B GIÁO DO B Y T
VIC LIU
PHM QUC TUN
NGHIÊN CU V THC VT,
THÀNH PHN HÓA HC VÀ MT
S TÁC DNG SINH HC CA
CÂY LC TÂN PH (Astilbe rivularis
Buch Ham. ex D. Don,
h Saxifragaceae)
CHUYÊN NGÀNH: c hc c truyn
MÃ S: 62 72 04 06
TÓM TT LUN ÁN TIC HC
HÀ NI, 2015
c hoàn thành ti:
- Vic liu.
- i hc Hà Ni.
- Vin Sinh thái Tài nguyên sinh vt, Vin Hóa hc - Vin Hàn lâm
Khoa hc công ngh Vit Nam.
- c - i hc Quc gia Chungnam - Hàn Quc.
ng dn khoa hc:
- TSKH. Nguyn Minh Khi
- PGS. TS. MinKyun Na
Phn bin 1:
Phn bin 2:
Phn bin 3:
Lun án s c bo v c Hng chm lun án cp Vin hp ti:
Vào hi gi ngày tháng .
Có th tìm hiu lun án tn:
- n Quc gia Vit Nam.
- n Vic liu.
DANH MC CÁC KÝ HIU, T VIT TT
A. : Astilbe
: Cao chit bng ethanol t phi mt ca cây Lc
tân ph
COSY : Correlation Spectroscopy
DPPH : 1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl
ESI-MS : Electron Spray Ionization Mass Spectrometry (Ph khi
n t)
HMBC : Heteronuclear Multiple Bond Correlation
HMQC : Heteronuclear Multiple Quantum Coherence
HR-ESI-MS : High Resolution Electron Spray Ionization Mass
Spectrometry (Ph kh n t
phân gii cao)
IC
50
: Inhibitory Concentration 50% (Nng c ch 50%)
IR : InfraRed (Hng ngoi)
LD
50
: Lethal dose 50% (Liu cht 50%)
M : Mean (Trung bình)
MeOH : Methanol
MPLC : Medium Presure Liquid Chromatography (Sc ký lng áp
sut trung bình)
MS : Mass Spectrometry (Ph khng)
NMR : Nuclear Magnetic Resonance (Cng t ht nhân)
NOESY : Nuclear Overhauser Effect Spectroscopy
p : Probability (Xác sut)
PTP : Protein tyrosine phosphatase
SE : Standard error (Sai s chun)
TLC : Thin Layer Chromatography (Sc ký lp mng)
UV : Probability (Xác sut)
XO : Xanthin oxidase
1
GII THIU LUN ÁN
1. Tính cp thit ca Lun án
Cây Lc tân ph có tên khoa hc là Astilbe rivularis Buch Ham. ex D.
Don, thuc h tai h (Saxifragaceae). Theo kinh
nghim dân gian ca mt s dân tc châu Á (, Nepal, Trung Quc):
thân r, r ca cây Lc tân ph c s dng làm thuc cha chng bnh
phong tê thp nhc mi, cha viêm
d dày mãn tính, nhim khung tiêu hóa, l, tiêu chy, sa t cung, chy
máu, vô sinh, thuc b ng h
Vit Nam, cây Lc tân ph mc hoang di Lào Cai và mt vài tnh
Tây Bi dân tc vùng cao các tnh Lào Cai (Sa Pa) và Lai Châu
, thân r cây thu cha các chng b c
p, chc dù vy cho n nay, c ta
u v c h thành
phn hóa hc ca cây Lc tân ph.
Xut phát t tình hình thc t tài: u v thc vt,
thành phn hóa hc và mt s tác dng sinh hc ca cây Lc tân
ph (Astilbe rivularis Buch Ham. ex D. Don, h c
thc hin vi 3 mc tiêu chính.
2. Mc tiêu ca Lun án
1. V thc vt hc: nh tên khoa hm hình thái quan
trng, khtính đúngng nghiên cu (cây Lc tân ph).
2. V thành phn hóa hc: nh tính, phân lnh cu trúc mt
s hp cht t phn trên mi mt ca cây Lc tân ph.
3. V tác dng sinh hc: c tính cp và mt s tác dng sinh
hc ca cao chit và mt s cht phân lc t phi mt ca
cây Lc tân ph.
3. Nhi ca Lun án
3.1. V thc vt hc
- c tên khoa hc ca cây Lc tân ph thu hái ti xã Bn
Khoang, huyn Sa Pa, tnh Lào Cai là Astilbe rivularis Buch Ham. ex D.
Don, thuc h tai h (Saxifragaceae).
- m thc vt mt cách chi tit, lu tiên có d liu v
phân tích hoa, qu, h, r ca cây
2
Lc tân ph.
3.2. V hóa hc
- c cu trúc 1 hp cht mi (acid 3
-trans-
p-coumaroyloxy-olean-12-en-27-oic); 9 hp cht lu tiên phân lc
t cây Lc tân ph: aquilegiolid, hyperin, isoquercitrin, engeletin,
quercitrin, acid 6
-hydroxy-3-oxoolean-12-en-27-oic, 3
-dihydroxylup-
20(29)-en, acid 3
-trihydroxyolean-12-en-27-oic, acid 3
-
dihydroxyolean-12-en-27-oic, p cht: aquilegiolid,
engeletin, acid 6
-hydroxy-3-oxoolean-12-en-27-oic và 3
-
dihydroxylup-20(29)-en lu tiên phân lc t chi Astilbe.
- Kt qu nghiên cu v thành phn hóa hc khnh các triterpenoid
có nhóm carboxylic ti v trí C-27 là thành pha chi Astilbe và
ca h Saxifragaceae.
- an toàn cc lic tính
cp trên chut thc nghim nh nh LD
50
: Cao chit ethanol phn
i mt cây Lc tân ph không gây cht chut mc liu cao nht có
th ng ung. Li cao gp nhiu ln li cn có tác
d ra tính an toàn ca ch phm.
- Lu tiên công dng cha các chm
dân gian ca Lc tân ph c chng minh bi th nghim tác dng gim
ng vt thí nghi
ra các thành phn ch yu trong Lc tân ph t có tác dng gi
chng viêm. Các hp này cht gm acid astilbic, flavonoid, flavonoid
glycosid, bergenin.
- u nghiên c tác dng sinh hc thông qua thí
nghim dn gc t nh hot tính c ch hong xanthin oxidase
ci mt cây Lc tân ph.
- c tác dng hp thu glucose
vào st C2C12 ca các oleanan triterpenoid phân l
l u tiên tác d c tìm thy các triterpenoid có nhóm
carboxylic ti v trí C-27.
a Lun án
- ng nghiên cu (cây Lc tân phc xnh giúp kt
qu nghiên cu v hóa hc, sinh hc chính xác, tin cy.
3
- m hình thái thc vt và cu to gii phc mô t là
nhng dn liu quan trng giúp cho vic nghiên cu, kim nghinh
c liu Lc tân ph khi cn thit.
- Kt qu nghiên cu v hóa hnh cc 1
cht mi, các oleanan triterpenoid có nhóm carboxylic v trí C-27, các
ng nhóm ch a chi Astilbe, góp
phn tiêu chuc liu, chng minh các tác dng theo kinh nghim
ng nghiên cu tác dc lý mi ca các cht phân
lc, hy vng tìm ra nhng cht có c, cuc sng.
- Kt qu nghiên cc tính cp và các tác dng sinh h gii
thích các công dng cha bnh cc liu theo kinh nghim dân gian,
m ng nghiên cu tác dng ch ng type 2 ca các
triterpenoidng ti nghiên cu phát trin thành thuu
tr bnh cho cng.
5. Cu trúc ca lun án
Lun án g, 31 bng, 40 hình, 20 ph lc, 147 tài liu tham
kho. Lun án gm 139 trang, gm các pht v (2 trang);
Tng quan (38 trang); Nguyên vt liu, trang thit b
nghiên cu (14 trang), Kt qu nghiên cu (57 trang); Bàn lun (25 trang);
Kt lun và kin ngh (3 trang).
A. NI DUNG CA LUN ÁN
NG QUAN
1.1. THC VT HC
1.1.1. Chi Astilbe Buch Ham. ex D. Don
- Chi Astilbe Buch Ham. ex D. Don thuc h i
là h C tai h (Saxifragaceae). Có khong 18-24 loài, phân b phân b
châu Á, bao gc Nam Á, ngoi
tr loài A. biternata - c hu ca Bc M.
- Hin nay có các khóa phân loi chi Astilbe: khóa ca Chung và cs (chi
Astilbe Hàn Quc); khóa cc trng
làm cnh); khóa ca Pan J.T. (chi Astilbe Trung Quc); khóa ca Trader
B.W. (da trêm hình thái, và s dng gen plasmid matK
tin hành phân tích s phát sinh loài).
4
1.1.2. Cây Lc tân ph (Astilbe rivularis Buch Ham. ex D. Don)
- Tên gi: Trung Quc gi là Lc tân ph khe sui, H
ng hoc, ; Nepal, có tên Budho aushadhi,
- Phân b: vùng Nam Á (Kashimir, Nepal, Bhutan, n
Trung Quc và xung ti Thái Lan, Lào, Indonesia, Phillipin, Vit Nam.
- Phân loi thc vt: Trung Quc, loài A. rivularis c chia thành 3
th: A. rivularis var. rivularis, A. rivularis var. angustifoliolata, A. rivularis
var. myriantha.
- Vit Nam, cây Lc tân ph ch thy phân b t nhiên vùng núi cao
, thuc huyn Sa Pa, tnh Lào Cai và mt s tnh Tây Bc
u v thc vt hc.
1.2. THÀNH PHN HÓA HC
1.2.1. Thành phn hóa hc mt s loài thuc chi Astilbe
Tng hp các tài liu tham kh c cho thy, thành phn hóa hc
c phân lp t các loài thuc chi Astilbe là pentacyclic
triterpenoid (ch yu khung ursan, oleanan có nhóm carboxylic v trí C-
27), flavonoid, phytosterol, dn xut ca acid benzoic,
1.2.2. Thành phn hóa hc ca cây Lc tân ph
Các công trình nghiên cu trên th gii cho thy: phn trên mt có:
-sitosterol, bergenin các triterpenoid (acid 3
-hydroxyolean-12-en-27-oic,
acid astilbic, 3
-hydroxyolean-12-en) và các flavonoid: quercetin, azaleatin;
thân r có: bergenin, dimer bergenin, arbutin, các triterpenoid (acid 3
-
hydroxyolean-12-en-27-oic, acid astilbic, acid 3
-acetoxyolean-12-en-27-
oic).
Viu v thành phn hóa hc
ca cây Lc tân ph.
1.3. TÁC DNG SINH HC
1.3.1. Tác dng sinh hc ca mt s loài thuc chi Astilbe
- Cao chit t thân r ca mt s loài thuc chi Astilbe có tác dng
chng oxy hóa, chng viêm, c ch enzym elastase, tyrosinase và
-
glucosidase, có tác dng nhanh lành vt bng, kháng khi u, chng nm.
- Acid astilbic phân lc t loài A. chinenis có tác dng chng viêm,
ginh.
- Mt s triterpenoid (khung ursan, oleanan có nhóm carboxylic v trí
5
C-27) phân lc t chi Astilbe có tác dc vi t
gây cm y s cht t
1.3.2. Tác dng sinh hc ca cây Lc tân ph
Mt s công trình nghiên cu tác dng sinh hc ca cây Lc tân ph trên
th gii cho thy, cao chit t thân r có tác dng chng oxy hóa, chng
viêm, kháng khuc vi t bào, và chng tiêu
hóa.
T LIU, TRANG THIT B VÀ
U
2.1. NGUYÊN VT LIU NGHIÊN CU
- Cây Lc tân ph (Astilbe rivuralis Buch Ham. ex D. Don), mc t
nhiên vùng núi cao ti xã Bn Khoang, huyn Sa Pa, tnh Lào Cai. Thu
hái toàn b cây Lc tân ph vào tháng 8, 11-12/2010; tháng 7, 9/2011;
12/2013 ra sch.
- ng vt, t bào, hóa cht, dung môi.
U
2.2.1. Nghiên cu v thc vt hc
2.2.1.1. Mu tiêu bn thc vt
Mc ly vào 2 thi k y
mu là xã Bn Khoang, huyn Sa Pa, tnh Lào Cai.
nh tên khoa hc
- i chiu bi các khoá phân
lon loài và th (var.) ca chi Astilbe, h Saxifragaceae trong các tài liu
chuyên kho v phân loi thc vt.
- Thnh li kt qu bi các chuyên gia phân loi thc vt.
- i chiu vi các mnh.
2.2.1.3. Nghiên cu gii phu
Các tiêu bn gii phm kép. Quan sát
i kính hin vi soi ni và chp nh bng máy nh k thut s.
2.2.2. Nghiên cc
.
t xu
- c lic chit bn b
phân cn.
6
- Phân lp các cht bng sc ký ct (cht hp ph là silica gel pha thun,
o YMC RP-18, Sephadex LH20) và MPLC.
nh cu trúc hoá hc các hp cht
Nhi nóng chy, góc quay cc riêng ([]
20
D
:
UV, IR, MS, NMR.
2.2.3. Nghiên
- Mu nghiên ct bng ethanol).
- c tính cp.
- ng chng oxy hóa: dn gc t do DPPH và superoxid.
- nh hot tính c ch hong enzym xanthin oxidase.
- ng chng viêm c
ng carrageenan.
- ng chng viêm mn trên mô hình gây u ht thc
nghim bng viên bông.
- ng gi
- ng gii vi trên n bng
acid acetic.
- Th tác dng hp thu glucose trên t t
C2C12.
T QU NGHIÊN CU
3.1. THC VT HC
nh tên khoa hc
Mô t chi ti các b phn cng (lá, thân),
n (hoa, qu, ht) ca loài nghiên ci chiu vi các khóa
phân loi các loài thuc chi Astilbe Buch Ham. ex D. Don, h
Saxifragaceae trong các tài liu chuyên kho v phân loi thc vt và vi
các mu có tên khoa hc Astilbe rivularis Buch Ham ti
Bo tàng thc vt - Vin sinh thái Tài nguyên Sinh vt và trên website ca
KEW royal botanic gardens. Kt qu các mu Lc tân ph thu thp Sa Pa,
Lào Cai có tên khoa hc ca loài chính xác là Astilbe rivularis Buch Ham.
ex D. Don, h tai h (Saxifragaceae). Kt qu nghiên
cc thnh li bi các chuyên gia v phân loi thc vt ca Vin
Sinh thái Tài nguyên Sinh vt và Vic liu.
m hình thái thc vt
m ni bt: Lá kép chm ba, 2-3 ln lông chim l; phin lá
7
chét hình thoi-bu dc, trng, trc hay hình bu dc rng, không có
cánh hoa.
3.1.3m gii phu
3.1.3.1. Cu to gii phu lá chét
a) Cuống lá chét
Gm: mô mm v, mô mm rut, trong t bào mô mm có cha tinh th
calci oxalat hình cu gai. Vòng mô cng xp thành mt vòng un. Mt
vòng các bó li be - g. Mng có mt bó g và 1 - 3 bó li be.
b) Phiến lá chét
Cu to ging vi cung lá, nng và vòng các
bó li be - g b n phía trên ca gân gia.
3.1.3.2. Cu to gii phu thân khí sinh
Gm: biu bì; mô mm v; vòng mô cng gc; các bó li be
- g xp thành vòng un gm 24 - 30 bó, c mt bó to ch li ca
thân, xp phía ngoài xen k mt bó nh xp trong, gia li be và g là
ng tng. Gia các bó li be - g là tia rut, các tia này có th trong
mô mm run mô mm vn ln b chn bi mô cng.
3.1.3.3. Cu to gii phu thân r
Ngoài cùng là lp bn gm 2-3 lp t bào; mô mm v có cha tinh th
calci oxalat hình cu gai; các bó li be - g, mi bó có cung mô cng phía
ngoài và bó li be g xp chng trong.
3.1.3.4. Cu to gii phu r
Lp bn: nhiu lp t bào bn; mô mm v u tinh th
calci oxalat hình cu gai; Li be cp 2 gm 17 - 22 bó phía ngoài có 3 - 9
tng si xen k vi mô mm li be, phía trong là mn các t bào mô
mm li be; tng phát sinh li be - g; g cu mch g,
si g và mô mm g; gia các bó li be - g là tia rut, tia rut có th vào
n gn tâm hoc ch có phn li be.
nh tính các nhóm cht h
kt lun trong phn trên và i m t ca cây Lc tân ph
cha: saponin, triterpenoid, phytosterol, flavonoid, tanin, carbohydrat.
nh cu trúc hóa hc ca các hp cht phân lp t phn
trên mt
8
Hình 3.13. Cu trúc ca
hp cht SL-1
SL-1 (acid 3
-acetoxyolean-12-en-27-oic)
Bnh hình, màu trng. Nhi nóng
chy: 235-237
o
C; UV (MeOH)
max
(nm): 201;
IR (KBr)
max
(cm
-1
): 3242, 2934, 1740, 1707,
1665, 1466, 1375, 1240; ESI-MS m/z: 497,4 [M-
H]
.
1
H NMR (500 MHz, CDCl
3
) ppm): 5,69
(1H, dd, J=2,0; 4,5, H-12), 4,51 (1H, dd, J=4,5;
11,5, H-3), 2,05 (3H, s, H-1'), 1,03 (3H, s, H-
26), 0,98 (3H, s, H-25), 0,85 (3H, s, H-24), 0,84 (3H, s, H-23; H-28), 0,83
(3H, s, H-29), 0,83 (3H, s, H-30).
13
C NMR (125 MHz, CDCl
3
) (ppm):
38,2 (C-1), 23,6 (C-2), 80,7 (C-3), 37,7 (C-4), 55,1 (C-5), 18,1 (C-6), 36,3
(C-7), 39,9 (C-8), 47,1 (C-9), 37,0 (C-10), 22,8 (C-11); 126,3 (C-12), 137,6
(C-13), 55,9 (C-14), 22,3 (C-15), 27,6 (C-16), 32,9 (C-17), 49,2 (C-18),
44,0 (C-19), 31,1 (C-20), 34,4 (C-21), 36,6 (C-22), 28,1 (C-23), 16,5 (C-
24), 16,8 (C-25), 18,1 (C-26), 180,0 (C-27), 28,3 (C-28), 33,4 (C-29), 23,6
(C-30), 21,3 (C-1'), 171,2 (C-2').
SL-2 (
-sitosterol)
B nh hình, màu trng; nhi
nóng chy 140-142
o
C; IR (KBr)
max
(cm
-
1
): 3440, 2923, 1684, 1396, 1259; ESI-MS
m/z: 437,14 [M+Na]
+
.
1
H NMR (500
MHz, CDCl
3
) (ppm): 5,34 (1H, d, J= 5,0
Hz, H-6), 3,49 (1H, m, H-3), 1,01 (3H, s,
H-19), 0,93 (3H, d, J=6,5 Hz, H-21), 0,86
(3H, t, J =7,5, H-29), 0,84 (3H, d, J=7,0 Hz, H-27), 0,82 (3H, d, J=7,0 Hz,
H-26), 0,68 (3H, s, H-18).
13
C NMR (125 MHz, CDCl
3
) (ppm): 37,2 (C-
1), 31,2 (C-2), 71,4 (C-3), 41,9 (C-4), 140,8 (C-5), 121,5 (C-6), 31,8 (C-7;
C-8), 50,1 (C-9), 36,4 (C-10), 21,0 (C-11), 39,7 (C-12), 42,2 (C-13), 56,7
(C-14), 24,2 (C-15), 28,1 (C-16), 56,0 (C-17), 11,7 (C-18), 18,9 (C-19),
36,0 (C-20), 18,7 (C-21), 33,9 (C-22), 26,0 (C-23), 45,8 (C-24), 29,1 (C-
25), 19,2 (C-26), 19,7 (C-27), 23,0 (C-28), 11,8 (C-29).
SL-3 (
-sitosterol-3-O-
-D-glucopyranosid, daucosterol)
So sánh s liu ph NMR ca hp cht SL-3 vi SL-2 thy có các tín
hiu trùng vi nhau phn aglycon, nên hp cht SL-3 là dn xut ca SL-
2. Ph
1
H NMR còn có s xut hin tín hiu doublet proton anomer
H
Hình 3.14. Cu trúc ca
hp cht SL-2
9
Hình 3.17. Cu trúc ca
hp cht SL-5
4,41 (1H, d, J=8,0 Hz, H-1'), 2
tín hiu proton oxymethylen
H
3,76 (dd, J=12,0; 4,0 Hz,
H-6'a), 3,85 (dd, J=12,0; 3,0
Hz, H-6'b) và 4 tín hiu proton
oxymethin
H
3,25-3,45 (H-
2' - H-5'). Ph
13
C-NMR và
DEPT cho thy có tín hiu ca 35 nguyên t carbon (6 nhóm methyl, 12
nhóm methylen, 14 nhóm methin và 3 carbon bc 4) nên hp cht SL-3 có
thêm phng
-D-glucopyranose. So sánh các d liu ph ca hp cht
c vi daucosterol trong tài liu thy phù hp, hp cht SL-3 xác
nh là
-sitosterol-3-O-
-D-glucopyranosid (daucosterol).
SL-4 (aquilegiolid)
Tinh th không màu; UV (MeOH)
max
(nm):
200, 251; IR (KBr)
max
(cm
-1
): 3456, 2926, 1728,
1635, 1418, 1162, 1053; HR-ESI-MS m/z:
175,03618 [M+Na]
+
.
1
H NMR (500 MHz, CDCl
3
)
(ppm): 6,62 (1H, d, J=10,0, H-4), 6,32 (1H, dd,
J=10,0; 5,0, H-5), 5,82 (1H, s, H-3), 5,31 (ddd, J=13,0; 5,0; 1,5, H-7a), 2,65
(1H, m, H-7
), 1,80 (1H, td, J=13,0; 4,5, H-7
).
13
C NMR (125 MHz,
CDCl
3
) (ppm): 173,3 (C-2), 162,6 (C-3a), 137,3 (C-3), 112,7 (C-4), 122,1
(C-5), 64,5 (C-6), 76,3 (C-7a), 37,3 (C-7).
SL-5 (Quercetin)
Bt màu vàng; nhi nóng chy 310-312
o
C; UV (MeOH)
max
(nm): 212, 265, 351; IR
(KBr)
max
(cm
-1
): 3406, 1668, 1610, 1520,
1453; ESI-MS m/z: 300,9 [M-H]
.
1
H NMR
(500 MHz, DMSO-d
6
) (ppm): 7,67(1H, d,
J=2,0, H-2'), 7,54 (1H, dd, J= 2,0; 8,5, H-6'),
6,88 (1H, d, J=8,5, H5'), 6,40 (1H, d, J=2,0, H-8), 6,18 (1H, d, J=2,0, H-6).
13
C NMR (125 MHz, DMSO-d
6
) (ppm): 146,7 (C-2), 135,7 (C-3), 175,8
(C-4), 160,7 (C-5), 98,2 (C-6), 164,0 (C-7), 93,3 (C-8), 156,1 (C-9), 102,9
(C-10), 121,9 (C-1'), 115,0 (C-2'), 145,0 (C-3'), 147,7 (C-4'), 115,6 (C-5'),
119,9 (C-6').
SL-6 (quercetin-3-O-
-D-galactopyranosid, hyperin)
Hình 3.16. Cu trúc ca
hp cht SL-4
Hình 3.15. Cu trúc ca hp cht SL-3
10
Hình 3.19. Cu trúc ca
hp cht SL-7
Bnh hình màu vàng; nhi
nóng chy: 236-237
o
C; UV (MeOH)
max
(nm): 257, 360; IR (KBr)
max
(cm
-1
):
3456, 1659, 1606, 1495; ESI-MS m/z:
463,0 [M-H]
.
So sánh ph
1
H NMR ca hp cht
SL-6 vi SL-5 thy các tín hiu ca vòng
A, B khá ging nhau, do vy có th khnh hp cht SL-6 có aglycon là
dn xut ca quercetin. Tuy nhiên, trên ph
1
H NMR ca SL-6 xut hin
ca mt doublet ca proton anomer
H
5,18 (1H, d, J=7,5 Hz, H-1''), 6 tín
hiu proton oxymethin, oxymethylen
H
3,50 - 3,87 là chng
t du hiu hình thành ca mt liên kt
-monoglycosid. Ph
13
C NMR và
DEPT ch ra s có mt ca 21 nguyên t carbon, gm có 1 nhóm methylen,
8 nhóm methin, 9 carbon bc 4, gm: 1 tín hiu nhóm carbonyl
C
179,5
(C-4); các tín hiu cng hexose: 4 oxymethincarbon
C
73,2 (C-2''),
75,1 (C-3''), 70,0 (C-4''), 77,2 (C-5'') và 1 oxymethylencarbon
C
62,0 (C-
6''). T xut rng liên kt
-monoglycosid là
-
galactopyranosid. So sánh các d liu ph ca hp ch c vi
hyperin trong tài liu thy phù hp, hp cht SL-6 nh là quercetin-3-
O-
-D-galactocopyranosid (hyperin) (Hình 3.18).
SL-7 (quercetin-3-O-
-D-glucopyranosid, isoquercitrin)
Bnh hình màu vàng; UV (MeOH)
max
(nm): 206, 257, 358; ESI-
MS m/z: 463,0 [M-H]
.
So sánh ph NMR ca hp cht SL-7 vi SL-6
thy có các tín hiu vòng A, B khá ging nhau.
Trên ph
1
H NMR ca SL-7 xut hin ca mt
doublet ca proton anomer
H
5,26 (1H, d, J=7,5
Hz); 6 tín hiu proton oxymethin, oxymethylen
H
3,25 - ng t du hiu
hình thành ca mt liên kt
-
t SL-6. Trên ph
13
C NMR có các tín hiu v
s có mt liên kt cng hexose: 4 tín hiu oxymethincarbon
C
75,7
(C-2''), 78,4 (C-3''), 71,2 (C-4''), 78,1 (C-5'') và 1 tín hiu
oxymethylencarbon
C
62,6 (C-6''). T các d liu ph trên, khnh
hp cht SL-7 t
-monoglycosid có aglycon là quercetin. So
Hình 3.18. Cu trúc ca
hp cht SL-6
11
Hình 3.21. Cu trúc ca
hp cht SL-9
Hình 3.20. Cu trúc ca
hp cht SL-8
sánh các tín hing hexose trên ph
13
C NMR ca hp cht SL-7 vi
SL-6 thy có s chênh lch v dch chuyn hóa hc v ng thp
khá ln các v trí C-2'', C-3'' lt là 2,5 và 3,3 ppm. Vi nhng d liu
MS, NMR cho thng liên kt vi quercetin ca hp cht SL-7 ng
phân v trí cng
-D-galactopyranose. T xung liên
kt vi aglycon ca hp cht SL-7 là
-D-glucopyranose. So sánh các d
liu ph ca hp chc vi isoquercitrin trong tài liu thy phù hp,
hp cht SL-7 nh là quercetin-3-O-
-D-glucopyranosid
(isoquercitrin) (Hình 3.19).
SL-8 (engeletin)
B nh hình màu vàng nht; nhi
nóng chy: 175-176
o
C; UV (MeOH)
max
(nm):
217, 266, 274, 295, 377; IR (KBr)
max
(cm
-1
):
3381, 1644, 1598, 1518, 1469; ESI-MS m/z:
433,1 [M-H]
.
1
H NMR (500 MHz, DMSO-d
6
)
(ppm): 7,33 (2H, d, J=8,5, H-2'; H -6'), 6,79
(2H, d, J=8,5, H-3'; H-5'), 5,91 (1H, d, J=2,0, H-
8), 5,88 (1H, d, J=2,0, H-6), 5,29 (1H, d, J=10,0,
H-2), 4,74 (1H, d, J=10,0, H-3), 3,97 (1H, s, H-1''), 3,90 (1H, dd, J=6,5;
9,5, H-5''), 3,12-3,13 (2H, m, H-3'', H-4''), 1,05 (3H, d, J=6,5, H-6'').
13
C
NMR (125 MHz, DMSO-d
6
) (ppm): 81,5 (C-2), 76,0 (C-3), 194,7 (C-4),
163,4 (C-5), 96,1 (C-6), 166,9 (C-7), 95,1 (C-8), 162,2 (C-9), 101,0 (C-10),
126,5 (C-1'), 115,2 (C-2'; C-6'), 129,0 (C-3'; C-5'), 157,8 (C-4'), 100,3 (C-
1''), 70,4 (C-2''), 70,1 (C-3''), 71,6 (C-4''), 69,0 (C-5''), 17,7 (C-6'').
SL-9 (quercitrin)
Bt màu vàng; nhit nóng chy: 230-232
o
C; UV (MeOH)
max
(nm): 202, 256, 349; IR (KBr)
max
(cm
-1
): 3346,
1659, 1605, 1507, 1455; ESI- MS m/z: 447,0
[M-H]
.
Khi so sánh ph NMR ca hp cht SL-9
vi SL-5 thy các tín hiu ca vòng A, B khá
ging nhau. Do vy kh nh cu trúc hp
cht SL-9 có aglycon là quercetin. Mt khác trên
ph
1
H NMR có s xut hin ca mt doublet
ca nhóm methyl
H
0,96 (J= 6,5 Hz, H-6''),
12
Hình 3.23. Cu trúc ca
hp cht SR-4
doublet ca proton anomer
H
5,37 (J= 1,5 Hz, H-1'') và 4 tín hiu proton
H
3,36 - 4,24 là du hiu ca mng
-L-rhamnopyranose.
Ph
13
C NMR ch ra s có mt ca 21 nguyên t carbon; phân tích các tín
hiu trên ph DEPT xác nhn gm 1 nhóm methyl, 10 nhóm methin, 10
carbon bu 1
C
179,7, C-4); mt
C
17,6, C-
C
72,2, 72,0, 73,3, 71,9,
C2''-5''). So sánh các d liu ph ca hp chc vi quercitrin trong
tài liu thy phù hp, hp cht SL-9 x nh là quercetin-3-O-
-L-
rhamnopyranosid (quercitrin) (Hình 3.21).
SL-10 (bergenin)
Tinh th không màu; nhi nóng chy: 238-
240
o
C; UV (MeOH)
max
(nm): 222; 275; IR
(KBr)
max
(cm
-1
): 3392, 1703, 1612, 1529, 1465,
1346, 1097; ESI-MS m/z: 327,0 [M-H]
-
.
1
H NMR
(500 MHz, CD
3
OD) (ppm): 7,11 (1H, s, H-7),
4,98 (1H, d, J=10,0, H-10b), 4,09 (1H, t, J=10,0,
H-4a), 4,06 (1H, m, H-11b), 3,93 (3H, s, OCH
3
),
3,83 (1H, t, J=9,0, H-4), 3,72 (1H, m, H-11a), 3,70 (1H, m, H-2), 3,45 (1H,
t, J=9,0, H-3).
13
C NMR (125 MHz, CD
3
OD) (ppm): 83,1 (C-2), 71,9 (C-
3), 81,4 (C-4a), 75,7 (C-4), 119,4 (C-6a), 165,8 (C-6), 111,1 (C-7), 152,3
(C-8), 142,0 (C-9), 117,3 (C-10a), 74,3 (C10b), 149,4 (C-10), 62,7 (C-11),
60,9 (OCH
3
).
nh cu trúc hóa hc ca các hp cht phân lp t phn
i mt
SR-4 (acid 3
-hydroxyolean-12-en-27-oic)
Tinh th không màu. UV (MeOH)
max
(nm):
204; IR (KBr)
max
(cm
-1
): 3480, 2932, 1686, 1628,
1454, 1188; ESI-MS m/z: 455,3 [M-H]
, 457,2
[M+H]
+
.
1
H NMR (300 MHz, CDCl
3
) (ppm): 5,66
(1H, t, J=3,0, H-12), 3,2 (1H, m, H-3), 1,02 (3H, s,
H-26), 0,96 (3H, s, H-23), 0,95 (3H, s, H-25), 0,84
(3H, s, H-28), 0,83 (3H, s, H-30), 0,82 (3H, s, H-29), 0,78 (3H, s, H-24).
13
C NMR (75 MHz, CDCl
3
) (ppm): 38,8 (C-1), 27,7 (C-2), 79,3 (C-3),
38,9 (C-4), 55,4 (C-5), 18,4 (C-6), 36,4 (C-7), 40,0 (C-8), 47,4 (C-9), 37,2
(C-10), 23,0 (C-11), 126,1 (C-12), 138,1 (C-13), 56,0 (C-14), 22,4 (C-15),
Hình 3.22. Cu trúc ca
hp cht SL-10
13
Hình 3.24. Cu trúc ca
hp cht SR-1
27,2 (C-16), 33,0 (C-17), 49,2 (C-18), 44,2 (C-19), 31,2 (C-20), 36,7 (C-
21), 34,5 (C-22), 28,3 (C-23), 15,8 (C-24), 16,5 (C-25), 18,2 (C-26), 179,4
(C-27), 28,4 (C-28), 33,4 (C-29), 23,8 (C-30).
Ph
1
H NMR ch ra tín hia proton olefinic
H
5,66 (1H,
t, J=3,0 Hz, H-12); mt tín hiu proton oxymethin
H
3,2 (1H, m, H-3) và
7 nhóm methyl liên kt vi carbon bi dng singlet
H
0,96, 0,78,
c quy vào các v trí H
3
-23, 24, 25, 26, 28, 29,
30. Ph
13
C NMR xut hin 30 tín hiu carbon, gm mt nhóm carboxylic
C
179,4 (C-27); mt nhóm oxymethincarbon
C
79,3 (C-3); 2 nhóm
carbon olefinic
C
126,2 (C-12) và 138,1 (C-13). Da vào các d liu ph
trên, có th xut rng hp cht SR-4 t oleanan triterpenoid
cha mt liên kt nhóm hydroxyl và mt nhóm carboxyl. So sánh
ph NMR gia hp cht SR-4 và hp cht SL-1 thy có các d liu ph
ng. Tuy nhiên, hp cht SR-4 không có các tín hiu ca nhóm
acetyl trên ph NMR SL-1 nên nó có th là acid 3
-hydroxy-olean-12-
en-27- c khnh li khi so sánh các d liu ph ca
hp ch c vi hp cht SR-4 trong tài liu thy phù hp (Hình
3.23).
SR-1 (Acid 6
-hydroxy-3-oxoolean-12-en-27-oic)
1
H NMR (600 MHz, C
5
D
5
N) (ppm): 5,84 (1H,
dd, J=2,4; 6,4, H-12), 4,67 (br s, H-6), 1,76 (3H, s,
H-25), 1,67 (3H, s, H-24), 1,66 (3H, s, H-26), 1,18
(3H, s, H-23), 1,01 (3H, s, H-28), 0,89 (3H, s, H-
29), 0,73 (3H, s, H-29).
13
C NMR (150 MHz,
C
5
D
5
N) (ppm): 42,2 (C-1), 35,0 (C-2), 216,0 (C-
3), 49,1 (C-4), 57,2 (C-5), 68,2 (C-6), 44,7 (C-7),
39,8 (C-8), 47,8 (C-9), 37,3 (C-10), 23,9 (C-11),
125,9 (C-12), 138,6 (C-13), 56,8 (C-14), 23,3 (C-15), 28,7 (C-16), 31,5 (C-
17), 50,2 (C-18), 44,8 (C-19), 30,3 (C-20), 35,0 (C-21), 37,3 (C-22), 26,2
(C-23), 24,1 (C-24), 17,4 (C-25), 20,8 (C-26), 178,9 (C-27), 28,9 (C-28),
33,7 (C-29), 24,4 (C-30).
SR-2 (acid 3
-trans-p-coumaroyloxy-olean-12-en-27-oic)
Bnh hình màu trng, []
20
D
+25,1 (c 0,1; CHCl
3
); IR (KBr) ν
max
(cm
1
): 3310, 2948, 1683, 1586; HR-ESI-MS m/z: 625,3870 [M+Na]
+
; tinh
khit: 98,69%.
1
H NMR (600 MHz, C
5
D
5
N) (ppm): 8,00 (1H, d, J=15,8,
14
Hình 3.25. Cu trúc ca hp cht SR-2
Hình 3.26),
NOESY ( ) chính ca hp cht SR-2
H-3'), 7,53 (1H, d, J=8,6, H-5';
H-9'), 7,04 (1H, d, J=8,6, H-6';
H-8'), 6,58 (1H, d, J=15,8, H-
2'), 5,80 (1H, t; J= 3,4, H-12),
5,02 (1H, t, J= 2,4, H-3), 2,91
(1H, dd, J=11,5; 5,2, H-9),
2,21 (1H, dd, J=13,5; 3,6, H-
18) 1,62 (1H, d, J=12,0, H-5), 1,14 (3H, s, H-26), 1,03 (3H, s, H-28), 1,00
(3H, s, H-25), 0,91 (3H, s, H-23), 0,89 (3H, s, H-24; H-29), 0,74 (3H, s, H-
30).
13
C NMR (150 MHz, C
5
D
5
N) (ppm): 37,7 (C-1), 23,7 (C-2), 78,2 (C-
3), 37,5 (C-4), 51,1 (C-5), 18,9 (C-6), 37,4 (C-7), 40,3 (C-8), 47,8 (C-9),
34,7 (C-10), 23,6 (C-11), 125,8 (C-12), 139,0 (C-13), 57,0 (C-14), 23,4 (C-
15), 28,8 (C-16), 33,7 (C-17), 50,3 (C-18), 44,8 (C-19), 31,6 (C-20), 35,1
(C-21), 37,3 (C-22), 28,4 (C-23), 22,4 (C-24), 16,7 (C-25), 18,9 (C-26),
178,7 (C-27), 29,0 (C-28), 33,8 (C-29), 24,2 (C-30), 167,2 (C-1'), 116,3 (C-
2'), 145,2 (C-3'), 126,5 (C-4'), 131,0 (C-5'; C-9'), 117,1 (C-6'; C-8'), 161,7
(C-7').
Ph HR-ESI-MS cho pic ion m/z: 625,3870 [M+Na]
+
phù hp vi công
thc phân t C
39
H
54
NaO
5
(625,3869). Ph IR cho thy i hp
th ca nhóm -OH (3310 cm
-1
); nhóm C=O (1683 cm
-1
); nhóm C=C (1586
cm
-1
). Ph
1
H NMR ch ra các tín hiu ca mt proton methin olefinic
H
5,80 (1H, t, J=3,4 Hz) và mt proton oxymethin
H
5,02 (1H, t, J=2,4 Hz)
và 7 nhóm methyl dng singlet
H
0,74, 0,89 x 2, 0,91, 1,00,
tín hi v trí 1, 4
H
7,53 (2H, d, J=8,6 Hz) và
7,04 (2H, d, J=8,6 Hz), và 2 tín
hiu proton methin olefinic
H
8,00 (1H, d, J = 15,8 Hz) và 6,58
(1H, d, J xut có
mt ca nhóm trans-p-coumaroyl trong hp cht SR-2. Ph
13
C NMR,
HMQC cho thy có 39 tín hiu carbon, gm 7 nhóm methyl, 10 nhóm
methylen, 11 nhóm methin và 11 carbon bc 4. S có mt ca mt liên kt
C
139,0 và 125,8, mt oxymethin
C
78,2, và 7 nhóm methyl
C
15
Hình 3.29. Cu trúc ca
hp cht SR-3
33,8, 29,0, 28,4, 24,2 x 2, 18,9, 16,7 ch ra khung ca SR-2 là mt oleanan
triterpenoid và d liu ph cng vi ph hp cht SR-4 (acid
3β-hydroxyolean-12-en-27-oic). Hp cht SR-2 có th là acid 3β-
hydroxyolean-12-en-27-oic cha mt nhóm trans-p-coumaroyl. Tt c các
tín hiu
1
H và
13
C NMR ca hp cht SR-2 c quy kt da trên phân tích
các ph HMQC, HMBC, COSY và NOESY. Trên ph HMBC, tín hiu
proton oxymethin H-
H
i C-1 (
C
37,7), C-5 (
C
51,1), C-24 (
C
22,4), và C-1' (
C
167,2), có th xut rng nhóm trans-p-
coumaroyl v trí C-ng ca H-3 là α-equatorial da trên
NOESY gia H-3 (
H
5,02) và H-23 (
H
0,91). Da trên phân tích trên,
cu trúc hp cht SR-2 nh là acid 3β-trans-p-coumaroyloxy-
olean-12-en-27-oic (Hình 3.25, 3.26). SR-2 là hp cht mi.
SR-3 (3
-dihydroxylup-20(29)-en)
Bt màu trng. ESI-MS m/z: 465,3 [M+Na]
+
.
1
H NMR (600 MHz, CD
3
OD) (ppm): 4,71 (1H,
br s, H-29a), 4,58 (1H, br s, H-29b), 3,98 (1H, td,
J=3,6; 10,5, C-6), 3,11 (1H, dd, J=4,8; 11,4, H-3),
2,43 (1H, td, J=6,0; 10,8, C-19), 1,71 (3H, s, H-
30), 1,29 (3H, s, H-23), 1,16 (3H, s, H-26), 1,03
(3H, s, H-24), 0,96 (3H, s, H-27), 0,93 (3H, s, H-
25), 0,85 (3H, s, H-28).
13
C NMR (150 MHz, CD
3
OD) (ppm): 39,9 (C-1),
27,8 (C-2), 79,7 (C-3), 40,4 (C-4), 61,7 (C-5), 69,1 (C-6), 47,0 (C-7), 43,2
(C-8), 51,3 (C-9), 40,4 (C-10), 22,0 (C-11), 26,4 (C-12), 39,1 (C-13), 44,1
(C-14), 28,6 (C-15), 36,7 (C-16), 44,0 (C-17), 49,5 (C-18), 49,4 (C-19),
151,9 (C-20), 30,9 (C-21), 41,0 (C-22), 31,5 (C-23), 16,1 (C-24), 17,7 (C-
25), 18,0 (C-26), 15,0 (C-27), 18,4 (C-28), 110,2 (C-29), 19,5 (C-30).
Ph ESI-MS cho pic ion m/z: 465,3 [M+Na]
+
phù hp vi công thc
phân t C
30
H
30
O
2
Na (465,37). Ph
1
H NMR ch ra tín hiu ca 6 nhóm
methyl liên kt vi carbon bi dng singlet
H
1,29, 1,03, 0,93,
c gán vào các v trí H
3
-23, 24, 25, 26, 27, 28; mt
H
1,71 (3H, s); 4,71 (1H, br s) và 4,58 (1H, br s)]; 2 tín
hi
H
3,11 (dd, J=4,8; 11,4 Hz, H-3) và 3,98 (td, J=3,6;
10,5 Hz, H-6). Ph
13
C NMR có 30 tín hicarbon
olefinic
c
151,9 (C-20) và 110,2 (C-29); 2 oxymethincarbon
c
79,7
(C-3) và 69,1 (C-6). Da trên d liu ph NMR, có th xut rng hp
16
Hình 3.30. Cu trúc ca
hp cht SR-6
Hình 3.31. Cu trúc ca
hp cht SR-5
cht SR-3 là mt lupan triterpenoid cha mt liên k
nhóm hydroxyl. So sánh các d liu ph ca hp chc vi 3
-
dihydroxylup-20(29)-en trong tài liu thy phù hp, hp cht SR-3 nh
là 3
-dihydroxylup-20(29)-en (Hình 3.29).
SR-6 (acid 3
-dihydroxyolean-12-en-27-oic, acid astilbic)
Bt màu trng. Ph ESI-MS cho pic ion m/z:
471,3 [M-H]
và 495,3 [M+Na]
+
phù hp vi công
thc phân t C
30
H
48
O
4
(472,36). Ph
1
H NMR ch
ra tín hia proton olefinic
H
5,98
(1H, t, J=3,3 Hz, H-12); hai tín hiu proton
oxymethin
H
3,34 (1H, dd, J=4,2; 11,7 Hz, H-3),
4,88 (1H, s, H-6) và 7 methyl liên kt vi carbon
bi dng singlet
H
1,29, 1,75, 1,74, c
quy vào các v trí H
3
-23, 24, 25, 26, 28, 29, 30. Ph
13
C NMR xut hin 30
tín hiu carbon, gm mt nhóm carboxylic
C
179,1 (C-27); hai nhóm
oxymethincarbon
C
78,8 (C-3), 67,5 (C-6); 2 nhóm carbon olefinic
C
125,9 (C-12) và 138,1 (C-13). Da trên d liu ph NMR, có th xut
rng hp cht SR-6 t oleanan triterpenoid cha mt liên k
hai nhóm hydroxyl, mt nhóm carboxyl. So sánh các d liu ph ca hp
ch c vi acid 3
-dihydroxyolean-12-en-27-oic trong tài liu
thy phù hp, hp cht SR-6 nh là acid 3
-dihydroxyolean-12-en-
27-oic (acid astilbic) (Hình 3.30).
SR-5 (acid 3
-trihydroxyolean-12-en-27-oic)
Ph NMR ca hp cht SR-c so sánh vi
ph ca hp cht SR-6 ch ra có s khác bit nht
v trí C-7, do mc thay th bi nhóm
hydroxyl [
H
4,33 (1H, d, J=
C
84,8]. Vì
vy có th cho rng, hp cht SR-5 là mt acid
3,6,7-trihydroxyolean-12-en-27-oic. So sánh các d
liu ph ca hp ch c vi 3
-
trihydroxyolean-12-en-27-oic trong tài liu [48] thy phù hp, hp cht SR-
5 nh là acid 3
-trihydroxyolean-12-en-27-oic (Hình 3.31).
SR-7 (acid 3
-dihydroxyolean-12-en-27-oic)
Bt màu trng. Ph ESI-MS cho pic ion m/z: 471,3 [M-H]
, 473,4
[M+H]
+
phù hp vi công thc phân t C
30
H
48
O
4
(472,36). Ph
1
H NMR
17
Hình 3.32. Cu trúc ca
hp cht SR-7
ch ra tín hi a proton olefinic
H
5,78 (1H, d, J=2,1 Hz, H-12); mt tín hiu proton
oxymethin
H
3,48 (1H, dd, J=4,5; 11,4 Hz, H-3),
hai tín hiu proton oxymethylen
H
3,70 (1H, d,
J=10,8 Hz, H-24a), 4,5 (1H, d, J=10,8 Hz, H-24b)
và 6 methyl liên kt vi carbon b i dng
singlet
H
1,40, 1,02, 1,10x2c quy
vào các v trí H
3
-23, 25, 26, 28, 29, 30. Ph
13
C NMR xut hin 30 tín hiu
carbon, gm mt nhóm carboxylic
C
178,9 (C-27); mt nhóm oxymethin
carbon
C
80,2 (C-3), mt nhóm oxymethylen carbon
C
65,0 (C-24); 2
nhóm carbon olefinic
C
125,7 (C-12) và 138,9 (C-13). Da trên d liu
ph NMR, có th xut rng hp cht SR-7 là mt oleanan triterpenoid
cha hai nhóm hydroxyl, mt nhóm carboxyl. So sánh các d liu ph ca
hp ch c vi 3
-dihydroxyolean-12-en-27-oic trong tài liu
thy phù hp, hp cht SR-7 nh là acid 3
-dihydroxyolean-12-en-
27-oic (Hình 3.32).
Các hp cht SR-8, SR-9, SR-10 lnh quercetin
(SL-5), quercitrin (SL-9) và bergenin (SL-10) c phân lnh
cu trúc phn trên mt Lc tân ph.
3.3. TÁC D
c tính cp c
ng ui li
c liu/kg), là liu cao nht có th cho chut uc, không th
hic tính cp trên chut nht trng.
3.3.2. Tác dng chng oxy hóa c
Kh n gc t do DPPH và gc t do O
2
-
vi IC
50
lt là
20,29 g/ml và 58,8 g/ml.
3.3.3. Hot tính c ch hong XO
Vi các n g/ml hot tính
c ch hong XO lt là 47,7 ± 3,3%, 34,0 ± 2,7%, 31,20 ± 1,0%,
24,4 ± 3,2%, 21,0 ± 2,0%.
3.3.4. Tác dng chng viêm c
3.3.4.1. T
u 80 mg/kg có tác dng c ch phù bàn chân chut ti
các thm 1, 3 và 5 gi sau khi gây viêm; liu 160 và 320 mg/kg có tác
18
dng c ch phù bàn chân chut ti các thm 3 và 5 gi sau khi gây
viêm.
Giá trị M ± SE; *, p<0,05; **, p<0,01 khi so sánh với lô chứng
Hình 3.34. Tác dng chng viêm ct
do carrageenan theo thi gian
3.3.4.2. Tác dng chng viêm mn ca trên mô hình gây u
ht thc nghim bng bông
Bng 3.19. ng ca lên khng u ht
Kt qu nghiên cu cho thi mc liu 80 mg/kg làm
gim khng u hi lô chng (p<
th hin tác dng làm gim khng khô so vi chng.
3.3.5. Tác dng gi
3.3.5.1. T trên mô hình
mâm nóng
Thi gian phn ng vi nhi ca chut ung vi mc
liu 80 mg/kg ti thm sau khi ung thuc 90 phút không khác bit có ý
ng kê so vi lô chng.
1 3 5 7
0
10
20
30
40
Chøng
Indomethacin (10 mg/kg)
CDMDLTP (80 mg/kg)
CDMDLTP (160 mg/kg)
CDMDLTP (320 mg/kg)
**
*
**
*
**
**
**
**
** *
**
Thêi gian (giê)
Møc ®é phï bµn ch©n ph¶i chuét (%)
TT
Lô
n
(mg/kg)
1
6
-
M ± SE (mg)
601,4 ± 64,8
90,0 ± 10,7
2
Prednisolon
6
5
M ± SE (mg)
266,7 ± 36,6
32,7 ± 7,1
X (%)
55,7
63,6
p
p
2,1
<0,01
p
2,1
<0,01
3
7
80
M ± SE (mg)
430,5 ± 23,9
70,0 ± 3,7
X (%)
28,4
22,2
p
p
3,1
<0,05
p
3,2
<0,05
p
3,1
>0,05
p
3,2
<0,01
19
Lô
n
Liu
(mg/kg)
(giây)
Chng
9
-
13,1 ± 0,8
Codein
9
60
47,5 ± 3,4**
9
80
15,4 ± 1,2
Giá trị M ± SE; **, p < 0,01 khi so sánh với lô chứng
3.3.5.2. T mô hình gây
acid acetic
i liu 80 mg/kg có tác dng làm gim s
ca chut nht trng so vi lô chng trong khong thi gian t phút th 10
n 25 (p<0,01).
3.21.
3.3.6. Tác d ng hp thu glucose ca các oleanan
triterpenoid phân lc t
3.3.6.1. Tác dc t bào ca các oleanan triterpenoid
Kt qu các hp cht SR-1, SR-2, SR-6 c t bào st
c la chn cho nghiên cng hp thu glucose.
3.3.6.2. Tác dng ng hp thu glucose ca các oleanan
triterpenoid
Sau khi kho sát hiu qu ng hp thu ca hp cht SR-1(40
M) theo thi gian thy rng có tác d p thu glucose vào
trong t bào st C2C12 khi cùng hoc không cùng vi insulin t
tht t 2 gi m dn. Da vào kt qu
thc nghim trên, thm 2 gi c ch p thu glucose
vào t i vi các hp cht khác.
TT
Lô
0 - 5
phút
5 - 10
phút
10 - 15
phút
15 - 20
phút
20 - 25
phút
25 - 30
phút
1
2
(0 - 6)
15
(7 - 19)
15
(12 - 18)
16
(14 - 23)
17
(14 - 19)
12
(10 - 17)
2
Indomethacin
10 mg/kg (n=8)
0
(0 - 2)
9
(0 - 17)
11
(4 - 13)
9
(7 - 11)
7
(5 - 9)
4
(0 - 8)
p
2,1
>0,05
>0,05
<0,05
<0,05
<0,01
<0,01
3
mg/kg (n=8)
0
(0 - 1)
7
(5 - 14)
11
(7 - 13)
9
(5 - 13)
9
(6 - 11)
9
(6 - 15)
p
3,1
p
3,2
>0,05
>0,05
>0,05
>0,05
<0,05
>0,05
<0,05
>0,05
<0,01
>0,05
>0,05
<0,05
20
Giá trị M ± SE; n=3 (3 thí nghiệm, mỗi thí nghiệm làm 3 lần)
;*, p<0,05; **, p<0,01 khi so sánh với chứng;
#
, p<0,05;
##
, p<0,01 khi so sánh với insulin.
Hình 3.37. Tác dp thu glucose vào t bào s
chut C2C12 ca các hp cht thm 2 gi sau khi vi cht
Kt qu ng hp thu glucose ca các hp
cht SR-1, SR-2, SR-6
- Các hp cht SR-1, SR-2 vi t p thu glucose vào t
bào chut C2C12 ph thuc vào n. Hp cht SR-1 các n 10,
20, 40 M làm ng hp thu glucose vào t ng kê so vi
chng (không th cht) l t là 114,90 ± 3,41% (p<0,01), 124,50 ±
4,22% (p<0,01), 123,90 ± 2,83% (p<0,01) và khi kt hp v
ng kê so vi insulin lt là 148,20 ± 2,46% (p<0,01),
151,10 ± 4,09% (p<0,01), 162,8 ± 4,48% (p<0,01). Hp cht SR-2 các
n 20, 40 M p thu glucose vào t ng kê
so vi chng lt là 112,6 ± 3,13% (p<0,01), 119,10 ± 1,28% (p<0,01)
và khi kt hp vi insulng kê so vi insulin lt
là 143,50 ± 2,43% (p<0,01), 144,60 ± 1,61% (p<0,01).
- hp cht SR-6 vi t bào các n 10, 20 M làm p thu
glucose vào t ng kê so vi chng lt là 113,1 ± 4,95
(p<0,01), 111,30 ± 3,41% (p<0,05). n 40 M, hp cht SR-6
21
hp thu glucose vào t bào so vi chng. Khi hp cht
SR-6 vi t bào cùng vi insulin không p thu glucose vào t bào
ng kê so vi insulin c 3 n nghiên cu.
N
4.1. V THC VT HC
nh tên khoa hc ca các mu Lc tân ph da vào các khóa phân
loi chi Astilbe ca Pan J.T., 1995; Pan J.T và Ohba H., 2001(Trung Quc)
và ca Trader W.B., 2006 (M)m ni b dn
loài A. rivuralis là lá kép chm ba, 2-3 ln lông chim ln (không có
lông mt ngoài) và không có cánh hoa. Nghiên cu trên các m
thp, cho thng, trong chi Astilbe,
duy nht ch có 1 loài (Astilbe rivuralis) là không có cánh hoa (hoc có
tiêu gi nh, các mu thu thp xã Bn
Khoang, huyn Sa Pa, tnh Lào Cai chc chn thuc loài Astilbe rivularis
Buch Ham. ex D. Don.
Lun án này cng u tiên mô t chi tim cu to
gii phu ca các b phn thân, r, và lá ca loài Astilbe rivularis Buch
Ham. ex D. Don có Vit Nam. Cùng vm hình thái ca cây,
lá, cm hoa, hoa, qu, hm gii phu ng dn liu
quan trng giúp cho vic nghiên cu, kim nghi nh "tính đúng"
cc liu Lc tân ph khi cn thit.
4.2. V HÓA HC
i ca công trình này là vic phân lc cu
trúc mt hp cht mi là acid 3
-trans-p-coumaroyloxy-olean-12-en-27-oic
(SR-2); 9 hp cht l u tiên phân l c t cây Lc tân ph:
aquilegiolid (SL-4), hyperin (SL-6), isoquercitrin (SL-7), engeletin (SL-8),
quercitrin (SL-9), acid 6
-hydroxy-3-oxoolean-12-en-27-oic (SR-1), 3
-
dihydroxylup-20(29)-en (SR-3), acid 3
-trihydroxyolean-12-en-27-
oic (SR-5), acid 3
-dihydroxyolean-12-en-27-oic (SR-7), trong s
4 hp cht: SL-4, SL-8, SR-1, SR-3 l u tiên phân l c t chi
Astilbe.
Kt qu nghiên cu v thành phn hóa hc khnh các triterpenoid
có nhóm carboxylic v trí C-27 là thành phn hóa ha chi
Astilbe nói riêng và ca h Saxifragaceae nói chung. Ngoài ra, các
n hóa hc
22
ng gp trong chi và h thc vt này.
bergenin, các
flavonoid (quercetin, quercitrin). Kt qu nghiên cu v thành phn hóa hc
còn góp phn làm sáng t công dng cha bnh viêm khp dng thp, gim
a Lc tân ph c s dng trong theo kinh nghim dân gian mt
s c châu Á.
4.3. V TÁC DNG SINH HC
4.3.1. V c tính cp
Vi liu cao nht có th cho chut uc, không có chut cht
lô th nghi nh LD
50
c y, theo
ng um vi an toàn rng.
4.3.2. V tác dng chng oxy hóa
n gc t do DPPH, superoxid khá tt (giá tr
IC
50
l t là 20,29 và 58,8 g/ml). Do vy là m gii thích tác
dng chn tác dng ging viêm ca
c liu.
4.3.3. V hot tính c ch hong XO
t tính c ch hong XO ph thuc vào liu, có xu
ng gim dn dn khi n gim. Trong công trình này, vic phân lp
c bergenin, quercetin và mt s flavonoid t c
chng minh có kh c ch hong XO (IC
50
>100 g/ml) và dn
gc t do O
2
-
mnh (IC
50
58,8 g/ml). Kt qu cho th
dng dn gc t do O
2
-
ch không phi ch do tác dng c ch i.
gii thích hot tính c ch hong XO, tác dng dn gc t
do O
2
-
cP và các tác dng viêm, gi
n bnh gout.
4.3.4. V tác dng chng viêm
Vi mc lic liu/kg) có tác dng
chng viêm cp và mn trên mô hình thc nghim, phù hp vi liu s
di theo kinh nghim dân gian. Kt hp vi kt qu nghiên cu
v thành phn hóa hc, kt qu th tác dng chng viêm cp và mn tính
trong công trình nghiên cu này n sáng t công dng cha tr
phong thp, nhc mi cc liu Lc tân ph trong dân gian.
4.3.5. V tác dng gi