Hiệu quả của kỹ thuật PCR trong chẩn đoán lao phổi

1
NguyӉn Đҳc Trung và cӝng sӵ
Bӝ môn Vi sinh
Trưӡng Đҥi hӑc Y Dưӧc Thái Nguyên
HIӊU QUҦ CӪA KӺ THUҰT PCR TRONG
CHҬN ĐOÁN LAO PHӘI
TRƯӠNG ĐҤI HӐC Y DƯӦC THÁI NGUYÊN
HӜI NGHӎ KHOA KHOA HӐC & CÔNG NGHӊ Y DƯӦC MIӄN NÚI PHÍA BҲC-01/2012
2
Phҫn I. ĐҺT VҨN Đӄ
 Ӣ ViӋt Nam, bӋnh lao là mӝt bӋnh truyӅn nhiӉm nһng
nӅ.
 ViӋt Nam: 12/22 quӕc gia có sӕ bӋnh nhân lao cao
nhҩt thӃ giӟi.
 Hàng năm có 18.000 BN lao (6.000 BN lao đa kháng
thuӕc và 7.400 BN lao/HIV), khoҧng 60% BN ưӟc tính là
đưӧc phát hiӋn.
 Tăng cưӡng phát hiӋn các trưӡng hӧp mҳc lao và các
thӇ bӋnh lao là ưu tiên hàng đҫu trong công tác chӕng
lao.
3
 Tҥi ViӋt Nam, chҭn đoán lao phәi chӫ yӃu dӵa vào
nhuӝm soi đӡm tìm AFB.
 Lao phәi AFB (-) cҫn sӵ hӛ trӧ cӫa nuôi cҩy/phim
Xquang phәi chuҭn.
 Nuôi cҩy có đӝ đһc hiӋu cao nhưng thӡi gian cho kӃt
quҧ lâu (6-8 tuҫn).
 PCR là mӝt công cө có giá trӏ trong chҭn đoán.
 Kӻ thuұt PCR vӟi thưӡng quy riêng đã đưӧc sӱ dөng
đӇ chҭn đoán và phát hiӋn sӟm nhӳng trưӡng hӧp mҳc
lao.

 IS6110 là gen đưӧc sӱ dөng phә biӃn nhҩt trong phát
hiӋn vi khuҭn lao bҵng PCR.
4
Mөc tiêu nghiên cӭu
1. Phát hiӋn nhanh vi khuҭn lao Mycobacterium
tuberculosis trong các mүu đӡm thu đưӧc tӯ nhӳng
trưӡng hӧp nghi mҳc lao phәi bҵng kӻ thuұt PCR.
2. Xác đӏnh hiӋu quҧ cӫa kӻ thuұt PCR trong viӋc phát
hiӋn vi khuҭn lao Mycobacterium tuberculosis
5
Phҫn II. ĐӔI TƯӦNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CӬU
2.1. Đӕi tưӧng nghiên cӭu
Các mүu đӡm tӯ 117 trưӡng hӧp nghi mҳc lao phәi
đӃn khám đӃn khám và điӅu trӏ tҥi BӋnh viӋn Lao và
BӋnh phәi Thái Nguyên tӯ tháng 01/2010 đӃn tháng
02/2011.
6
2.2. Quy trình nghiên cӭu
BӋnh nhân nghi mҳc lao phәi
Mүu đӡm
Phát hiӋn vi khuҭn lao
M. tuberculosis
Nhuӝm soi
Ziehl-Neelsen
Nuôi cҩy trên môi
trưӡng Ogawa
PCR
(gen IS6110)
So sánh và xác đӏnh hiӋu quҧ phương pháp chҭn đoán
7

Kӻ thuұt PCR phát hiӋn vi khuҭn lao
Mүu đӡm
Xӱ lý
Tách chiӃt & tinh sҥch
DNA
PCR đơn mӗi
ĐiӋn di & kiӇm tra sҧn phҭm
trên gel agarose 1%
(gen IS6110)
Trình tӵ gen IS6110
ThiӃt kӃ primer
INS1 ± INS2
8
So sánh và xác đӏnh hiӋu quҧ phát hiӋn vi khuҭn lao:
- Phương pháp nuôi cҩy đưӧc sӱ dөng như là chuҭn
vàng khi xác đӏnh hiӋu quҧ phát hiӋn vi khuҭn lao cӫa
phương pháp nhuӝm soi và PCR.
- HiӋu quҧ chҭn đoán cӫa mӛi phương pháp đưӧc xác
đӏnh dӵa trên đӝ nhҥy, đӝ đһc hiӋu, giá trӏ dӵ báo dương
tính và giá trӏ dӵ báo âm tính.
9
Phҫn III. KӂT QUҦ VÀ THҦO LUҰN
Bҧng 3.1. KӃt quҧ phát hiӋn vi khuҭn lao trong đӡm
KӃt quҧ
Nhuӝm soi
n (%)
Nuôi cҩy
n (%)
PCR
n (%)

Dương tính 57 (48,72) 87 (74,36)
83 (70,94)
Âm tính 60 (51,28) 30 (25,64) 34 (29,06)
10
Bҧng 3.2. So sánh kӃt quҧ phát hiӋn vi khuҭn lao trong
đӡm bҵng nhuӝm soi và nuôi cҩy
KӃt quҧ nuôi cҩy
Tәng sӕ
VK mӑc VK không mӑc
KӃt quҧ
nhuӝm
soi
(+)
49 8 57
(-)
38 22 60
Tәng sӕ
87 30 117
- Đӝ nhҥy: 56,32%
- Đӝ đһc hiӋu: 73,33%
- GTDBDT: 85,96%
- GTDBAT: 36,67%
11
Bҧng 3.3. So sánh kӃt quҧ phát hiӋn vi khuҭn lao trong
đӡm bҵng PCR và nuôi cҩy
KӃt quҧ nuôi cҩy
Tәng sӕ
VK mӑc VK không mӑc
KӃt quҧ
PCR

(+)
83 0 83
(-)
4 30 34
Tәng sӕ
87 30 117
- Đӝ nhҥy: 95,4% - GTDBDT: 100%
- Đӝ đһc hiӋu: 100% - GTDBAT: 88,24%
 4 trưӡng hӧp nuôi cҩy (+) nhưng PCR (-)
p khuyӃt gen IS6110
Sӱ dөng Multiplex PCR
12
Hình 3.1. ĐiӋn di đӗ gen IS6110 trên gel agarose 1%
IS6110 (249bp)
1 2 3 4 5 6 7
13
Hình 3.2. Vi khuҭn AFB trên tiêu bҧn nhuӝm Ziehl-Neelsen
14
Hình 3.3. Vi khuҭn lao mӑc trên môi trưӡng Ogawa
15
KӂT LUҰN
HiӋu quҧ cӫa phương pháp nhuӝm soi và PCR đơn mӗi
trong phát hiӋn vi khuҭn lao M. tuberculosis:
 Phương pháp nhuӝm soi:
Đӝ nhҥy: 56,32%
Đӝ đһc hiӋu: 73,33%
GTDBDT: 85,96%
GTDBAT: 36,67%
 Phương pháp PCR:
Đӝ nhҥy: 95,4%

Đӝ đһc hiӋu: 100%
GTDBDT: 100%
GTDBAT: 88,24%
16
KHUYӂN NGHӎ
Nghiên cӭu và xây dӵng phҧn ӭng Muliplex PCR sӱ
dөng nhiӅu cһp mӗi đӇ phát hiӋn đӗng thӡi nhiӅu trình
tӵ đích đһc hiӋu cӫa vi khuҭn lao nhҵm khҳc phөc hiӋn
tưӧng khuyӃt gen IS6110 ӣ mӝt sӕ chӫng vi khuҭn này.
17