Đề tài: Tìm hiểu về: phân tích clostridium perfrigens trong thực phẩm

Trường Đại Học Công Nghiệp Thực Phẩm TPHCM
Khoa Công Nghệ Thực Phẩm
Đề tài:
Tìm hiểu về: phân tích clostridium perfrigens trong
thực phẩm
GVHD: Nguyễn Thị Mỹ Lệ
Nhóm: 8

1. Nguyễn Thị Cẩm Hằng
2. Bùi Thị Diệu Hiền
3. Tống Thị Thùy Vinh
4. La Thị Trung Minh
5. Mai Thị Thúy
6. Nguyễn Vũ Khánh Trang
7. Nguyễn Thị Ngọc Anh
Danh sách nhóm
I. Giới thiệu về
clostridium perfrigens
II.Quy trình phân tích
III. Ví dụ
Mục Lục
I. Giới thiệu về
clostridium perfrigens
Đặc điểm
sinh nha
bào
vi khuẩn
Gram dương
họ
Bacillacae
sinh bào tử,

phần lớn di
động
tạo các khuẩn
lạc màu đen
trong môi
trường phân
lập quy định
hình que
phân giải
Sodium sulfil
hoặc phân
giải protein
tạo H2S.
kị khí
không
bắt buộc

Hình thái vi khu n Clostridium perfrigens.ẩ
Hình thái vi khuẩn Clostridium perfrigens.
Nơi sống
Phân động
vật
n c c ng ướ ố
rãnh
Phân người
Trong
th c ph m ự ẩ
nh t là ấ
th c ph m ự ẩ
đ h p).ồ ộ

bùn đ t,ấ
3. Đặc điểm nuôi cấy:

Trên môi trường Fluid Thioglycolate: sau 24 – 28
giờ nuôi cấy vi khuẩn phát triển tốt làm đục môi
trường.

Trên môi trường thạch máu: sau 24 – 28 giờ nuôi
cấy ở 37, vi khuẩn phát triển tạo khuẩn lạc tròn ướt
có hai vòng dung huyết xung quanh



Trên môi trường SPS, TSC agar vi khuẩn phát triển
cho khuẩn lạc tròn màu đen, do vi khuẩn sinh H2S
tác dụng với Fe (trong môi trường) tạo thành FeS có
màu đen.

Trên môi trường nước thịt gan yếm khí vi khuẩn
mọc rất tốt, nhanh chóng làm đục môi trường.
II.Quy trình phân tích:
10g mẫu + 90ml dd đệm 10-1
Tiếp tục pha loãng mẫu đến 10-2 10-3 10-4…
Lấy 1ml mẫu vào trong ống nghiệm vô trùng, đỗ 10-
15 ml môi trường ISA ở 450C lắc đều
Đỗ lớp ISA thứ hai cao 1-2 cm sau khi phần dưới
đông đăc, ủ 370C , 24-48 giờ
Đếm tất cả các khuẩn lạc màu đen xuất hiện trong
ống
Tính kết quả số clostridium trong 1ml/1g mẫu phân

tích
1. Các bước thực hiện

Bước 1: Chuẩn bị dịch đồng nhất hoặc pha loãng
mẫu để ở các độ pha loãng 10-1, 10-2, 10-3…

Bước 2: Dùng pipet lấy ở mỗi nồng độ pha loãng
1ml dung dịch huyền phù ban đầu hoặc 1ml mẫu thử
cho vào giữa đĩa pipet, mỗi nồng độ 02 đĩa.

B c 3: rót 15-20ml mô i tr ng TSC vào đĩa ướ ườ
petri và tr n đ uộ ề

Bước 4: Khi môi trường đã đong chặt, rót thêm một
lớp 10ml môi trường TSC phủ lên trên.

Bước 5: để đông và xếp các hộp Petri nắp ở phía trên
vào bình kị khí

Bước 6: đếm và ghi lại số lượng khuẩn lạc điển hình
ở các đĩa. Khuẩn lạc Clostridium perfrigens co màu
đen.
2. Xác nh n:ậ
Chon tổng số 10 khuẩn lạc điển hình từ các
đĩa đã đếm.
Cấy ria các khuẩn lạc này trên môi trường
thạch cơ bản TSC, phủ thêm một lớp 10ml
môi trường TSC cơ bản. Để đông và nuôi yếm
khí ủ 37oC ± 1oC, 18-24 giờ.
Tách m i đĩa ít nh t m t khu n l c ỗ ấ ộ ẩ ạ

đi n hình và d tách bi t.ể ễ ệ

3. Xác định tính sinh hóa
3.1. Thử nghiệm tính di động:

Làm môi trường thạch đứng Mannitol Mobility Nitrate. Cấy
sâu khuẩn lạc đã phân lập vào môi trường. Nuôi dưỡng trong
điều kiện yếm khí 37oC ± 1oC, 18-24 giờ.

Ki m tra ng môi tr ng đ xem d ng sinh tr ng ể ố ườ ể ạ ưở
d c theo đ ng c y sâu. S sinh tr ng khuy ch tán ọ ườ ấ ự ưở ế
vào môi tr ng t v t c y th hi n rõ tính di đ ng ườ ừ ế ấ ể ệ ộ
c a vi sinh v t nuôi c y.ủ ậ ấ
3.2. Thử nghiệm sự có mặt của nitric:

thêm 0,2-0,5ml thuốc thử phát hiện nitrit vào mỗi ống
môi trường nitrat di động (tiến hành trong tủ HOP). Sự
hình thành màu đỏ xác nhận phản ứng khử nitrat thành
nitrit. Nếu trong 15 phút mà màu đỏ không hình thành
thì thêm thì thêm một lượng nhỏ bột kẽm. Để yên 10
phút, nếu màu đỏ được hình thành sau khi thêm bột
kẽm thì không có phản ứng nitrat thành nitrit.
3.3. Xác định sự hóa lỏng gelatin:

Cấy các khuẩn lạc đã phân lập vào ống nghiệm chứa môi
trường gelatin-lactose. Nuôi dưỡng trong điều kiện yếm
khí ủ 37oC ± 1oC, 18-24 giờ. Kiểm tra ống môi trường
xem có sự sinh khí và có chuyển màu vàng không (tạo
acide ) cho biết sự lên men của lactose. Làm lạnh 1giờ ở
5oC và kiểm tra sự hóa lỏng của gelentine. Nếu môi

trường vẫn rắn, nuôi cấy thêm 24 giờ và kiểm tra sự hóa
lỏng của geletine.
III.Ví d :ụ
Nghiên c u và phát ứ
hi n vi khu n ệ ẩ
Clostridium perfrigens
trên th t gà t i t i ị ươ ạ
m t s ch TP.nha ộ ố ợ ở
Trang.

Áp dụng quy trình phân lập vi khuẩn C. perfringens
theo quy trình phân lập của Bộ môn nghiên cứu Vi
trùng Phân viện Thú y miền Trung:

Sơ đồ phân lập:
1. Các bước thực hiện