Nghiên cứu biểu hiện Lysin của bacteriophage chủng K đặc hiệu Staphylococcus aureus ở Escherichia coli (Khóa luận tốt nghiệp)

��n ......................................................................................................................44
4.1.3. Kiểm tra chiều gắn khung đọc của đoạn chèn trong vector pET32a(+) ........45
4.2. Biểu hiện gene mã hóa lysin trong vi khuẩn ......................................................48
4.2.1. Biểu hiện lysin phage trong vi khuẩn E. coli ..................................................48
4.2.2. Tối ưu hóa điều kiện biểu hiện ........................................................................49
Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ..................................................................53
5.1. Kết luận ..............................................................................................................53
5.2. Kiến nghị .............................................................................................................53
TÀI LIỆU THAM KHẢO


1

Phần 1
MỞ ĐẦU
1.1. Đặt vấn đề
Từ khi Alexander Fleming (1881-1955) tìm ra kháng sinh penicillin cho đến
nay, con số chất kháng sinh được nghiên cứu đã lên tới trên 5.000. Sự ra đời của
kháng sinh được xem là thần dược mang lại sự sống cho hàng trăm triệu người
trên thế giới. Số lượng kháng sinh mới được phát triển, bào chế ngày càng tăng để
bắt kịp sự xuất hiện của các loại vi khuẩn gây bệnh mới.
Tuy nhiên, vi sinh vật gây bệnh trở nên kháng với các loại thuốc điều trị là
một vấn đề ngày càng lớn trong việc chăm sóc sức khỏe cộng đồng. Khả năng
kháng lại kháng sinh của vi sinh vật de dọa ngày càng cao việc điều trị các bệnh
nhiễm trùng do vi khuẩn, ký sinh trùng, nấm… gây ra. Ngày nay, khoảng 70% vi
khuẩn gây nhiễm trùng có mặt tại các bệnh viện có khả năng kháng ít nhất một
trong những loại thuốc thường được sử dụng để điều trị. Nguy cơ xuất hiện các
chủng siêu vi khuẩn có khả năng kháng tất cả các loại kháng sinh hiện có là mối lo
sợ của nhân loại và là thách thức lớn đối với giới khoa học. áo cáo giám sát toàn
cầu về kháng kháng sinh năm 2014 của WHO cho thấy khả năng kháng thuốc kháng
sinh không còn là một dự đoán cho tương lai, nó đang xảy ra, trên khắp thế giới,

gây ra nhiều rủi ro trong khả năng điều trị những bệnh nhiễm trùng phổ biến trong
cộng đồng và bệnh viện.
Vi khuẩn tụ cầu (Staphylococcus) là một tác nhân gây ra rất nhiều loại bệnh
nặng và có khả năng kháng kháng sinh rất cao. Nhiễm khuẩn tụ cầu có thể được
chữa trị bằng kháng sinh bình thường, nhưng nhiều trường hợp vi khuẩn trở lên
kháng thuốc, nhiễm vào các cơ quan nội tạng gây tử vong và những di chứng nặng
nề khác. Staphylococcus aureus (S. aureus) là một tác nhân gây viêm, ngộ độc thực
phẩm và hội chứng sốc độc với tỷ lệ tử vong cao (Noble WC et al., 1998). Năm
1941, tất cả các tụ cầu khuẩn vàng gây bệnh dễ dàng bị diệt bởi kháng sinh
penicillin, nhưng chỉ 3 năm sau tụ cầu khuẩn vàng đã trở nên kháng thuốc. Các


2

Trung tâm kiểm soát và ngăn ngừa bệnh của Mỹ cho biết năm 1972 chỉ có 2%
trường hợp viêm nhiễm khuẩn tụ cầu vàng kháng thuốc, nhưng năm 2004 con số
này là 63%. Cũng tương tự một số vi khuẩn khác, S. aureus tiết ra β lactamase để
chống kháng sinh ampicillin, hoặc axetyl transferase để chống kháng sinh
chloramphenicol… Một số thống kê cho thấy hiện nay có hơn 95% loài vi khuẩn
kháng thuốc penicillin, thậm chí có khả năng kháng nhiều loại thuốc kháng sinh,
điển hình như S.aureus kháng methicillin (MRSA).
Đứng trước nguy cơ trên, nhiều nhà khoa học đang nỗ lực nghiên cứu các loại
kháng sinh có nguồn gốc khác từ động vật, thực vật, côn trùng... để tìm ra loại
kháng sinh mới an toàn, có hiệu lực cao và khó bị vi khuẩn kháng lại. Một trong các
chiến lược hiệu quả đang được các phòng thí nghiệm trên thế giới nghiên cứu để
chống lại các vi khuẩn kháng thuốc đó là sử dụng lysin. Lysins, còn được gọi là
endolysins hoặc murein hydrolases, là enzyme thủy phân peptidoglycan của các
phage trong giai đoạn cuối cùng của chu kỳ ly giải tế bào. Khi tác dụng ngoại sinh
(như lysin tái tổ hợp được tinh sạch) lên các vi khuẩn Gram dương gây ly giải
nhanh chóng và tiêu diệt tế bào vi khuẩn (Loresser MJ, 2005).Một số nghiên cứu

gần đây đã chứng minh tiềm năng lớn của các enzym này để kiểm soát và điều trị
bệnh nhiễm trùng bề mặt niêm mạc và nhiễm trùng toàn thân. Ngoài ra, lysin cũng
có tiềm năng trong phát hiện và loại bỏ các tác nhân gây nhiễm độc thực phẩm. Các
kết quả trên mở ra hướng nghiên cứu tiềm năng trong ứng dụng bacteriophage
lysins tái tổ hợp như loại thuốc mới, một vũ khí mạnh trong cuộc chiến chống lại
hiện tượng kháng kháng sinh của vi khuẩn (Fenton M et al., 2010). Xuất phát từ cơ
sở khoa học và thực tiễn trên, chúng tôi thực hiện đề tài: Nghiên cứu biểu hiện
Lysin của bacteriophage chủng K đặc hiệu Staphylococcus aureus ở
Escherichia coli”.
1.2. Mục đích nghiên cứu
Biểu hiện được lysin tái tổ hợp của Bacteriophage chủng K đặc hiệu
Staphylococcus aureus trong vi khuẩn E. coli BL21 starTM ( DE3).


Khóa luận đầy đủ ở file: Khóa luận full