Điều chế và tiêu chuẩn hóa hai tạp chất liên quan 5 methylthiazol 2 ylamin và n (2z) 3 ethyl 5 methyl 1,3 thiazol 2(3h) yliden 4 hydroxy 2 methyl 2h 1,2 benzothiazin 3 carboxamid 1,1 dioxyd của meloxicam

1
M U
Trong nghiên cu, sn xut thuc thành phm, ngoài v nghiên cu tác dng
c lý ca các hot cht chính, các nhà nghiên cu còn phi kho sát các tác dng
c lý ca các tp cht có th phát sinh trong nguyên liu hoc thành phm do
nguyên liu vào còn ln tp hoc tp cht phân hy phát sinh trong quá trình
sn xui vi các thu
ng, kháng viêm non-c các thung tr tiu thp thì vi
mt s i nh hàm ng hot cht chính hoc có tp cht phát sinh có th s
i hiu qu c tính an toàn ca thuc hoc gây các tác dng
khác nhau vi hu qu      a, vic s dng thuc
generic (thuc ht hn bo h quyn s hu) cho b giu tr
m nghim phi kim soát cht ch chng và hiu qu
ca thuc so vi thuc gc bing hot cht và tp cht phân hy.
Ví d: tp cht trong thuc trung hòa acid d dy Rolaid gây nôn ma, t
c bnh nhân phn ánh.




              



hai     5-methylthiazol-2-ylamin và N-[(2Z)-3-ethyl-5-methyl-1,3-
thiazol-2(3H)-yliden]-4-hydroxy-2-methyl-2H-1,2-benzothiazin-3-carboxamid-1,1-
dioxyd  
hai 
 

2
- 
1.1. 
1.1.1. nh tp cht liên quan theo mt s 
1.1.1.1. n Vit Nam IV [3]
nh 3 tp chính có th có trong meloxicam:
- Tp A: Ethyl 4-hydroxy-2-methyl-2H-1,2-benzothiazin-3-carboxylat-1,1-
dioxyd.

- Tp B: 5-methylthiazol-2-ylamin.

- Tp C: 4-hydroxy-2-methyl-N-ethyl--(5-methyl-1,3-thiazol-2-yl)-2H-1,2-
benzothiazin-3-carboxamid-1,1-dioxyd.

1.1.1.2. n Anh 2010 [8]
nh 5 tp chính có th p A, B, C, D, E, trong
p A và B ging vnh cn Vit Nam IV.



3
- Tp C: N-[(2Z)-3,5-dimethyl-1,3-thiazol-2(3H)-yliden]-4-hydroxy-2-methyl-
2H-1,2-benzothiazin-3-carboxamid-1,1-dioxyd.

- Tp D: N-[(2Z)-3-ethyl-5-methyl-1,3-thiazol-2(3H)-yliden]-4-hydroxy-2-
methyl-2H-1,2-benzothiazin-3-carboxamid-1,1-dioxyd.

- Tp E: Methyl 4-hydroxy-2-methyl-2H-1,2-benzothiazin-3-carboxylat-1,1-

dioxyd.

1.1.1.3. n M 2009 [23]
nh 4 tp chính có th 
hai tp A và B ging vnh cn Vit Nam IV.



4
- Tp C: Isopropyl 4-hydroxy-2-methyl-2H-1,2-benzothiazin-3-carboxylat-
1,1-dioxyd.

- Tp D: 4-methoxy-2-methyl-(5-methyl-1,3-thiazol-2yl)-2H-1,2-benzothiazin
-3-carboxamid-1,1-dioxyd.

1.1.2. 
1.1.2.1. Các nguyên nhân có th phát sinh tp
Tp cht có th xut hin trong quá trình sn xut, tinh chn phm hoc
khi sn ph ng. Tp cht xut hin  n tng
hp là các nguyên liu còn tn p
chu nht khi ki tinh khit ca mt hot cht,
cn phi dc tính lý hóa ca các cht và các thit b dng c  tách sn
phm tng hp. Ngoài ra, các tp cht có th có ngun gc t nguyên liu
do nguyên lic tinh khit.
Trong quá trình tinh ch sn phm sau khi tng h  i hin
ng các hóa ch tinh ch b ln vào trong sn phc chn la
 thích h làm sch sn pht quá trình phc
ti nhiu kin thc và k 
Sau khi sn ph ng cng bên
 p, nhi các hot cht chính ca sn

5
Kiềm
ph b phân hy dn phát sinh mt s tp cht, các tp cht này
c gi là tp cht phân hy. Hin nay, vi lão hóa cp tc có th d
c mt s tp cht phân h t o qun thích hp.
1.1.2.2. Quy trình tng hp meloxicam
Theo Tibor Mezei và cng s [21 tng h
Hình 1.1.  tng hp meloxicam ca Tibor Mezei và cng s
(1) R = CH
3
: Methyl-4-hydroxy-2-methyl-2H-1,2-benzothiazin-3-carboxylat-1,1-
dioxyd (tp E  n Anh).
R = C
2
H
5
: Ethyl-4-hydroxy-2-methyl-2H-1,2-benzothiazin-3-carboxylat-1,1-
dioxyd (tp A).
(2) 5-methylthiazol-2-ylamin (tp B).
(3) 4-hydroxy-N-(5-methyl-1,3-thiazol-2-yl)-2H-1,2-benzothiazin-3-carboxamid-
1,1-dioxyd.
(4) R = CH
3
: N-[(2Z)-3,5-dimethyl-1,3-thiazol-2(3H)-yliden]-4-hydroxy-2-methyl-
2H-1,2-benzothiazin-3-carboxamid-1,1-dioxyd (tp C  n Anh)
R = C
2
H

5
: N-[(2Z)-3-ethyl-5-methyl-1,3-thiazol-2(3H)-yliden]-4-hydroxy-2-
methyl-2H-1,2-benzothiazin-3-carboxamid-1,1-dioxyd (tp D   n
Anh).


6
Ngoài ra còn có qui trình tng hp ca meloxicam theo Gunter Trummlitz và cng
s vi bng sáng ch US Patent 4,233,299 [22] và theo Joseph G. Lombardino và
cng s vi bng sáng ch US Patent 3591584 7/17 [19].
1.1.2.3. Nguyên nhân phát sinh tp cht ca meloxicam
T hình 1.1 cho thy tp cht A và tp chnh ca n các
c) là thành phn chính trong quá trình tng hp meloxicam, vì vy trong quá
trình kt tinh và tinh ch có th còn ln mng nh hai thành phc bit,
tp cht B còn có th xut hin do s thy phân meloxicam  nu kin
ng thích hp.
Ttp chnh cn Anh 2010) có th xut hin trong quá
trình tng hp meloxicam theo c ng (hình 1.1). Các tp cht này có th
c gii thích là do tác nhân alcol mi sinh phn ng to thành tp chu
kin xúc tác thích hp. [24]
1.1.2.4. c tính [11][12]
Các tp chc tính nu nut phi, gây d ng khi tip xúc, có th
gây chóng mt, ng gà ng gt, hôn mê, suy thn cp, bng ch
suy gim chp. Các tp này có hi vi các loài sc, có th
là nguyên nhân gây tác hc và có th nguy him cho tr
trong bng m.
1.1.3. T B (5-Methylthiazol-2-ylamin )
1.1.3.1. Công thc, tên khoa hc
: C
4

H
6
N
2
S
: 114,17 g/mol.
: 5-methyl-2-thiazolamin.
: 5-methylthiazol-2-ylamin hay 2-amino-5-methylthiazol
1.1.3.2. 
ca
nhóm amin.: 92-96 °C.
1.1.3.3. Gii hn cho phép


7
a. Trong nguyên liu meloxicam
Theo chun Vit Nam IV [3], gii hn cho phép
ca tng pht c các tp (phân tích bc quá 0,3%,
p chc quá 0,1%.
n Anh 2010 [8] n M 2009 [23] nh tng ph
tt c các tc quá 0,3%, p cht B c quá 0,1%, qui
nh gii hn cho phép ca tp cht  n Vit Nam IV.
b. Trong ch phm cha meloxicam
n Vit Nam IV [3], gii hn
cho phép ca tng pht c các tp (phân tích b
0,15%.
1.1.3.4. ng hp tp cht B
Theo Arthur I.Vogel [6---
           


118-120 °C.





 
. 

. 2-amino-5-130-i áp
su.


8
Theo bng sáng ch s PCT/JP99/05895 [25---
         -  
-          
.

---
-  (mi sinh khi
cho khí clor phn ng v
55%. [27]

1.1.3.5. pháp nh gii hn tp cht B  [3]
 Sc ký lng.
ng A: Dung du chn pH
6,0 bng dung dch natri hydroxyd 8,5%.
ng B: Methanol.
Dung dch th: Pha dung dch ch phm có n  0,4% trong mt hn hp

methanol 40% - dung dch natri hydroxyd 0,4 M (50 : 3). Pha loãng 2 ln dung dch
này bng methanol 40%.
Dung di chiu (1): Pha loãng 1 th tích dung dch th thành 100 th tích bng
methanol 40%. Pha loãng 1 th tích dung dch này thành 10 th tích bng methanol
40%.
Dung di chiu (2): Pha dung dch tp cht chun ca meloxicam có n
0,4% trong mt hn hp methanol 40% - dung dch natri hydroxyd 0,4 M (50 : 3).
Pha loãng 2 ln dung dch này bng methanol 40%.


9
u kin sc ký: Co C
18
(150 x 4,6 mm; 5 µm), ct Inertsil ODS-2 là phù
hp. u dò quang ph t ngot  c sóng 260 nm và 350 nm. Th tích tiêm:
10 µl.
Tin hành s bng 1.1
Bng 1.1. m tp cht B cn
Vit Nam IV.
Thi gian
(phút)
ng A
% (tt/tt)
Png B
% (tt/tt)
0
60
40
2,5
60

40
12
30
70
Tiêm lt các dung di chiu (2), (1) và dung dch th. Tin hành sc ký
vi khong thi vi dung dch th khong 20 phút hon khi
tc ra gii. Phép th ch có hiu lc khi dung di chiu (2) cho sc ký
 ging vi s i chic cung cp cùng vi tp cht B ca meloxicam
chun.
Gii hn tp B: Trên s ca dung dch th  c sóng 260 nm, din tích pic
cng vi pic ca tp cht B khc ln tích ca pic thu
c trên s ca dung di chiu (1)  c sóng 350 nm (0,1%).
1.1.3.6. nh gii hn tp cht B n Anh 2010
 Sc ký lng.
ng A: Dung du chn pH 6,0
bng dung dch natri hydroxyd 1 M.
ng B: Methanol.
Dung dch th: hòa tan 40 mg cht cn kim tra vào hn hp 5 ml methanol và 0,3
ml natri hydroxyd 1 M, pha loãng thành 20 ml vi methanol.
Dung di chiu (a): Pha loãng 2 ml dung dch th thành 100 ml vi methanol.
Pha loãng 5 ml dung dch này thành 100 ml vi methanol.
Dung di chiu (b): Hòa tan 2 mg cht cn kim tra và 2 mg tp B vào hn hp
5 ml methanol và 0,3 ml natri hydroxyd 1 M, pha loãng thành 25 ml vi methanol.


10
u kin sc ký: Co C
18
(150 x 4,6 mm; 5 µm). Nhi ct 45 °C. Tc
 dòng 1,0 ml/phút. u dò quang ph t  c sóng 260 nm và 350 nm. Th

tích tiêm mu: 10 µl.
Tin hành sc ký các dung d bng 1.2.
Bng 1.2. m tp cht B cn
Anh 2010.

Trên s ca dung di chiu (b), thi ca pic tp B so
vi pic meloxicam (th   ng 7 phút) là khong 0,5.  c sóng
260 nm, h s phân gii gia pic meloxicam và pic tc nh 
Gii hn tp B: Trên s ca dung dch th  c sóng 260 nm, din tích pic
ca tp cht B c ln tích cc trên s ca dung
di chiu (a)  c sóng 350 nm (0,1%).
1.1.3.7. pháp nh gii hn tp cht B n M [23]
 Sc ký lng.
  : Dung d      u ch  n
pH 6,0 bng dung dch natri hydroxyd 1 N.
: Methanol.
Dung dch phù hp h thng: Cân 4 mg meloxicam chun và 4 mg tp B chun, cho
nh mc 50 ml, hòa tan bng 5 ml methanol và 0,3 ml dung dch natri
hydroxyd 1 Nn vch, lu.
Dung dch chun: nh mc 20 ml,
hòa tan bng 5 ml methanol và 0,3 ml dung dch natri hydroxyd 1 N, thêm methanol
n vch, lu. Pha loãng 2 ml dung dch này thành 100 ml vi methanol.
Dung dch th: nh mc 20 ml,
hòa tan bng 5 ml methanol và 0,3 ml dung dch natri hydroxyd 1 N, thêm methanol
n vch, lu.
Thi gian
(phút)
ng A
(%)
ng B

(%)
0-2
60
40
2-10
60  30
40  70
10-15
30
70


11
u kin sc ký: Co C
18
(150 x 4,6 mm;
. u dò quang ph t ngot  c sóng 260 nm và 350 nm.
Th tích tiêm: 5 µl.
Tin hành sc  bng 1.3.
Bng 1.3. m tp cht B cn
M 2009.
Thi gian
(phút)
ng A
(%)
ng B
(%)

0-2
60

40
ng dòng
2-10
60  30
40  70
Gradient tuyn tính
10-15
15-15,1
15,1-18
30
30  60
60
70
70  40
40
ng dòng
Gradient tuyn tính
Cân bng h thng
Tin hành sc ký dung dch phù hp h thng, thi ca pic tp
cht B so vi pic meloxicam (thng 7 phút) là khong 0,4 .  c
sóng 260 nm, h s phân gii gia pic meloxicam và pic tp cht c nh

Tin hành sc ký các dung dch chun và dung dch th.
Ph tp cht B c tính theo công thc:
C% = 100(C
S
/C
T
)(1/F)(r
U

/r
S
)
  
S
: n  meloxicam (mg/ml) trong dung dch chun; C
T
: n 
meloxicam (mg/ml) trong dung dch th; F: h s i vi tp B,
F=1); r
U
: din tích pic tp cht B trong dung dch th  c sóng thích hi
vi tp B: 260 nm); r
S
: din tích pic ca meloxicam trong dung dch th  c
sóng 350 nm.
Gii hn cho phép (%, kl/kl) ca tp B là 0,1%.
1.1.3.8.  pháp nh gii hn tp cht B bng 
Tp chng bng cách to phc màu vi 7-cloro-4-nitrobenz-2-
oxa-1,3-diazol (NBD- 
sau: [10]


12
- Pha dung dm borat pH 8: hòa tan 0,620 g acid boric và 0,750 g kali
u chnh n pH 8 bng natri hydroxid 0,1 M và
c v 200 ml.
- Cân chính xác 10 mg meloxicam, nh mc 100 ml, thêm 20 ml
nc v  ngui,
u chn pH 9 bng acid hydrocloric 2 M. Ly mng dung d

ch
NBD-Cl (0,4% kl/tt), lu, n 100
0
C trong 30 phút.  ngui, cho
nh mc 10 ml, acid hóa bng 0,1 ml acid hydroclorid 0,1 M và thêm
methanol v , l u. Ti    hp th ca mu trng và mu th
trong khong 350  700 nm.
1.1.4. Tp cht D
1.1.4.1. Công thc, tên khoa hc
: C
16
H
17
N
3
O
4
S
2
.
: 379,45 g/mol.
  : N-[(2Z)-3-ethyl-5-
methyl-1,3-thiazol-2(3H)-yliden]-4-
hydroxy-2-methyl-2H-1,2-benzothiazin-3-carboxamid-1,1-dioxyd.
Danh pháp khác: 2H-1,2-Benzothiazin-3-carboxamid, N-[(2Z)-3-ethyl-5-methyl-
2(3H)-thiazolyliden]-4-hydroxy-2-methyl-, 1,1-dioxyd.
1.1.4.2. Tính cht lý  hóa
Dng bt màu vàng nhn  u king, thc t không tan trong
c, rt khó tan trong methanol và ethanol 99%, khó tan trong aceton,
dimethylformamid, DMSO và    hn hp dicloromethan : methanol

(20 : 1), tan tt trong dung dch kim pH 10  25
0
C. Nhi nóng chy 280 ± 2
0
C
1.1.4.3. Gii hn cho phép
a. Trong nguyên liu cha meloxicam


13
n Anh 2010 [8], gii hn cho phép ca
tng pht c các tp (phân tích b
tp cht D c quá 0,1%.
b. Trong ch phm cha meloxicam
n Anh [8], gii hn cho phép
ca tng ph t c các tp (phân tích bng HPLC) không c quá 0,5%
p cht D c quá 0,2%.
1.1.4.4. ng hp tp cht D
tìm thy bài báo hay công trình nghiên cu c th c công
b v tng hp tp cht D n Anh 2010.
1.1.4.5. ng/nh gii hn tp cht D
n Anh [8] ghi rõ png tp cht D trong chuyên lun
meloxicam bc ký lng hiu kin s
nng tp cht B  mc 1.1.3.6.
1.2. 
1.2.1. Nhi nóng chy

chng ti
.


1, 2 hay 3 theo ph ln Vit
Nam IV. [3]



. [18]
1.2.2. 
.


14
              

.



f
.




f
-

. [7]
1.2.3. 

, khôn




nhau. [4]
1.2.4. 
n di mao qu tách các ti
phân tán trong dung dn gii tác dng c nhy không
bng so vi HPL phân gii cao do s t ln nên din tích pic
hp, vì vy các chc hoàn toàn và tinh khit. Tuy nhiên, kt qu không n
 lp li không cao do ph thuc vào s n thm.
1.2.5. 
Cng t h bin và s bin gii toàn b ph
c nhi cu trúc,
nu kt hp vi các thit b hi i có th c d liu tt t mu có khi


15
ng nh t  cho bic các nhóm chc,
s liên kt nguyên t, s i và ngoi phân t u hình và cu
di. Khi có s hin din tp cht s i s  dch
chuyn hóa hc khi so sánh vi ph chun.
1.3. 
1.3.1. 
Chi chiu là chng nh dùng trong các phép
th nh v hoá hc, vt lý và sinh hc. Trong các phép th 
cht ca chi chic so sánh vi các tính cht ca cht cn th. Chi
chiu ph tinh khit phù hp vi m dng. [3]
1.3.2. Phân loi cht i chiu [9]
n g
.


.

1.3.3. Thit lp chi chiu
- 
bng 1.4
Bng 1.4 Yêu cu v  tinh khit chi chiu theo quy trình phân tích [26]




Th tinh khit
 hot cht chính
> 99,5%
 tp cht
> 98%



- -
(sc ký lp mng, HPLC, GC).
- :


16
, phân tích, nh 
).

.
-  giá tp cht liên quan bng nhi

-        c th nh    
.
- .
1.3.4. o qun và s dng


 u kin bo qun tt nht là ch i chic
 th c thc
hin trong buc chân không và bo qun  5
0

n.
1.3.5.  nh và chu k i
u quan trng ca chi chi i theo dõi bng cách
king k các chi chiu và thay th chúng khi có nhng
i quan trng. Chn l h  n
nh ca chi chiu tùy thuc vào bn cht c kim
tra sn phm phân h 
- Sc ký lp m tìm tp cht liên quan.
- c bng chu Karl-Fisher hay gim khng do sy khô.
- Sc ký lng hi nh gii hn tp cht.
Tn su  i tùy thuc vào các thông s   c, mu th
dùng th nghiu kin bo qun. Nói chung s chun hóa li các chi chiu
 ngh  i vi chi chiu  nhy cm cao có th là 6
tháng hoc 12 tháng.


17
1.3.6. Hn dùng ca chi chiu
Chi chiu không ch nh hn dùng, phn lc thay th bng lô sn xut

mi khi có nhng bii thuc tính riêng quan trc ghi nhn sau c
i theo chu k nh.


18
 
2.1.  
2.1.1. 
Tp cht B: 5-methylthiazol-2-ylamin.
Tp ch    n Anh 2010) N-[(2Z)-3-ethyl-5-methyl-1,3-thiazol-
2(3H)-yliden]-4-hydroxy-2-methyl-2H-1,2-benzothiazin-3-carboxamid-1,1-dioxyd.
2.1.2. Cht chun -  - Dung môi
Meloxicam chun do Vin kim nghim thuc TP.HCM cung cp:
- S kim soát: QT 089060911.
- ng: 99,35% tính trên ch phm nguyên trng.
- u kin bo qun: 5 °C trong t lnh.
Hóa cht 5-methylthiazol-2-ylamin:
-  tinh khit: 98%
- Hãng sn xut: Acros organics (B)
- S lô: A0275029
-  5 g
- Hn dùng: 07/2015
Nguyên li tng hp tt chun EP 6.3
- Hãng sn xuc phm Zhejiang Excel (Domesco phân phi)
- S lô: CML20110204
- Khng: 100 g
- Hn dùng: 01/03/2014
Hóa cht dùng cho phân tích: triethylamin, natri hydroxyd, acid acetic, natri hydrid,
silica gel c ht 230  400 µm (Merck)
Dung môi dùng cho sc ký lng (Merck): methanol, isopropanol.

Dung môi dùng cho phân tích: methanol, dicloromethan, n-hexan, aceton,
cloroform, dimethylformamid.
2.1.3. 
Bn mng silica gel 60 F
254
c).


19
B c).
Cân phân n t KERN ABS 220-c)
T sy ULM-500 Memmert c)
Ct sc ký Gemini C
18
(250 x 4,6 mm ; 5 µm), Phenomenex (M).
Ct sc ký Gemini - NX C
18
(150 x 4,6 mm ; 5 µm), Phenomenex (M).
Máy cô quay RE300DB, Stuart (Th)
Máy chu n th inoc).
m chy Stuart SMP10 (Anh).
 hng ngoi Shimadzu FTIR-8201PC (Nht).
Máy sc ký lng hiu dò PDA 2996 (Mc ni vi
máy tính x lý kt qu bng phn mm Empower-2.
2.2. 
2.2.1. u ch tp cht liên quan ca meloxicam
2.2.1.1. Tinh ch tp cht B ca meloxicam
 d nh tit tinh li trong dung môi
thích hp.
 ki tinh khit bng nhi nóng chy và sc ký lp mng.

- [3]
Cho tp chn vào ng mao qun, lèn bt bng cách gõ nh ng mao
qun xung mt phng c có mt lp ch phm cao 4  6 mm.
Tin, ly giá tr trung bình.
- 
Pha dung dch tp cht B trong methanol, chm trên bn mng và khai trin vi các
h dung môi khác nhau.
Tp cht c coi là tinh khit v sc ký khi trên các bn mng khai trin vi các
h c s không có vt l nào.


20
2.2.1.2. Tng hp tp cht D ca meloxicam
a. Tng hp
Phn ng tng hp



 phn ng
D ái nhân ca phn ng N-alkyl hóa. Da theo tài liu EP 1 717 229
B1 [13], tp cht c tng hp theo  phn ng N-alkyl hóa nguyên t n
ca vòng thiazol vi tác nhân là alkyl-halid (ho) trong dung môi h
c DMF vi s hin din ca base mnh là natri hydrid 
nhi t 0
0
n nhi phòng, thi gian t n 3 gi.

Tin hành
 ng v DMF khan trong bình cu, thêm tng git
hn dch natri hydrid (60% trong du khoáng) trong DMF khan vào dung dch

c làm ln 5
0
C, khuy khong 5 phút. Thêm ethyl bromid
vào hn hp trên và khuy  nhi phòng. Theo dõi phn ng bng sc ký lp
mn khi xut hin vt m n khi xut hin ta. Lc ly ta,
ra ta vài ln bng DMFa li vc và methanol, sy khô.
b. Tinh ch
D tan ca meloxicam và sn phm tng hp trong DMF, cho mng
ln DMF vào sn phm tng hp, siêu âm 5 phút, lc ly ta, ra ta vài ln bng


21
  a li v c và methanol, sy khô. Loi meloxicam tha bng
c ký ct. Lng silicagel np vào ct gp 25  50 ln so vng
mu cn tinh ch; mc thêm mng ti thing và trn
u vi silica gel theo t l 1/10. Cp lên ct
c nh vi ng. Ra gii hng ln sn phm, cô thu hi
dung môi, ra li vc và methanol ln na, sy khô.
c. Th tinh khit
 ki tinh khit bng nhi nóng chy và sc ký lp mng.
- [3]
Thc hi c 2.2.1.1.
- 
Hòa tan mt ít sn phm tng hp sau khi tinh ch vào dicloromethan, c
hi c 2.2.1.1.
d. nh cu trúc
Sn phm sau khi tinh ch   nh s có mt cc
c trong phân t, ph MS  nh s khi ca phân t và
các mnh v ca phân t ng vi công thc d kin và ph NMR  nh
cu trúc.

e. Hiu sut phn ng
Hiu sut thô c tính dng sn phc sau khi tinh ch 
c ký ct) so vng nguyên liu.
Hiu sut tinh ch c tính dng sn phm sau khi qua ct sc ký so vi
c khi qua ct sc ký.
2.2.2. các bng HPLC
2.2.2.1. 
Chun b mu th: Cân chính xác 10 mg tp cht B (hoc D), thêm 4 ml dung dch
 ngui, thêm methanol
v 100 ml, lu. Lc qua màng lc 0,45 µm.
Mu trng: Chun b giu th p cht B (hoc D).


22
Chu kin sc ký thích hp da vào:
- Pic tp cht B (hoc D): h s i xng A
S
nm trong khong 0,8  1,5, tách
hoàn toàn các pic khác trên s (k c  tinh khi
99%, th gim thi gian phân tích, tit kim dung môi.
Bng 2.1. u kin sc ký kho sát tp cht B và D
u kin sc ký
Tp B
Tp D
c sóng phát hin
Da vào ph UV ti tha tp B hoc D
ng


- ng

MeOH  c
MeOH  c
MeOH  isopropanol
MeOH  c thêm triethylamin
- T l dung môi pha
ng
50:50
60:40
45:55
65:35
40:60
70:30
T dòng
0,6 ml/phút
0,6 ml/phút
0,8 ml/phút
0,8 ml/phút
1,0 ml/phút

Th tích tiêm mu
10 l và 20 l vi n mu 100 µg/ml
Thêm base h 
ng
Triethylamin 1 mM; 0,8 mM
Co

Gemini C
18
(250 x 4,6 mm; 5 µm)
Gemini-NX C

18
(150 x 4,6 mm; 5 µm)
2.2.2.2. 
Vic th tinh khit tp cht liên quan ca meloxicam
c da theo ICH. [15]
 
Chun b 1 mu th ca cht c tinh khit vi n khong 100
µg/ml, tin hành sc ký 6 ln.
Tính phù hp ca h thnh da trên các thông s a sc
ký: din tích pic (S) và th
R
 phân gii (R
S
), h s i xng (A
S
).


23
nh ca 3], yêu cu v tính phù hp ca h thng cho các
chuyên lun Vi lch chun tc phép
cho các ln tiêm lp li là 2%. Ngoài ra, h thng pht các yêu cu sau:
- H s i xng ca pic chính phi trong khong 0,8-
S

-  phân gii gia pic chính và pic ph phi l
S
> 1,5).
 
Phi phân bic cht phân tích vi các cht khác.

Tin hành su kin 3 mu: mu trng, mng và mu th.
Yêu cu:
- S mng, mu trng: nu xut hii
c xut hin ti v ng ca pic tp cht B (hoc D) trong sc ký
 mu th, và các pic này phi có ph hp th UV ging vi các pic có thi gian
ng trong s mu th.
- S  mu th phi không xut hin pic tp trùng vi pic tp cht B
(hoc D), pic tp cht B (hoc D) phi tinh khit.
 
- Chun b các mu th có n ng sao cho trong sc ký  thu
c các pic chính có chiu cao trong khong 0,1   hp th. Tin hành sc
ký các mu th  6 n khác nhau, mi mu tiêm 3 ln, nh din tích pic,
tính giá tr trung bình.
- 
V ng biu din ca din tích pic trung bình theo n phân tích.
nh các h s B
0
 dc), B  gc), R
2
a h s 
quan) c
0
x + Bng chp nhn s tuyn tính khi

2

S d kim tra tính thích hp ci quy và
a các h s i quy.
 
 chính xác c hin   lp l chính xác trung gian.

24
- 
Thc hin bng cách chun b 6 mu th ca cht c tinh khit  nng
 thích hp trong min giá tr o sát. Mi mu tin hành sc ký 2 ln.
- 
Ti lp li và làm trong 3 ngày khác nhau vu kin làm vic
i thc hin.
2.2.2.3. Kt qu ki tinh khit các tp cht
a. H(Khoa  - 
Y D.HCM)
Tin hành sc ký 3 mu th ti n o sát, mi mu tiêm 2 l
tinh khit trung bình ca mu th.
b. P.HCM
Tin hành theo quy trình ki tinh khit các tp chng.
2.2.3. 
2.2.3.1. Tính cht
Da vào cnh hình dng, màu, mùi ca cht.
 tan: bng dung môi vào 1 g cht th   nhi 25 ±
2 ºC trong 30 phút, c cách 5 phút li ln Vit
Nam IV. [3]
2.2.3.2. nh tính
 Nhi nóng chy [3]
Tin hành ging mc 2.2.1.1
 Ph hng ngoi:
Ti hng ngoi bng k thut dp viên KBr.
- Chun b mu: nghin 1-2 mg cht th vi 300-400 mg bt mn kali bromid
y khô. Lu  to mng kính 13 mm và cho ph có
 phù hp. Nghin hn hp cn thn và ru lên mt khuôn thích hp.

Nén khuôn có hn hp cht th ti áp sut khong 800 u kin chân
không.


25
- Tinh s sóng ca các nhóm chc
cu to ca cht th.
 Sc ký lng hi
Tin hành sc ký 3 mu th u kin. Trên s, da vào thi
 nh pic tp cht B (hoc D).
2.2.3.2.  tinh khit
 tinh khit ca mu th bng  mc 2.2.2.
2.2.4. ng nht l 
Ti giá dng dn ca ISO Guide 35 [17].
Phòng thí nghin phòng thí nghit tiêu chun GLP hoc ISO
 ting nht lô.
Thc hin ti khoa Thit lp cht chun  chi chiu và khoa Vng,
Vin kim nghim thuc thành ph H Chí Minh.
Ly mu: s dng cách ly ngu nhiên theo phn mm Excel, s l (g) c l
kim tra:
1N g 
l, N là s l c.
ng: áp d tinh khit  tinh
ng, mi l c kim tra 2 ln, thng kê kt qu c.
Loi giá tr b ng bng trc nghim Dixon [20]: xp các giá tr  ng
ng nht l theo th t t nh n ln. Tính G
min
và G
max
ca hai

giá tr nh nht và ln nht. Các giá tr ng khi G
min
và G
max
u
nh 
0,05
.
ng nht gia các l [17]. Các l c coi
là ng nht khi
bb
r
u
n
S


S
r
 lch chui
n: s ln lp li ca kt qu 
u
bb
 m b  ng nht gia các l
Thc t kc yêu cu trên nên có th áp dng công thc chuy
tính u
bb