
6
')IS(9
@
!"#$
%$&'()*$+("
%$&'(,)*$+(,"
-./0.12
3/4/56/7
8/9:
Bảng 1: Tóm tắt kết quả xét nghiệm sinh hóa:
"#$
%& '(
)*
+ ! &
Bacillus +/- + +/- + +/- +
1 - + - + + +
2 - + - - + +
3 - +* + + - +
4 + + - + - +
5 + + + + - +
6 - + + + - +
7 + + + + - +
8 - +* + + - +
9 - - - - + +
10 + - - + + +
11 - + + + + +
12 - + + + + +
13 - + + + - +
14 + + + + - +
15 + + + + - +
:; $().
("< .=>)0
8/9:0?@/A/BC
D2EFGHF0
C/5I/JHK//LF
-20/2
M":;C4/C/
B:NOO*>OO0
:;/B"+
//L.A./5/ P2
/5//Q+.RS,T.
$5/5R>2
Hình. 2. Trình tự Nucleotide của GHlip lipase (số nhập liệu FJ481899).
+!&
,-& .
./.0 123 124
/0 153 153
,/,0 165 163
/0 172 178
9, 586 588
.9 474 471
/1T-UVW-
U'KH/.'F;
3J+V/5;.
:/+:W3: 2
F;3J#?
,5XYZ[\0./[69#?
F;-2
R56/7+C/56/75/
/5]U-D/KH^_`AC
FF-20/[N_`AC
/5F-20/2
,T+&. 0/?/L
F-20/
Bài báo 2
*,(a.1b-=""/
-(a[./ P/512c82,
a[H://5H+
3J[7d2
*,(a+/5/L-(a
e.
fgaR)*Rh/ //Q+
f1gaR)*(a*Rh[0.12
c8.i25
*(ae.-E>=
gij"*Rh*iD[/ //Q+
-E>=gij"*(*Rh.0.
F-2i0/2
8/9:
0[R:J
R/9:/+[//4
C)_=Mk/0.//Q+12
c8l-(aCFA-20/
%-")N2
i7/W//4/5/
0.//Q+12c8l-(a.
\/A+C0:F
+//5/0.F//Q
+2
/X
;
F;12mTc.
-(")*iD2
* 8/56/750)Ni/L
mUaF;0#$
Y%$&'-=N*%$+-=_
* mUa+//L-2. M
/5/7]2
#$/L
-2-n%)o*-n%)
;
#$
/L M'
Y%$&'j()*%$+j()
* RJ/56/7
GH/L M[e.H
. j*1R"N0.0
./0.F12-(")*iD
Kết quả:
* R56/7mUaF-2'
jo
/$3HW
@/7@2
* pACj*[' q ./
P./5/ P6/4\
C/0.F122
Bài báo Cặp mồi sử dụng
Bài báo 1 - Cặp mồi 1:
Mồi xuôi L1 5'-atggttcacggtattggagg-3'
Mồi ngược L2 5'-ctgctgtaaatggatgtgta-3
Cặp mồi 2:
Mồi xuôi LG1 5'-ggaattccatatgaaatttgtaaaaagaagg-3'.
Mồi ngược LG2 5'-cgcggatccattaattcgtattctggcc-3'.
Bài báo 2 -Cặp mồi thu nhận gen lipA từ B.subtilis 168
FWBSLA 5'-TCT A,. ,,.,,.TAT TAT GAA ATT TG
BKBSLA 5'-GCA TGC CA .A TTC GTA TTC TGG CC
Bài báo 3 - Cặp mồi thu nhận gen lipase từ B.pumilis
BPUM1F-GAGTCGTATAAGATGAATAAGGGGG
AATG
BPUM1R- TTAATTCGTATTTTGTCCTCCGCCGTTC
- Cặp mồi thu nhận gen lipase từ dầu oliu
Mồi xuôi OPL1F-GAATTTTTTTAGGAGGACACTAT
GAGTG
Mồi ngược OPL1RCCCTGCAGCTTATTTACCCCCA
TTATAAGTGGTTTGATTTTAGGCC
8rR(ns
t
U
0)33
t
F;3J/L
K//\A-.#?A4
&C-20/[0u/3
t
//J
[/+!/]/
5///Q+/5/0.122
0"-v/J//3
t
a./
P.0?@a/5<@/A/
0.F12[i25[-
0/2T@K/:&K/K/k@/A
/0.F122
0=,GH/L
$J//?+/ P
@K//$P/K./?3H\2
Y7<
6
Z
>()8-/1)*+=[
!"
Z
*M7\[]BM
B^O_B`=#)*+
>(
Z
aSb\[BM>c`
Z
+>$
Z
*-20/:7?I
)+8
0C/4]
t
7
Z
BM7d, ^
-20/I7d= )
Z
aSbO_%&BM>7B$
, b87
Z
7?K !" #$I !"
Z
$= )
Z
/$=
Z
%Q@= )
IM7 b87=>M)
$N)
