kỹ thuật điện di protein, I khái niệm

Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
I. Khái niệm
II. Ứng dụng của hiện tượng điện di.
1. Ứng dụng kỹ thuật điện di protein SDS-PAGE cải
thiện và nâng cao phẩm chất các giống lúa.
2. Điện di phân tích ADN và ARN.
3. Điện di thuốc.
4. Phân tách protein bằng điện di trên gel.
5. Điện di Protein và DNA trên cây bưởi Da xanh.
6. Ứng dụng kỉ thuật điện di Isozyme trong công tác
định danh giống cao su ở vườn nhân tược ghép.
7. Dùng phương pháp điện di đối với da
8. Máy điện di


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

I. Khái niệm
Điện di: Sự di chuyển của các hạt mang điện dưới
tác dụng của điện trường và chiều chuyển động
của nó về điện cực trái dấu.
Điện di hay điện di trên gel (electrophoresis hay
gel electrophoresis) áp dụng trong sinh học phân tử
là một kĩ thuật để phân tích các phân tử ADN, ARN
hay protein dựa trên các đặc điểm vật lý của chúng
như kích thước, hình dạng hay điểm đẳng điện tích
(isoelectric point).


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

II. Ứng dụng của hiện tượng điện di.
1. Ứng dụng kỹ thuật điện di protein SDSPAGE cải thiện và nâng cao phẩm chất
các giống lúa.


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

Điện di protein SDS-PAGE (Sodium
Dodecyl Sulfate PolyAcrylamide) có thể ứng
dụng trên thực vật, động vật, vi sinh vật.
Trong chọn tạo giống lúa, kỹ thuật này
giúp phát hiện nhanh những tính chất nổi bật
như mùi thơm, protein, amylose...


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

Buồng điện di protein


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

Phân tích protein bằng điện di SDS-PAGE


Cải thiện
chất
Tài phẩm
liệu chia
sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

những giống đặc sản
như
Nếp Bè 1-2 có chất
lượng cơm nấu ngon,
dẻo, chiều dài hạt và
năng suất cao hơn
giống Nếp Bè trước
đây nhờ ứng dụng kỹ
thuật điện di protein
SDS-PAGE để phục
tráng giống lúa Nếp Bè
đặc sản tại tỉnh Tiền
Giang.

Nếp Bè 1-2


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

Jasmine 85 có biểu hiện bạc bụng, mùi thơm
khơng ổn định, khó tìm được thị trường tiêu
thụ.
Nhưng sau khi giống Jasmine được cải thiện
phẩm chất bằng kỹ thuật điện di protein SDSPAGE, các giống này phát triển tốt, ít sâu bệnh,
có thể đạt năng suất và chất lượng cao.


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

 Kỹ thuật điện di protein SDS-PAGE giúp

thanh lọc các dịng bị thối hóa và tuyển
chọn giống theo hướng cải thiện phẩm
chất cơm nấu, làm mềm cơm. Đặc biệt là
tăng hàm lượng protein, giúp ngon cơm
hơn. Kỹ thuật này có chi phí thấp, cho kết
quả nhanh hơn so với phương pháp chọn
lọc truyền thống. Khả năng chống chịu
sâu bệnh hại của các giống này tương đối
tốt. Trong các vụ qua, có một số đợt rầy
nâu di trú nhưng lúa không bị ảnh hưởng
nhiều. Các giống đang trổ bông đều nên
năng suất cao.


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

Việc tạo ra giống lúa thích nghi với điều
kiện mặn xâm nhập vào đất liền bằng kỹ
thuật điện di SDS-PAGE protein đã phát
hiện được các giống chỉ thị thơm và chịu
mặn có thể ứng dụng ngay cho công tác
lai chọn.


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

Kỹ thuật điện di protein SDS-PAGE


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

2. Điện di phân tích ADN và ARN
Nguyên tắc của phương pháp là do: dưới tác động
của điện trường, các phân tử ADN (thường tích
điện âm) khác nhau về kích thước, điện tích, mức
độ cuộn xoắn và dạng phân tử (mạch thẳng hay
mạch vòng) sẽ di chuyển qua hệ mạng của gel từ
cực âm (cathode) sang cực dương (anode) với tốc
độ di chuyển khác nhau. Vì vậy, chúng dần dần
tách nhau ra trên trường điện di, qua đó người ta có
thể thu thập và phân tích được từng phân đoạn
ADN hoặc gen riêng rẽ. Trên điện trường các phân
đoạn ADN có kích thước càng nhỏ càng có tốc độ
di chuyển trên điện trường nhanh hơn.


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

Sau khi điện di kết thúc, các phân tử ADN có
thể quan sát thấy nhờ sử dụng các thuốc
nhuộm phát huỳnh quang, chẳng hạn như
ethidium (chất này gắn kết với ADN bằng
cách cài vào khe ở giữa các nucleotit). Mỗi
một băng điện di thường phản ánh một tập
hợp các phân tử ADN có cùng kích thước.


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

Điện di gel agarose các chế phẩm ADN thực vật
A: Trung Quân , B: Quế Bì,

C: Lộc Vừng, D: Săng Mây.
M: Thang chuẩn ADN l HindIII
MĐ: Mã Đà, CT: Cát Tiên


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

Điện di gel agarose các sản phẩm RAPD-PCR của mẫu
Trung Quân với các mồi D5, D6, D7, OPA4, OPA10 và
OPA12
M: Thang chuẩn ADN 1 kb, MĐ: Mã Đà, CT: Cát Tiên


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

Điện di gel agarose sản phẩm RAPD-PCR của mẫu Quế Bì với các
mồi OPA4, OPA10 và OPA12
M: Thang chuẩn ADN 1 kb, MĐ: Mã Đà, CT: Cát Tiên


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

Điện di gel agarose sản phẩm RAPD-PCR của mẫu Lộc Vừng với các
mồi P4, P10, Z16, Z17, Z18 và Z19.
M: Thang chuẩn ADN 1 kb, MĐ: Mã Đà, CT: Cát Tiên


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

Điện di gel agarose sản phẩm RAPD-PCR của mẫu

Săng Mây với các mồi P4, P10, Z16, Z17, Z18 và Z19.
M: Thang chuẩn ADN 1 kb, MĐ: Mã Đà, CT: Cát Tiên


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

Điện di trên gel agaroza 1% để kiểm tra các
plasmit tái tổ hợp


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
* Ứng dụng: điện di huyết sắc tố giúp cho việc xác
định các huyết sắc tố khơng bình thường gây ra
nhiều bệnh lý...), bệnh như: bệnh rối loạn huyết sắc
tố về số lượng (beta- thalassemia, denta-thalassemia
rối loạn huyết sắc tố về chất lượng (bệnh huyết sắc
tố S, M, E,...). Đây là những bệnh thiếu máu huyết
tán bẩm sinh bất thường về huyết sắc tố .


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

Điện di xác định huyết thống


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

ĐIỆN DI RA CÁC VẠCH DÀI NGẮN KHÁC NHAU. HÌNH
MINH HỌA CỦA CÁC ĐOẠN DNA

Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
3. Điện di thuốc
Khái niệm.
Điện di thuốc (electrophoresis) là phương pháp dùng
dòng điện một chiều đều để đẩy một số ion thuốc
điều trị vào cơ thể hoặc lấy các ion thuốc có hại ra
khỏi cơ thể.
* Nguyên lý của phương pháp điện di thuốc là: Các
điện tích cùng dấu thì đẩy nhau, trái dấu thì hút nhau.
Một dung dịch mà trong đó chất hịa tan có thể phân
ly thành các ion (gọi là dung dịch điện ly), khi được
đưa vào một điện cực và cho dịng điện một chiều
chạy qua thì các ion cùng dấu với điện cực đó sẽ bị
đẩy ra khỏi điện cực để đi vào cơ thể.


Tài lại
liệunếu
chia muốn
sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn
Ngược
lấy một ion có hại (ví
dụ ion Ca+2) ra khỏi cơ thể thì ta đặt điện
cực trái dấu vào vùng da nhiễm ion, điện
cực đó sẽ hút các ion này ra khỏi cơ thể về
phía nó.


Tài liệu chia sẻ tại: wWw.SinhHoc.edu.vn

- Tác dụng của điện di thuốc gồm tác dụng do
dòng điện một chiều đều và tác dụng do ion
thuốc gây ra.
Tác dụng của dòng điện 1 chiều đều
+ Tác dụng giãn mạch: Tại vùng da đặt điện
cực có vải đệm sẽ có hiện tượng đỏ da do
giãn mạch và có thể kéo dài hàng giờ. Tác
dụng giãn mạch sẽ làm tăng cường tuần
hoàn và dinh dưỡng, tăng chuyển hóa,
chống viêm. Cơ chế do dịng điện tác dụng
trực tiếp lên hệ thần kinh vận mạch.