Bài giảng Đại Cương về Sắc ký

L p C KiÓm NghiÖm ATVSTPớ Đ
H K thu t Y T H i D ngĐ ỹ ậ ế ả ươ
Bài 6 Đại Cương về Sắc ký
Bài 7 Sắc ký lỏng HPLC
PGS Ph¹m gia HuÖ
Hµ Néi 24-02-2009

1. Đại c ơng về Sắc ký
1.
Một số khái niệm mở đầu
2. Cơ sở lý thuyết (sơ l ợc)
3. Ưng dụng Sắc Kí trong Phân tích



Một số khái niệm mở đầu
Định nghĩa
Quá trình Sắc Ký
Phân loại các ph ơng pháp sắc ký

1.1 Một số khái niệm mở đầu
Định nghĩa
- PP tách
- dựa vào tốc độ di chuyển khác nhau
- d ới tác động 2 pha Tĩnh và Động
không hoà lẫn vào nhau
(trong SK lng, pha ng = cht lng)

Chất PT Phân bố giữa 2 pha
A

S
M
A = chất Phân tích S = Pha tĩnh M = Pha động

1.2 Qu¸ tr×nh s¾c ký
Pha tĩnh


1.3. Ph©n lo¹i s c ký l ngắ ỏ
•
Theo bản chất của phương pháp

Hấp phụ, Phân bố, Trao đổi ion, SK theo cỡ, SK ái lực, SK điện
•
Theo bản chất của các pha

pha thuận, pha đảo
•
Theo cách tiến hành:

SK khai triển, SK rửa giải
•
Theo phương tiện:
SK trên cột, SK trên mặt phẳng (giấy, lớp mỏng)

Cơ sở Lý thuyết

Tốc độ di chuyển các chất

Sự mở rộng dải

Thuyết về Đĩa

Thuyết động học

Ph ơng trình Van Deemter

Độ phân giải

Tèc ®é di chuyÓn
w
Thời gian lưu , phút
w = chiều rộng pic
tiêm mẫu
t
o
Tín hiệu đến detector
t
R
0
Thời gian chết






C¸c ®¹i l îng ®Æc tr ng
•
Thời gian lưu tR

•
Thêi gian l u hiệu chính t’R = tR – t0
•
HÖ sè dung l îng k’ = t’R / t0
•
HÖ sè chän läc α = t’R,B / t’R,A

S b t i x ng c a picự ấ đố ứ ủ
Hệ số bất đối: AF = b/a
Cột tốt : AF = 0,9 đến 1,1
Dược Điển VN và Anh:
Hệ số đối xứng: S=W / 2a
W = a + b
a,b đo ở h/20
Cột tốt: SF = 0,8 đến 1,2

Sù do·ng pic -ThuyÕt §éng häc
•
KhuÕch t¸n xo¸y
•
KhuÕch t¸n däc
•
Sù chuyÓn khèi (vËn chuyÓn chÊt)


Sù do·ng pic

Hi u l c c a c tệ ự ủ ộ
Cất = tách hỗn hợp Cồn + nước
Cồn + Nước

C1 + N1
C2 + N2
tỷ lệ cồn tăng dần

Sù do·ng pic -Hi u l c c a c tệ ự ủ ộ
•
Chiều cao đĩa lý thuyết H
•
Số đĩa lý thuyết của cột: N = L / H
•
Số đĩa lý thuyết của 1 m cột: n
•
Ví dụ: L=15 cm, N=15 000
 H=0,001 cm, n= 100 000

ThuyÕt ®éng häc – Ph ¬ng tr×nh Van
Deemter
H = A + B/u + C u
U
O
=
H
SK khí
SK lỏng
U
U
H

§é ph©n gi¶i
•

C¸ch tÝnh RS= 2(tRB-tRA) / (
wA+w2)
•
C¸c yÕu tè ¶nh h ëng

R
S
= 2(t
RB
-t
RA
) / (w
A
+ w
B
)

Röa gi¶i th êng

Röa gi¶i th êng

Röa gi¶i gradient

¦ng Dông S K trong PT
•
§Þnh tÝnh
•
Thö tinh khiÕt