Xây dựng phương pháp điều chế cao khô và phân lập puerarin từ sắn dây

 

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI






PHẠM THỊ PHƯƠNG DUNG



XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐIỀU CHẾ
CAO KHÔ VÀ PHÂN LẬP PUERARIN
TỪ SẮN DÂY
LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC










HÀ NỘI - 2014

 
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI







PHẠM THỊ PHƯƠNG DUNG




XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐIỀU CHẾ
CAO KHÔ VÀ PHÂN LẬP PUERARIN
TỪ SẮN DÂY
LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC
  THUC
: 60720402

 : TS. Nguyễn Văn Hân








HÀ NỘI – 2014


LỜI CẢM ƠN

       
áo TS. Nguyễn Văn Hân, l 

 
               

u







Phạm Thị Phương Dung



MỤC LỤC
DANH MC CÁC KÝ HIU, CH VIT TT
DANH MC CÁC BNG, BIU
DANH MC CÁC HÌNH V TH
T V 1
 TNG QUAN 2
1.1. Vài nét về cây sắn dây 2
1.1.1. Đặc điểm thực vật và phân bố của cây sắn dây 2
1.1.2. Thành phần hóa học của rễ củ sắn dây 2
1.1.3. Tác dụng dược lý 4
1.1.4. Công dụng 6
1.1.5. Các nghiên cứu chiết xuất isoflavonoid từ sắn dây 6
1.2. Puerarin 12
1.2.1. Công thức hóa học 12
1.2.2. Tính chất lý hóa 12
1.2.3. Kỹ thuật phân tích 13
1.2.4. Tác dụng sinh học của puerarin 15
1.2.5. Các nghiên cứu tinh chế puerarin hiện nay 19
1.3. Cao thuốc 20
1.3.1. Khái niệm 20
1.3.2. Phân loại 20
1.3.3. Kỹ thuật điều chế 21
1.3.4. Các chỉ tiêu chất lượng của cao thuốc 22
 NGUYÊN VT LIU, TRANG THIT B VÀ  
NGHIÊN CU 23
2.1. Nguyên vật liệu, thiết bị 23

2.1.1. Nguyên liệu 23
2.1.2. Dụng cụ 23
2.1.3. Phương tiện và máy móc 23
2.2. Nội dung nghiên cứu 24
2.2.1. Chiết xuất isoflavonoid từ nguyên liệu khô 24
2.2.2. Chiết xuất isoflavonoid từ nguyên liệu tươi 24
2.2.3. Điều chế cao khô 25
2.2.4. Phân lập puerarin và daidzin 25
2.3. Phương pháp nghiên cứu 25
2.3.1. Phương pháp định lượng isoflavonoid toàn phần và puerarin 25
2.3.2. Phương pháp định tính các isoflavonoid bằng sắc ký lớp mỏng 29
2.3.3. Phương pháp chiết xuất isoflavonoid từ sắn dây khô 30
2.3.4. Phương pháp chiết isoflavonoid từ sắn dây tươi 30
2.3.5. Phương pháp tinh chế dịch chiết sắn dây tươi 31
2.3.6. Phương pháp điều chế cao khô 32
2.3.7. Phương pháp phân lập puerarin và daidzin 35
2.3.8. Phương pháp xác định cấu trúc puerarin và daidzin 35
2.3.9. Phương pháp xác định khối lượng cắn trong dịch chiết 35
2.3.10. Phương pháp xác định mất khối lượng do làm khô 36
 3. KT QU NGHIÊN CU 37
3.1. Định lượng isoflavonoid toàn phần trong nguyên liệu 37
3.1.1. Đường chuẩn isoflavonoid 37
3.1.2. Định lượng isoflavonoid trong nguyên liệu 38
3.2. Định lượng puerarin trong nguyên liệu 39
3.3. Chiết xuất isoflavonoid từ sắn dây khô 40


3.3.1. Khảo sát các dung môi chiết 40

3.3.2. Tinh chế dịch chiết sắn dây khô 44
3.4. Chiết xuất isoflavonoid từ sắn dây tươi 45
3.4.1. Chiết isoflavonoid từ sắn dây tươi 45
3.4.2. Tinh chế dịch chiết sắn dây tươi 46
3.5. Điều chế cao khô từ dịch chiết sắn dây tươi 47
3.6. Phân lập puerarin và daidzin 49
3.6.1. Phân lập daidzin 49
3.6.2. Phân lập puerarin 53
3.6.2.1. Tiến hành 53
N 57
4.1. Về nguyên liệu chiết xuất isoflavonoid 57
4.2. Về phương pháp bào chế cao khô 57
4.3. Về phương pháp phân lập puerarin và daidzin 58
KT LU XUT 60
KẾT LUẬN 60
ĐỀ XUẤT 61




DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT
AMPK
:
5'-adenosine monophosphat-activated protein kinase
ATP
:
Adenosine triphosphat
CV
:
Coefficient of variation


DEPT
:
Distortionless Enhancement by Polarization Transfer

:

ESI  MS
:
ElectroSpray Ionization - Mass spectrometry
- Ion hóa  phun mù 
GOT
:
Glutamic oxaloacetic transaminase
HDL
:
High-density lipoprotein
HPLC
:
High Performance Liquid Chromatography

HSCCC
:
High Speed Counter Current Chromatography

IL
:
Interleukin
IR
:

Infrared

LDL
:
Low-density lipoprotein
LPS
:
Lipopolysaccharid
mTOR
:
mammalian Target of Rapamycin

MAPK
:
Mitogen-activated-protein-kinase
NMR
:
Nuclear magnetic resonanc

1
H-NMR
:

13
C-NMR
:

PG
:
Pueraria glycosid

RSD
:
Relative standard deviation



TLC
:
Thin Layer Chromatography

TNF
:
Tumor necrosis factors

UV
:
Ultraviolet




DANH MỤC CÁC BẢNG, BIỂU
1.1. Công thc cu to ca mt s isoflavonoid tng gp trong sn dây 3
t xut sng dùng 9
2.1. Hóa cht s dng 23
3.1. M quang ca dãy dung dch chi chiu tc sóng 250 nm. . 37
3.2. Kt qu ng isoflavonoid trong nguyên liu 39
3.3. Din tích pic sc ký ca dãy dung dch chun 39
ng puerarin trong nguyên liu thu mua  Phú Th 40
3.5. Kt qu kho sát các dung môi ethanol có n khác nhau 41

3.6. Kt qu kho sát chit isoflavonoid t sn dây khô bnc
43
3.7. Kt qu tinh ch dch chit sn dây khô 44
3.8. Kt qu chit isoflavonoid t s 45
3.9. Hiu suc sau tinh ch c t 500 ml dch
ching khoc liu) 46
3.10. Dch tinh ch y 47
3.11. Mt s ch tiêu chng ca cao khô phun sy. 48
3.12. Kt qu  hng ngoi ca daidzin 51
3.13. Kt qu  khng (ESI-MS) ca daidzin 52
3.14. Kt qu  NMR ca daidzin 52
3.15. Kt qu  hng ngoi ca puerarin 54
3.16. Kt qu  khng (ESI-MS) ca puerarin 54
3.17. Kt qu  NMR ca puerarin 55




DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ
1.1. Sn dây 2
2.1.  chit isoflavonoid t s 31
2.2. Quy trìu ch cao khô 34
Hình 3.1. Ph UV-VIS ca dung dch chi chiu 37
ng chun biu th ma n puerarin và m
quang 38
 th biu din ma n puerarin và din tích pic
sc ký 40
3.4. Bi ng isoflavonoid chic bi các dung môi ethanol
có n khác nhau. 42
nh 3.5. Bt cao khô phun sy 48

  49
 50
Hình 3.8. Hình nh sc ký lp m ngoi 254nm ca daidzin 51
3.9. Công thc cu to ca daidzin 52
Hình 3.10. Hình nh sc ký lp m t ngoi 254nm ca puerarin 53
3.11. Công thc cu to ca puerarin 55


1

ĐẶT VẤN ĐỀ

Sn dây t c s dng trong dân gian. Theo y hc c truyn, r sn
dây là mt v thuc mát, có tác dng gii nhit, sinh tân, chng khát, làm ra m hôi,
d tiêu, ch t, cha các chng st nóng, nhu, mn nga, rôm sy, viêm rut,
 dày G giu công trình khoa hc chng minh
tác dng ca dch chit r sn dây: chu [34], chng oxy hóa [9], [13], gii
u [23]. Thành phn isoflavonoid trong r c cho là cht có tác dng. Trong s
các isoflavonoid sn dây, puerarin là chng lc cho là thành
phn có tác dng ch o. Hin nay  Trung Quc chit xut và
phân lp thành công t r sn dây phc v cho cho vic bào ch các dng thuc quy
c (viên nén, viên nang, thu cha bnh.
Ti Vit Nam, sc trng khá ph bi yu nhm ch
tinh bt. Vai trò ca sn dây trong chit xut isoflavonoid y
. Hin nay, isoflavonoid nguyên liu và puerarin vn phi nhp ch yu t Trung
Quc vi giá thành cao. Vì vy nu có th nghiên cu chit xut thành công
isoflavonoid và puerarin t r c sn dây song song vi vic ch tinh bt có th giúp
ch ng v ngun nguyên liu isoflavonoid n xut và
tn dc ph phm ca quá trình sn xut tinh bt sn.
Nhm góp ph  t xut isoflavonoid t r sn dây

phù hp vu kin thc tin  Vit Nam, chúng tôi tin hành thc hi tài:
Xây dựng phương pháp điều chế cao khô và phân lập puerarin từ sắn dây
vi hai mc tiêu chính sau:
1. Xây dng quy trình u ch cao khô phun sy t r c sn dây.
2. Phân lc puerarin t r c sn dây.

2

Chương 1. TỔNG QUAN
1.1. Vài nét về cây sắn dây
1.1.1. Đặc điểm thực vật và phân bố của cây sắn dây
Sn dây có tên khoa hc là Pueraria thomsonii
Benth., h u  Fabaceae. Mt s tài liu Trung Quc
ghi loài Pueraria lobata (Willd.) Ohwi hoc P.
pseudohirsuta Tang et Wang [3]n Trung Quc
ghi nhn c hai loài Pueraria lobata và Pueraria
thomsonii [32].
Sn dây là mt loi dây leo, dài có th n 10m, lá
kép gm ba lá chét. Cung lá chét gia dài, cung lá chét
hai bên ngn. Lá chét có th phân thành 2-3 thùy. V mùa
h tr hoa màu xanh tím, mc thành chùm  k lá. Qu lou có nhiu lông. C
dài to nng có th ti 20kg, nhi
Mun tr  rác và mùn ri lt xp li.
n tháng 1-2 giâm cành vào các h  ng kt hp làm
giàn lng vùng chuyên tr ch tinh bt ví d làng
Cao Xá thuc huyn Châu Thành, tnh Tây Ninh mn xut khong 20 tn
tinh bt [3].
R c thu hoch t n tháng 3- Trung Qui ta
ng thu hoch s[32] ch v a
sch, bóc b lp v dày bên ngoài, ct thành khúc dài 10-15 cm. Nu c to thì b

d có nhng thanh dày khong 1cm, c sy
khô. Loi tri tt. Mun ch tinh bt sn dây thì bóc v
hoc mài trên tm sc thng l, hoc xay bc ri
nhào lc li 1 ln n lng gn
ly tinh bt rc sy khô [3].
1.1.2. Thành phần hóa học của rễ củ sắn dây
R c u cha tinh bt, t l khong 12-[3]
n 40% theo khô [4]. Ngoài ra còn có saponin [4], [20] và các flavonoid thuc
1.1
3

nhóm isoflavonoid. T loài Pueraria lobata      c các

các nhà nghiên cu Nhn thêm 13 cht mn và
các glycosid ca daidzein, genistein [20]. Các nghiên cu ch ra rng
puerarin, daidzin, daidzein, genistein và genistin là các isoflavonoid chim t l ln
trong r c các loài sn dây, và cho các tác dng sinh h [46], [11],
[37].
O
R
4
R
1
R
2
O
R
3
O

R1
R2
R3
R4
Puerarin
H
H
Glu
OH
Daidzin
H
Glu
H
OH
Daidzein
H
H
H
OH
Genistein
OH
H
H
OH
Genistin
OH
Glu
H
OH

1.1
n thm hin tng 52 flavone t các loài
Pueraria [44]Pueraria lobata là loài ng flavones cao nht và
có nhic phân lp nht (36 cht) [44].
ng isoflavone trong r c sn dây ph thuc nhiu vào loài, vùng
trng trt [44] và thi gian thu hái [11]  ng flavone trung bình  loài
Pueraria lobata là 7,ng flavone trung bình  loài Pueraria
thomsonii ch có 0,93% [44]ng flavone  loài Pueraria lobata trng ti
Shanxi lên ti 10,ng này khi trng ti Jiangxi ch t 3,3%
[44]. Tui và thu t  tng
isoflavone ca loài Pueraria lobata trng ti Huoshan. R c i thu hái vào
khong tháng Giêng s cho n isoflavone cao nht 7,26%. Tu
4

hoc thu làm gim n isoflavone ca sn
dây [11].
1.1.3. Tác dụng dược lý
1.1.3.1. Tác dụng trên tim mạch
Th nghim tác dng trên chó bng cách tiêm flavon toàn phn ca sn dây
cho thy có tác dng mng thi ging tiêu th oxy ca
m sc kháng m làm
tiêu kit hng catecholamin trong mô tim, dng isoflavon toàn phn vi liu 30
mg/kg và puerain vi liu 20 mg/kg có tác dng mch vành và
gim sc kháng mch vành. Nhng kt qu này ging vi kt qu thí nghim trên
chó không dùng reserpin. u này chng t hing làm giãn mch vành ca
sn dây không liên quan ti catecholamin mà là do tác dc tip [8].
1.1.3.2. Tác dụng hạ huyết áp của cao sắn dây
ch vi liu 5-30 mg trên chó, mèo có tác dng h huyt áp. Cao
sn dây vi lich có kh i kháng vi tác dng kích
thích tim ca isoprenalin, ngoài ra còn làm gim nhp tim và gây h huyt áp [8].

1.1.3.3. Tác dụng chống loạn nhịp tim
So sánh tác dng chng lon nhp tim ca puerarin, daidzein và dng chit
cn t sn dây trên chut cng trng và chut nht trng cho thy tác dng ca
i mnh, cho hiu qu rõ rt. Dng chit cn có tác dng ging vi
u này chng t daidzein là thành phn ch yu có tác dng chng lon
nhp tim. Puerarin vi ling kháng rõ rt vi lon nhp tim
do aconitin và bari clorid gây nên, gim nh m lon nhp do thi
tác di kháng vi rung tht không bng daidzein [8].
1.1.3.4. Tác dụng đối với tuần hoàn não
Th nghim trên chó gây mê, flavon toàn phn ca sn dây bng tiêm
ng mch cnh vi liu 0,1-         -
134%, nu cho thuc bch flavon toàn phn vi liu 10-30
mg/kg ch     nh nhân cao huyt áp,
5

flavon toàn phn tiêm bp vi liu 200 mg giúp cái thin tun hoàn não cho 53%
bnh nhân, làm gim tr lc mch máu não [8].
1.1.3.5. Tác dụng đối với hệ thần kinh
Dch chit sn dây vi liu 2 g/kg cho thng vào d dày trên th gây st bng
ng h nhit, bt sn dây có tác dc sn
dây vi liu 6 g/kg cho thng vào d dày trên chut nht trng, có tác dng ci thin
hing trí nh b t[8].
1.1.3.6. Tác dụng đối với cơ trơn
Trong các dch chit b    c t sn dây thì dng
PA3, PA4 có tác dng c ch co bóp hi tràng cô lp chut lang kiu papaverin,
dng PM1, PM3 li có tác dng gây co tht. Daidzein có tác dng gii co thi
vi rut np ca chut nht trng, tác dng này bng khong 1/3 tác dng
ca papaverin [8].
1.1.3.7. Tác dung hạ đường huyết và lipid huyết
c sc sn dây vi liu 6-8 g/kg cho thng vào d dày th ng có

tác dng h ng huy i kháng vi hing huyt
ây nên. Puerain vi liu 500 mg/kg hoc dùng liu thp phi
hp vi aspirin 100 mg/kg dùng liên t ng d dày, có tác
dng làm gim cholesterol huyt thanh ca chut nht tr    
cholesterol b c không có tác dng h ng huyt
hay lipid huyt [8].
1.1.3.8. Tác dụng chống ung thư
Dch chit cn t sn dây vi ling vt thí nghim có tác
dng c ch nhnh s phát trin ca t bào sarcom 180, u báng Ehrlich và t bào
  i Lewis. Daidzein vi n  14µg/ml có tác dng c ch s 
ng ca t bào HL-60 (promyelocytic leukemia) [8].
1.1.3.9. Tác dụng chống oxy hóa
Thí nghim trên chut gây ti ng bng cách tiêm phúc mc
streptozotocin. Thí nghim s dng cao sn dây cha khong 10,42% puerarin và
mt vài cht liên quan, vi ling ung trong 3 tun, kt qu
6

cho thy n  malondialdehyd trong huy -c s d  t du
hiu ca cht béo b m xung m  chut khe mnh,
và giu tr tích cc hàng ngày bng tocopherol acetat
vi liu 50 mg/kg [8],[9].
1.1.3.10. Các tác dụng khác:
Dung dch puerarin 0,2-1,6% vi lii da chut lang theo
dõi phn ng giác mc và da cho thy tác dng gây mê cc b. Thí nghim trên
chut hamster, cao sn dây có tác dng chng nghiu, trên chut cng trng,
daidzein có tác dng h thu trong máu và rút ngn thi gian ng do
   i vi gan ca chut nht trng gây nhi c bng CCl
4
,
isoflavonoid chit t i liu 250 mg/kg có tác dng c ch 30,7% ho

men GOT [8].
Nghiên cu c Th ng minh rng cao chit isoflavonoid
t c sn dây Pueraria thomsonii Benth. có hot tính ni tit kiu estrogen trên
51,5% chut nht trng cái vi liu uu này cho thy hot
tính estrogen ca hn hp isoflavonoid chit xut t c sn dây là khá rõ rt [7].
1.1.4. Công dụng
Theo y hc c truyt v thuc cha st nhc,
kit l, ban sn Vit Nam. Tinh bt sn dây pha
v ng u gii khát [3]. Ngoài ra trong y hc c truyn còn
dùng hoa ca dây sn dây v làm thuu [3].
n Trung Quc, sn dây có tác dng h st, kích thích tit dch
, cm a chy. Do vy, sc s d u tr su, khát
c, ting, ban si, kit l hoc a chy cp, c  
huyt áp [32].
1.1.5. Các nghiên cứu chiết xuất isoflavonoid từ sắn dây
1.1.5.1. Chiết kiểu truyền thống
Mc dù vi s phát trin ca khoa hc k thut hit nhiu
áp chit hiu qu ng dt xut theo kiu
7

truyn thng vu tiên khi nghiên cu v c liu mi.
Ch có him chic li
gin mi có th áp dng các bin pháp ci ti nâng cao hiu su
chng sn phm chi, trong rt nhiu nghiên cu chit sn dây
c thc hin trên th git hc các nhà khoa
hc quan tâm thc hin. Mc tiêu ca các nghiên cu này hu h tìm ra
c loi dung môi, nhi, thc chit isoflavonoid t
sn dây.
Ngay t ng s c gia hai dung
môi c và cn, dung môi cn cho hiu sut chi tinh ch sn

ph u kin chit xut ti
n dây là chit bng ethanol 60% trong 6 gi  60C [25].
      ng s vn tip tc nghiên cu chit
isoflavonoid t sn dây bn th dng dung môi
chic. Mc dù không phi là mu
nghiên cu song nu tin hành theo pa Han Jian vn có th chit
ng ln puerarin t sn dây. Chic  u kin tt 2 ln,
mi ln vi 10 ln th c, thi gian chit lt là 1,5 gi và 1 gi [14].
 nâng cao hiu sut chii dung môi chit,
s dng h dung môi thay vì các dung môi  n là
chui nghiên cu ca Hua-Neng Xu và cng su tiên, nhóm nghiên c
tìm ra h dung môi hai pha n-butac t l 1:1 (v/v) không nhng dùng
c cho quá trình chit rn  lng và tinh ch lng-lng mà còn giúp chic
daidzein và isoflavonoid toàn phn vi hiu suu so vi dung môi
chit mng [15]. Vi h 
c tách và tinh ch t pha n-butanol [15]c tinh ch t phn
c bu chnh pH và lc vi n-butanol. Quá trình tinh ch 
i cho ra sn phm tinh ch sch khi phân tích sc ký [16].
Vi nhng kt qu c, các tác gi n hành tip nh
di các yu t có th n quá trình chit isoflavonoid t sn
8

dây bng h dung môi hai pha n-c. Cui cùng, rút ra nhng kt lun
n ca h dung môi hai pha và nhi chit là nhng yu t
chính ng ti t và hiu sut chit isoflavonoid toàn phn; h dung
môi n-c vi t l 1:1 là có hiu qu ; hiu sut chit và h s
phân b  tt c các h dung ; nhng
kt qu c t mô hình là hoàn toàn phù hp vi d liu thc nghim
[17].
Ti Vi    D       u chit

isoflavonoid t sn dây bng dung môi phân ct h
Kho sát ba dung môi chit là ethanol 90
o
, methanol và ethyl acetat. Da vào t
l phng cc và kt qu nh tính isoflavonoid trong dch
chit tác gi chn ethanol 90
o
là dung môi s d chit isoflavonoid t sn
dây [5].
1.1.5.2. Chiết dưới áp suất cao
So v t hi áp sut cao cho hiu sut
chin. Khi s dng cùng dung môi chit là ethanol 95%, chii
áp sut cao giúp ching puerarin cao gp 1,8  2,4 lng daidzin
cao gp 1,4  1,8 lng daidzein cao gp 2,6  3,7 ln so v
h[31].
g nhn thy rng, hiu sut chit isoflavonoid ph thuc vào
nhi chit khi chii áp sut cao. Hiu sut chi
[31].
1.1.5.3. Chiết bằng siêu âm
     t bng siêu âm v   t
truyn thng, Yang Hu và cng s nhn thy rng s dng siêu âm có th rút
ngn thi gian chit xung 20 ln so vt hu sut
chit cáp chit bt 19% sau 20 phút, trong khi hiu
sut chit ct h c 14,3% và 16,5% sau 1 và 2
gi. Chit bc hiu sut này sau 5 phút. Mt khác, siêu âm
không làm phân hy ti các thành phn hot cht có trong dch chit [45].
9

u này, Yang Hu và cng s ng minh rng,
hiu sut chit khi s dng siêu âm b ng bi dung môi chit [45], t l

    ng siêu âm [31]. Trong các dung môi chi c,
methanol, ethanol và ethyl acetat i ta nhn thy dung môi chit t
c t l 7:3. Mc là dung môi chit cho hiu su
li hòa tan nhiu tinh bt trong dch chic, dch
chic không trong và cao do dính khó thu hi [45].
Không ch có hiu qu t hn thng, Mei-
Hwa và cng s còn chc rng, chit bng siêu âm còn cho hiu sut
chii áp sut cao [31]ng so sánh
t hn thng, áp sut cao và siêu âm:
1.2
Yếu tố
Truyền thống
Dưới áp suất cao
Siêu âm
Thi gian chit
Tn thi gian
Ngn )
Trung bình (1-2h)
Hiu sut chit
Thp
Trung bình hoc cao
Cao
Dung môi
Tn kém
Tn nhiu
 duy trì áp sut cao
Trung bình
Nhi
Cao hoc
nhi phòng

Nhi cao
áp sut cao
Nhi phòng
Chi phí
Thp
Cao
Trung bình
     ng s  n hành nghiên cu chit
isoflavonoid t r Pueraria lobata bu vào thay
i t 0-650W). Tác gi nhn thu vào và thi gian chit là các
yu t chính nh hng ti hiu sut chit khi s dng dung môi chic, n-
butanol, ethanol 96% và ethanol 50%. Dung môi chit là ethanol c
cho hiu sut chit cao ethanol 95% và n-butanol. T chit và hiu sut chit
t khi phi hp thêm siêu âm vi tt c các dung môi chit k trên.
u vào càng ln trong khong 0-650W thì hiu sut chit
10

   ng thi, nghiên c   ra rng hiu sut chit
isoflavonoid toàn ph dng siêu âm [41].
1.1.5.4. Chiết bằng vi sóng
ng s n hành chit isoflavonoid t sn
dây bng vi sóng. Kt qu gây bt ng khi thi gian chit c
kéo dài 1 phút, ngt nhiu so vt truyn thng.
Nhóm nghiên cn thy rng dung môi chit, thi gian chit, nhi
và áp sut chit là nhng yu t     ti hiu sut chit ca
 pháp. Trong s các dung môi th nghim, ethanol 70% cho là dung môi
hiu sut chit isoflavonoid cao nh chic li là dung
môi tt [47].
Vi sóng không ch giúp rút ngn thi gian chit mà còn làm cho quá trình cô
cao tr t nhiu. Yang Hu và cng s c

rng, s dng vi sóng có th rút ngn thi gian sy khô dch chit xung 10 ln
so vt thu hng [45]a, sóng viba
không gây ra nhng tác ng nào làm ng ti cu trúc và thành phn các
cht trong dch chit sc [45].
1.1.5.5. Chiết bằng dung môi siêu tới hạn
Trong nht xut bng dung môi ti hc áp dng
rng rãi trong thc phm và y hc. CO
2
siêu ti hn là dung môi ch yc s
dm ca CO
2
siêu ti hc, không
gây cháy n, giá thành r và d loi khi sn phm cui.
Nghiên cu chit puerarin t r c sn dây Pueraria lobata, Lingzhao Wang
và cng s nhn thy bn yu t chính ng ti hiu sut chit puerarin t
r c Pueraria lobata là áp sut, nhi, thi gian chit và th ng dung
môi.  áp sut 20 Mpa hiu sut chic là 5,8 ± 0,3 mg/g, áp su
và thu làm gim hiu sut chi y, chit 
nhi 50C s cho hiu sut chit cao nht, nhit  c thu
làm gim hiu sut. Thi gian chit càng ln, kh t kit puerarin càng
c bit là trong khong thi 100 phút. Hiu sut chit puerarin
11

t khi kéo dài thu này có th gii
 tan ca puerarin trong dung môi ti hn và t chuyn khu là
các yu tt ph thuc vào thi gian. Do vy, thi gian chit xut càng ln s giúp
c nhic cht vào dung môi chiu sut
chic s dng là ethanol tuyi ta thy rng
hiu sut chit puerarin s t giá tr tnh ethanol
(120 g) [26].

T nhng kt qu k trên, các tác gi c hin tc
u kin chit puerarin t r c Pueraria lobata bng dung môi siêu ti
hn  20,04 Mpa, 50,24C và th  ng dung môi s dng là 181,24 ml
ethanol trong tng khong thi gian chit là 90 phút [27].
1.1.5.6. Chiết bằng dung môi ion
Dung môi ion lng là dng mui nóng chy do trong thành ca nó có c
cation và anion  dng không phân ly. Phng là các cation h
[38].
Dung môi ion lng có nhi nóng chy khá thi 100°C và
ng  dng lng  nhi phòng [38].
Trong chit xut hii, dung môi ion lc s dng thay th cho các
dung môi hng nh tính chn lc
c, methanol; chic các phân t hc t
glycolipid, kháng sinh, artermisinin và alkaloid  d dàng ra sch hoc lo
khi sn phm chit cui [38].
Tuy nhiên, dung môi ion lm là trong quá trình chit xut,
mt lng ln dung môi ion lng k c có th b lc to thành h hai pha
 nht, t trng, ging chit và tính
chn lc ca dung môi trong quá trình chit [18], [ 38] hn ch m
này, Jie-Ping Pan và cng s o ra các h  
chit puerarin t r Pueraria lobatae t các dung môi ion 1-carboxymethyl-3-
methylimidazolium tertrafluoroborat ([COOHMIM]BF
4
), 1-hydroxyethyl-3-
methylimidaziolium tertrafluoroborat ([C
2
OHMIM] BF
4
), 1-butyl-3-
12

methylimidazolium hydroxid ([BMIM]OH) và 1-butyl-3-methylimidazolium
bromua ([BMIM]Br) vi các mu
2
CO
3
, Na
2
CO
3
, K
2
HPO
4
, (NH
4
)
2
SO
4
,
Na
2
SO
4
, NaCl, NaH
2
PO
4
. Trong các h hai pha dung môi ion kho sát, h

K
2
HPO
4
0,30-0,42 g/mL, [BMIM]Br 0,30-0,36 g/ml và 1,0 ml dung dch gc
puerarin, cho hiu sut chit puerarin cao nht i mt ln chit
duy nht [18].
Li dm ct bng siêu âm và 
chit bng dung môi ion, Jie-Ping Pan và cng s tip tc nghiên cu chit
puerarin t r c sy khô Pueraria lobata vi các dung môi ion [BMIM]Br,
[BMIM]BF
4
, [C
2
OHMIM]Cl, [C
2
OHMIM]BF
4
, [COOHMIM]BF
4
kèm siêu âm.
S d u t ng ti
hiu sut chit puerarin và tu kin chit xut. Kt qu chit xut
tc vi 0,c liu trong 10ml dung môi ion [BMIM]Br 1,06
mol/L, siêu âm trong 27,43 phút  480W [19].
1.2. Puerarin
1.2.1. Công thức hóa học

 Công thức phân tử [33]: C
21

H
20
O
9

 Tên khoa học: 7-hydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)-8-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3,4,
5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]chromen-4-one [33]
 Tên khác: Kakonein, 3681-99-0, 8-(beta-D-Glucopyranosyl-7-hydroxy-3-
(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one,AC1NQZ4N,
SureCN8581666, MLS002473178 [33].
1.2.2. Tính chất lý hóa
13

1.2.2.1. Lý tính: Puerarin là mt isoflavonoid t c tìm thy trong r
sn dây Pueraria lobata và Pueraria thomsonii. V  tan, puerarin:
               
[39].
  tan gi [39]. Khi thêm mt
ng nh dung dch CO
2
siêu ti hn vào dung dch ethanol s 
 tan ct qua gii hn này, vic thêm CO
2
siêu
ti hn l tan ca puerarin gim mnh [28] tan ca puerarin
trong hn hp ethanol + CO
2
siêu ti hn  [28]
  c trong hn hp methanol     tan ph thuc vào
nhi và t l ca acid acetic trong hn h 

c l tích acid acetic trong hn hp làm gi tan ca
puerarin trong hn hp dung môi [12].
1.2.2.2. Hóa tính: Do cu trúc phân t ca puerarin có mt nhóm carbonyl

nên puerarin có th
 To liên kt hydro vi các hp cht có nhóm carbonyl và hydroxyl
khác
 Th hin tính acid chenol
Vì vy, puerarin có th tan trong các dung dch kim và acid mnh [18].
1.2.3. Kỹ thuật phân tích
 ng isoflavonoid toàn phn trong r c sn
dây nhanh chóng, chính xác Chen Sibao và cng s 
 chính xác c Quét ph dung
dch chun ca 7 long gp và ching ln trong r sn
dây, các tác gi nhn thy rng ch tr genistin có ci hp th  260nm còn 6
isoflavonoid còn lu có ci hp th ti 250nm. N isoflavonoid toàn
phn trong dch chit r c s
bng cách so sánh vi m quang ca dãy dung dch chun puerarin có n
t 4,77  12,72µg/ml. Kt qu cho thy, h s     ng
14

isoflavonoid toàn phn b vng bng sc ký
lng hi,u này chng t, kt qu ng isoflavonoid
toàn phn b i kt qu nh
ng bc ký lng hi [11].
Cùng thi gian này, Xu Huaneng và cng s  d
quang   ng isoflavonoid toàn phn trong dch chit r
c sn dây nh tác dng cng isoflavonoid trong mu th c
ngoi suy t ng chun ca dung dch puerarin [41].
u so sánh kh t isoflavonoid t sn dây

bng cách s dng siêu âm và bng cách dùng vi sóng Yang Hu và cng s 
d    ng isoflavonoid trong các dch
chic. Dch chit isoflavonoid toàn phn n thích
hp r 250nm. N isoflavonoid trong mu th c tính toán t
ng chun puerarin [45].
    ng isoflavonoid toàn phn t dch chit hoc trong
nguyên liu có th s d 250nm, so sánh vng
chun ca dung dch puerarin. Kt qu ng b 
n hàn.
 ng riêng tng hot cht hot qu ca quá trình tinh
ch s d
pháp thích h.
ng s n hành nghiên cu xây dng 
 nh ng puerarin
và daidzin trong Pueraria lobata. Isoflavonoid toàn phn chi c t P.lobata
bng ethanol 70%, vi sóng trong 2 phút. Phân lp bng ct Symmetry 18. Thi gian
a puerarin và daidzin là 4,38 phút và 8,ng chun trong khong
0,115 ~ 1,38µg/ml có R=0,i vi puerarin và trong khong 0,12 ~ 1,44 µg/ml
15

có R=0,i vi daidzin. Phi trung bình khong 103,31% vi h
s phân tán CV=1,37% puerarin và 98,73% vi CV=2,43% daidzin [10].
    ng puerarin, daidzin và daidzein trong thân và lá ca
Pueraria thomsonii, Zhou Hong-Ying và cng s  dc ký
o RP-HPLC vi ct Diamosil TM C18 (4,6 mm x 150 mm, 5µm) và gradient
ra gi  ng là methanol  1% dung d      dòng
c sóng phát hin  250nm, nhi ct 25C. Các tác gi nhn thy
rng c ba hp chng chun vi h s t (r > 0,9995) và
phi trong khong 99,0% - 101,6%. Hàm ng puerarin, daidzin và
Nghiên cc rng p

pháp so xây dc  nhy cao và có th s d s d
ng puerarin, daidzin và daidzein trong thân và lá ca Pueraria thomsonii
[48].
ng s 
 nh hng puerarin trong r Pueraria lobata. S
dng ct sc ký C18, c (25:75), detector UV  c sóng
250nm. Kt qu cho thy mi quan h t ch gia n puerarin
và m  quang trong khong 20 ~ 140µg/ml (r=0,9999). Ph   li là
97,40%, RSD = 3,0% [29].
1.2.4. Tác dụng sinh học của puerarin
1.2.4.1. Tác dụng trên tim mạch
Gt nhing giãn mch ca puerarin trên
chut. Tác dng giãn mch c  ng mch ch ngc ca chut do
hot hóa n áp dn ln và kênh kali canxi kích hong trong
u hòa nhp tim. Hong ca kênh kali canxi kích hot gây ra hi
phân cc trên màng t bào.
Tác di mc nguyên vn cng mch ch  chu
làm h   i phenylephrine (10
-9
 10
-6
) hoc KCl (10  100 mM) ca