Phương pháp Sắc ký lỏng HPLC

Phương pháp Sắc ký lỏng
HPLC
PGS Ph¹m gia HuÖ
Hµ Néi 10-2010

§¹i c¬ng vÒ S¾c ký
1. Mét sè kh¸i niÖm më ®Çu
2. C¬ së lý thuyÕt (s¬ lîc)
3. ng dông S¾c KÝ trong Ph©n tÝchỨ



Khái niệm mở đầu v SK
Định nghĩa
- PP tách
- dựa vào tốc độ di chuyển khác nhau
- dới tác động 2 pha Tĩnh và Động
không hoà lẫn vào nhau
(trong SK l ng, pha ng = ch t
l ng)

Chất PT Phân bố giữa 2 pha
A
S
M
A = chất Phân tích S = Pha tĩnh M = Pha động lỏng

Qu¸ tr×nh s¾c ký
Pha tĩnh
Sắc đồ

khai triển
Sắc đồ
Rửa giải
t1 t3
t4
t0
t2

aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa
aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa
aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa
aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa
aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa
aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa
aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa
aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa
aaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaaa
aaaaaaaaa
t1
t2

1.3. Ph©n lo¹i s c ký l ngắ ỏ
•
Theo bản chất của phương pháp
Hấp phụ, Phân bố, Trao đổi ion, SK theo cỡ, SK ái
lực, SK điện
•
Theo bản chất của các pha
pha thuận, pha đảo
•

Theo cách tiến hành:
SK khai triển, SK rửa giải
•
Theo phương tiện:
SK trên cột, SK trên mặt phẳng (giấy, lớp mỏng)

Cơ sở Lý thuyết

Tốc độ di chuyển các chất

Sự mở rộng dải

Thuyết về Đĩa

Thuyết động học

Ph6ơng trình Van Deemter

Độ phân giải

Tèc ®é di chuyÓn
w
Thời gian , phút
w = chiều rộng pic
tiêm mẫu
t
o
Tín hiệu đến
detector
t

R
0






C¸c ®¹i l6îng ®Æc tr6ng
•
Thêi gian l6u t
R
vµ t’
R
t’
R
= t
R
- t
0
•
HÖ sè dung l6îng k ’ k = t’ ’
R
/ t
0
•
HÖ sè chän läc α α = k’
B
/ k’
A

α ≥ 1

Sù do·ng pic -ThuyÕt vÒ §Üa

Sù do·ng pic -ThuyÕt §éng häc
•
KhuÕch t¸n xo¸y
•
KhuÕch t¸n däc
•
Sù chuyÓn khèi (vËn chuyÓn chÊt)


Hi u l c c a c tệ ự ủ ộ
Sắc ký = 1 phương pháp tách
C t = ấ tách hỗn hợp Cồn + nước (C+N)
Cồn + Nước
C1 + N1
C2 + N2
tỷ lệ cồn tăng dần
Đĩa trên cột SK ~ Tầng trên cột cất

Sù do·ng pic -Hi u l c c a c tệ ự ủ ộ
•
Chiều cao đĩa lý thuyết H
•
Số đĩa lý thuy t c a c t: ế ủ ộ N = L / H
•
Số đĩa lý thuy t c a 1 m c t: n ế ủ ộ
•

Ví d : ụ L=15 cm, N=15 000
 H=0,001 cm, n= 100 000

ThuyÕt ®éng häc Ph6¬ng tr×nh –
Van Deemter
H = A + B/u + C u
U
O
=
H
SK khí
SK lỏng
U
U
H

§é ph©n gi¶i
•
C¸ch tÝnh R
S
= 2(t
RB
-t
RA
) / (w
A
+w
2
)
•

C¸c yÕu tè ¶nh h6ëng

R
S
= 2(t
RB
-t
RA
) / (w
A
+ w
B
)

Röa gi¶i th6êng

Röa gi¶i th6êng

Röa gi¶i gradient

¦ng Dông S K trong PT
•
§Þnh tÝnh
•
Thö tinh khiÕt
•
Đ nh l ngị ượ

¦ng Dông S K trong PT
•

§Þnh lîng
–
Ph6¬ng ph¸p ®6êng chuÈn
–
Ph6¬ng ph¸p ®6êng chuÈn thªm
–
Ph6¬ng ph¸p chuÈn néi
–
Ph6¬ng ph¸p chuÈn ho¸
–
S K ®iÒu chÕ
–
S¾c Ký Khèi Phæ–