Môn: Phân tích vi sinh thực phẩm PHƯƠNG PHÁP PCR

BỘ CÔNG THƯƠNG
TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP HCM
KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM

Môn: Phân tích vi sinh thực phẩm
GVHD: Nguyễn Thị Mỹ Lệ
Lớp: 01DHTP3
PHƯƠNG PHÁP PCR

  
 
    !
 "# 
 $%&!
! "'( 
 )*#+ 
GIỚI THIỆU PHƯƠNG PHÁP POLYMERASE CHAIN REACTION(PCR)
PHƯƠNG PHÁP PCR VÀ ỨNG DỤNG
XÁC ĐỊNH SALMONELLA SPP., SALMONELLA ENTERICA TRONG THỰC PHẨM BẰNG KỸ THUẬT PCR ĐA
MỒI



 !"#$!#%!#&'
(%)
•
%*+,-'./0-1)23-4(567-1&89:*+,--1;-725<2=>8?2@>
#AB:'(<CA)D89*-**-1<CA)
*+&$,"# 
/012&
•

E1::A0*,A7FGH/-+I+JK
•
L2M2)@-C)<N:0 O0*)-/I+JJ)-*-7*
•
E1::A0*,A7FGH/-+I+JK
•
L2M2)@-C)<N:0 O0*)-/I+JJ)-*-7*
3

@):'(:P/2)@52Q-R-S58967-1&.AT)@-2,
D5U):+N1AN23-4(A(+P<4A
45&&6#

%
&72&
89:&
9;%
V(895W=<?--1;-7:N)X6ND2)@YZ+@2)@=#23-?-8?+$
):):N)X6N
V(895W=<?--1;-7:N)X6ND2)@YZ+@2)@=#23-?-8?+$
):):N)X6N
[)@5=#<CC+T\)]-*+@2.>=O/Q+$F+$\9>+$'(H
2)@+$]23\/2/23+<]-2=-4(5
2)@+$]23\/2/23+<]-2=-4(5
^O2=2D/:)@:N)X6N65">6">6_">6^"
`a+N-N1+AbXAFbH>+,-5):+N1AN
`a+N-N1+AbXAFbH>+,-5):+N1AN
3
<





=





%


1


>



#


-

?

@7AB
@5&C8D$/
1(#-?#)
DE ?& .!F B

 !"#$!(#-?GHI0)
JKL%
M
NO
^/-*=D?DCc"^d
B P
Đoạn mồi
QF !BR !"#$!
Các nucleotid
- DNA thật tinh sạch, đặc biệt là DNA thu nhận trực tiếp từ dịch chiết tế bào
sẽ cho kết quả tốt nhất, tuy nhiên vẫn có thể sử dụng mẫu có độ tinh sạch
không cao để sử dụng.
- Mẫu DNA không được dài quá, thường khuếch đại tốt nhất đối với đoạn
DNA dài khoảng 1÷1,5kb.
B P
B P
e/250P+,-:'(-f>8)CY.100 ng (1g =
109ng).
S? 1
-
Đoạn mồi tức là những đoạn DNA đơn (oligonucleotide) có kích thước chỉ
vài chục base (18-30).
Vai trò chính :
- Quyết định nên tính đặc hiệu của thử nghiệm
- Khởi động Enzyme polymerase
Nguyên tắc
+ Cả hai mồi trong một phản ứng PCR phải có nhiệt độ nóng chảy gần như nhau
+ Mồi phải chọn đặc trưng cho DNA cần khuếch đại và không trùng với các trình
tự lặp lại trên gen.
+ Tránh sự bổ sung giữa hai mồi

+ Kích thước tối thiểu của mồi là 18 base
+ Khoảng cách giữa hai mồi tốt nhất là 150-500 base.
QF !BR !"#$!
%*Na+xúc tác )b/-1;:]1//:N)X6N5>>_>^0*)+@5+P-4(>C:*+N):+N1AN
2'(-2,)
EAg6h`a+N
):+N1AN=ij+,-
AB23+k
UE3+-1-9X-1&/-l'P6m28n+Of-
U%'(Na+N=-?-:*h-,0*):'(50*8-'PCc
UE9&-INa+Nb/oFp:H-1&p:-4-3qCc
^/:N)X-
-
^=CO<B:)@:N)X6N6@-1)A-'k65">6">
6_">6^"
-
$2,+r:)@:N)X6NCT6@#<Z>c0P8)C
sp)+r:)@:N)X6N
?+f--1@-/#<Z-;At#1:r8A)u>?$2,/:N)X6N)-f
.At6m2?-'(A)uC
&
&
I+&-
I+&-
'PAg6h)Cc"^dC-v-X8?->89c)*)>89c<f-8w+,--*=*)
8/
U62+f-D"^d<)$+/-*=E^:>^:
>
1A


BE^:O=:*+-IbCDCc
^:

:*#-B=-?-23Na+ !"#$!)@-2,
1AO0-1xy)6642
U?-<6R23X?*Cc"^dW=2/c2'(&=-24-2,-v-0*
\/
U-+D+,-&c=2'(X?*-1&R+,-:)@-?-<
Uz+6R)/CcCR+,-&cC-,R+,-830;2Qq-1 
-D/B*{'2,X?\iyB0*<,v-@)-D-?-<OC'T:P2?
b/-1;8?2@
|}~^•"€•_"^d
T%
U,-<*+2.C23:v/'.-1;8w-0*1
/+:23+/-7
U,-<,0\g:j23P/'.-1;2M@0*)+/
U$D"^d:*.+*/8w-2'(-7bA72 
83D<,0\g:j
2)@-1)+,-8wDCc"^d
#-?87AU-/r5-S+@29-*6@+@2.>-2,-I:&At/0‚=B61)NDr5>-2,-I:&JU
J!ƒ^23-/A(51lT2)@*8)CkUi-

#-?85&CU]Q+$2Q-1'-N)&-]<4AV8A(5-/1>-2,2'(@\B23+$O-3]0*)
A(52.-2,2)@*h-,0*)2)@+$0*-'l-f.-2,<?q8)CU!ƒ^l<]-Q-SU
i-
#-?GHI0&VFN\-NA)Hk-4(r5+PBr5B5):+N1AN]X?0*)A(
-1BO<]-2=</+0*)0*)@-2,6-N)A(5-2,8u)6*h-,5U):+N1ANl
D<'P*h-,0*)C5U):+N1AN0* 6*+C5=8?2@'+,-b-]<„
i-
J/0E&-W &6#%

Ưu
điểm
•
E-'PD-1;-7=8?2@k'./"^d89)@-2,2'(0Py2)@5:P.
8<
•
v-2,0A0v-6-1)+m-7…+-'l-f>&2AB-1'l(=-IA
E&-W
•
"'./*89#<-2'(-?<*)AB0P-?<*)?->6)0vO-36m2?-1'l(6'.
qC6)5-S-?<*)?-
•
"'./*W/-2'(0A0v-O-1)+mc89\/22'(AB:'(0A0v-O
-1)+m
•
^)0/-/0A0v-2.:†-1)-7…+-'l-B8u+
NO
JKL
%
XLSYB*TZQ**B[\
B*TZQ**BQQ%B
%Z]T
@^3_`%SBTa
%bXLSYB*TZQ**B@^%
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
4,O!+m-7…+2'(2'(+T/(-@2<*-*B^=.0*)<4
A/0* k
•
+m--N)>+m--<x>!+m--*>+m:x-1]>2Y-1c*>
•

+m0Y-1c*>+mN+>+mC:h>+m<8>+m6N)0*+mAx
?-
=
1/$/=
VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU