Nghiên cứu ảnh hưởng của một số chất điều hòa sinh trưởng thực vật đến quá trình nhân nhanh in Vitro cây Đinh lăng lá nhỏ (Polyscias fructicosa (L.) Harms) (Khóa luận tốt nghiệp)

I H C THÁI NGUYÊN
I H C NÔNG LÂM
--------------

NGUY N TH

Tên

tài:

NGHIÊN C U
NG TH C V

NG C A M T S CH
U HÒA SINH
N QUÁ TRÌNH NHÂN NHANH IN VITRO

(Polyscias fructicosa (L.) Harms)

KHÓA LU N T T NGHI

H
o
Chuyên ngành
Khoa
Khóa h c
Gi
ng d n

IH C

: Chính qui
: Công ngh sinh h c
: CNSH&CNTP
: 2011 - 2015
: 1. ThS.
2. TS. Nguy


i

L IC

hoàn thành lu
nh

c g ng n l c c a b

c r t nhi u s

nhi t tình c a các th y cô giáo, b n bè và

i thân.
c h t em xin g i l i c

i Ban giám hi

i

h c Nông lâm Thái Nguyên, Ban ch nhi m khoa Công ngh sinh h c và Công
ngh th c ph m cùng toàn th các th

th

t cho em nh ng ki n

t th i gian h c t p và rèn luy n t

ih c

Nông lâm Thái Nguyên.
Em xin bày t lòng bi

n

Duy và TS. Nguy

ng d

ng viên em trong su t

quá trình làm khóa lu n.
cc

B môn Gi ng và Công Ngh Sinh H c -

Trung tâm Nghiên c u Tr ng và Ch bi n cây thu c Hà N i - Vi
u ki n thu n l

c Li u, Ban

em trong quá trình làm

khoá lu n.
Cu i cùng, em xin g i l i c
bên c

em trong su t quá trình h c t p và th c hi

Em xin trân thành c
Thái Nguyên, tháng 6
Sinh viên

Nguy n Th

tài.


ii

DANH M C CÁC B NG

B ng 2.1: Các nguyên t
B ng 4.1: K t qu

ng và d ng s d ng chính.......................................20
ng c

in vitro

n kh

(30 ngày)...................................................................................................38
B ng 4.2: K t qu

ng c

in vitro

n kh

(30 ngày)....................................................................................................40
B ng 4.3: K t qu

ng c

in vitro

n kh

(30 ngày)....................................................................................................42
B ng 4.4: K t qu

ng c a lo

in vitro (45 ngày, 60 ngày)...........................44

nhân nhanh ch
B ng 4.5: K t qu
ch
B ng 4.6: K t qu
ch

B ng 4.7:K t qu

ng Cytokinin t t nh t t i kh

ng c a t h

n kh

in vitro (45 ngày) .............................................................45
ng c a t h

n kh

in vitro (45 ngày) .............................................................47
ng c

n kh

nh

(30 ngày)...................................................................................................50
B ng 4.8:K t qu

ng c

n kh

nh

(30 ngày)...................................................................................................51

B ng 4.9: K t qu

ng c a t h

n kh

hoàn ch nh (45 ngày) .............................................................53
B ng 4.10: K t qu

ng c a t h p

n kh

hoàn ch nh (45 ngày) .............................................................55
B ng 4.11: K t qu
c

u qu các công th c t o r in vitro

n t l s ng

u ki n ex vitro ........................................................58


iii

DANH M C CÁC HÌNH

Hình 2.1: Hình

Vi t Nam ...............................................5

Hình 2.2: M t s hình nh nh n d

......................................7

Hình 4.1: M u l y t cây in vivo...............................................................................39
Hình 4.2: Ch
Hình 4.3:

y ..........................................39

nh ch

ng BAP

các công

th c thí nghi m (ch p sau c y 30 ngày)...................................................41
Hình 4.4: nh ch

ng kinetin

các công

th c thí nghi m (ch p sau c y 30 ngày)...................................................43
Hình 4.5: C m ch i trên CT3....................................................................................46
Hình 4.6: C m ch i trên CT4....................................................................................46
Hình 4.7: Ch

c c y hàng lo

t o c m ch

ng: MS

+ 2,5 mg/l BAP + 0,4 mg/l IBA ...............................................................46
Hình 4.8:

nh ch

t h p BAP và NAA

các công

th c thí nghi m (ch p sau c y 45 ngày)...................................................48
Hình 4.9: R

ng b sung NAA ( nh ch p 45 ngày sau c y)......50

Hình 4.10: Tr ng thái r CT 3: MS + 1 mg/l BAP (ch p sau c y 30 ngày) .............52
Hình 4.11: Tr ng thái r CT 6: MS + 2,5 mg/l BAP (ch p sau c y 45 ngày) ..........52
Hình 4.12: Hình thái r CT2 (ch p sau c y 45 ngày) ...............................................54
Hình 4.13: Hình thái r CT3 (ch p sau c y 45 ngày) ...............................................54
Hình 4.14: Cây hoàn ch nh trên 2 công th c t t nh t (CT3: trái và CT4: ph i) ( nh
ch p sau c y 45 ngày) ..............................................................................56
Hình 4.15: Cây t CT 3 (ch p sau ra cây 1 tháng) ...................................................58
Hình 4.16: Cây t CT 3 (ch p sau ra cây 2 tháng) ...................................................58

iv

DANH M C CÁC T , C M T

BAP

: 6-Benzylaminopurine

Cs

: C ng s

CT

: Công th c

CV

: Coeficient of Variation

VI T T T

i ch ng
IBA

: Indole butyric acid

Kinetin

: 6-Furfurylaminopurine

LSD

: Least Singnificant Difference Test

MS

: Murashige & Skoog (1962)

MT
NAA
Zeatin

ng
-naphthalene acetic acid
: 6-(4-hydoxy-3methylbut-2enyl)


v

M CL C
PH N 1: M
tv

U....................................................................................................1
............................................................................................................1

1.2. M c tiêu và yêu c u c

tài .............................................................................2

1.2.1. M c tiêu c

tài ............................................................................................2

1.2.2. Yêu c u c

tài .............................................................................................2
tài.................................................................................................2

1.3

c ..............................................................................................2

1.3

c ti n .....................................................................................2

PH N 2: T NG QUAN TÀI LI U.........................................................................4
2.1. Gi i thi u v chi

..................................................................................4

2.1.1. Ngu n g c và s phân b ..................................................................................4
2.1.2. V trí phân lo i ..................................................................................................4
2.1.3. Các loài thu c chi Polyscias có

Vi t Nam .....................................................4

2.2. Gi i thi u v cây

......................................................................6

2.2.1. Mô t .................................................................................................................6
2.2.2. Phân b , sinh thái ..............................................................................................7
2.2.3. B ph n s d ng................................................................................................8
2.2.4. Thành ph n hóa h c ..........................................................................................8
2.2.5. Tác d

c lý [2].........................................................................................8

2.2.6. Tính v và công d ng.........................................................................................9
2.2.7. Nhu c u s d ng và kh

n xu t

n nay ...........................10

2.3. T ng quan v nuôi c y mô t bào ......................................................................12
2.3.1. Khái ni m ........................................................................................................12
ng in vitro .......................................12

lý lu n c
mc

ng in vitro.................14

2.3.4. Quy trình nhân gi ng in vitro..........................................................................17
2.3.5.

ng d ng c a nhân gi ng in vitro trong nhân gi ng cây thu c......................18

2.3.6. M t s y u t
2.4. Tình hình nghiên c u v cây

n quá trình nuôi c y mô t bào th c v t.............19
trên th gi i và Vi t Nam ........23


vi

2.4.1. Tình hình nghiên c u v cây

trên th gi i...........................23

2.4.2. Tình hình nghiên c u v cây

Vi t Nam ...........................25

PH N 3:

NG, N

U ...30

ng và ph m vi nghiên c u......................................................................30
ng ........................................................................................................30
3.1.2. Ph m vi nghiên c u.........................................................................................30
m và th i gian ti n hành .........................................................................30
m ..........................................................................................................30

3.2.2. Th i gian nghiên c u ......................................................................................30
3.3. N i dung nghiên c u ..........................................................................................30
3.3.1. N i dung 1: Nghiên c u
in vitro

n kh

. ..........................................................................................30

3.3.2. N i dung 2: Nghiên c u

ng c a các ch

in vitro

kh

3.3.3. N i dung 3: Nghiên c u
kh

ng c a n

o cây

n

. .......................................................30
ng c a các ch

n

hoàn ch nh. ........................................................31
u qu các công th c t o r in vitro

3.3.4. N i dung 4:

n t l s ng c a

u ki n ex vitro ...............................................................................31
u....................................................................................31
o m u vô trùng .......................................................................31
trí thí nghi m........................................................................31
3.4.3

n hành thí nghi m .................................................................32

3.4
3.4.5

.....................................................................................36
lý s li u...............................................................................37

PH N 4: K T QU NGHIÊN C U VÀ TH O LU N.....................................38
4.1. K t qu nghiên c u

ng c a n

n kh

in vitro

. .......................................................................................................38
4.2. K t qu nghiên c u
in vitro
4.2.1. K t qu nghiên c u
vitro inh l

ng c a các ch

n kh

. ..............................................................40
ng c a n

n kh

in

. ..............................................................................................40


vii

4.2.2. Nghiên c u

ng c a n

in vitro

n kh

. .......................................................................................................42
4.2.3. K t qu nghiên c u
nhanh in vitro

ng c a t h

n kh

.................................................................................45

4.2.4. K t qu nghiên c u
nhanh in vitro

ng c a t h

n kh

.................................................................................47

4.3. K t qu nghiên c u

ng c a các ch

n kh

hoàn ch nh. ...............................................................49
4.3.1. K t qu nghiên c u

ng c a n

n kh

o cây inh

hoàn ch nh. .............................................................................................49
4.3.2. K t qu nghiên c u

ng c a n

IBA

n kh

o cây hoàn

ch nh. .........................................................................................................................51
4.3.3. K t qu nghiên c u
cây

ng c a t h

n kh

o

hoàn ch nh...............................................................................53

4.3.4.K t qu nghiên c u

ng c a t h

n kh

o cây

hoàn ch nh. ....................................................................................55
4.4. K t qu

giá hi u qu các công th c t o r in vitro

n t l s ng c a cây

u ki n ex vitro......................................................................................57
PH N 5: K T LU

NGH ....................................................................60

5.1. K t lu n ..............................................................................................................60
ngh ...............................................................................................................60
TÀI LI U THAM KH O ......................................................................................61
I. Ti ng Vi t ..............................................................................................................61
II. Ti ng Anh .............................................................................................................63
III. Internet ................................................................................................................65


1

PH N 1
M

U

1.1.
Polyscias fruticosa (L.) Harms) thu c h

Cây

(Araliaceae) là m t cây thu

cs d

Nhân sâm

i trong y h c c truy n Vi t

Nam. Nhi u nghiên c u cho th y tác d ng ch a b nh và giá tr kinh t c
Polyscias fruticosa (L.) Harms).

c bi t là r c

inh

ph n chính có

ng saponin triterpenoid và polyacetylen cao, có tác d

c g n gi ng

ng tr m c m và ch ng oxy hóa. Do v y, g

Vi t Nam

ng tr

quy mô l

nhu c u v gi

nhi u vùng nên

.
c nhân gi ng ch y u b
n ch là h s nhân gi ng th

u ch cho r

c cm ib

tái sinh khi n th i tình t lúc tr
- 10

ng 2 - 3

u xu t hi n t ph n g c c a ch i

n khi thu ho

u này d

c r c ph i m t kho ng 7

m giá tr kinh t

giá thành s n ph m c
Do v
cách t t nh

i v i các cây l y c

g,

rút ng n th i gian thu ho

là s d ng cây con t nuôi c
ngay t

c bi

u. Bên c

c li u

có b r có kh

n thành r c

t ngu n t

nh t v m t di truy

mb ov

c yêu c u v

xu t nguyên li

u và tính

n s phát sinh hình

xây d ng quy trình nhân gi ng in vitro c

m

ng ra ru
ng th c v

quy

nh cho s n

i.

Quá trình nuôi c y in vitro có r t nhi u y u t
thái c

ng

nt tc

nghiên c u

khâu vào
ng c a ch

u hòa

n c a quy trình nuôi c y là y u t chính

nh s thành b i c a toàn b quy trình nuôi c y.


2

góp ph n hoàn thi n quy trình nhân gi ng in

Xu t phát t th c ti
vitro

, chúng tôi

m t s ch

xu

ng th c v

tài: Nghiên c u

ng c a

n quá trình nhân nhanh in vitro cây

(Polyscias
1.2.

Nghiên c

c

ng c a m t s ch

quá trình nhân nhanh in vitro

ng th c v

n

(Polyscias fructicosa (L.) Harms).

1.2.2.
- Nghiên c
vitro

c

ng c a n

c

ng c a các ch

in

n kh

.
- Nghiên c
in vitro
- Nghiên c

ng

n kh

ng

n kh

.
c

ng c a các ch
hoàn ch nh.

-

giá

c hi u qu các công th c t o r in vitro

n t l s ng c a cây

u ki n ex vitro.
1.3.
1.3
K t qu nghiên c u s góp ph n xây d ng quy trình nhân gi

inh

y in vitro,

b

c

li u có giá tr .
c các minh ch ng v
n kh
ch

ng c a các ch

u ti t sinh

nh ch i, h s nhân nhanh ch i, phát sinh r t o cây hoàn

ng c a giá th

n kh

ng c a cây in vitro.

1.3
K t qu nghiên c u c
b

tài góp ph n hoàn thi n quy trình nhân gi

inh
ng


3

s ch b nh, góp ph

c nhu c u l n v gi

ng hi n nay.
Th c hi

tài giúp sinh viên hoàn thi n v c ki n th c lý thuy t l n

th c ti n, mang l i nh ng kinh nghi m và tác phong làm vi c khoa h c cho công
tác sau này.


4

PH N 2

T NG QUAN TÀI LI U

2.1.
2.
Chi Polyscias Forst & Forst là m t chi trong th c v t có hoa thu c H Cu ng
cu ng (Araliaceae), ch a kho ng 114th gi i, phân b r i rác

m phân lo i) trên

các vùng c n nhi

i và nhi

i, nh t là m t s

o

[2]. Chúng có các lá d ng lông chim. Theo APG thì chi này là
m t nhóm c n ngành và có th s

c chia tách (ho c h p nh t) v i m t s chi
Polyscias balfouriana

khác [52]. T i Vi t Nam có kho ng 4 loài:
ráng (Polyscias filicifolia
(Polycias guilfoylei

Polyscias fructicosa (L.) Harms).

2.

Theo J. R. Forst và G. Forst [52], chi Polyscias có thu c h th ng phân lo i

(regnum)

Plantae
Angiospermae
Eudicots
Asterids

(ordo)

Apiales

(familia)

Araliaceae

(subfamilia)
Chi (genus)

Aralioideae
Polyscias

chi Polyscias

2.1.
Nhi

c s d ng làm thu c [2].

5

-

Polyscias balfouriana Bail.): Lá

-

Polycias guilfoylei Baill): Lá kép có 7 lá chét;

-

Polyscias filicifolia (Merr) Baill.): Lá kép có 11

-

.

(Polyscias balfouriana Bail.)

c
(Polycias guilfoylei Baill)

(Polyscias filicifolia (Merr) Baill.)
Hình 2.1: Hình

(Polyscias fructicosa (L.) Harms)
Vi t Nam

6

2.
2.2
Cây nh , xanh t

n 2m. Thân nh n, không gai, ít

phân nhánh, mang nhi u v t s o to, màu xám. Lá to, m c so le, kép lông chim 2 - 3
l n, dài 20 -

ng lá dài,

phát tri n thành b to

cu i [2].
. Hoa
Bao hoa: ài hoa

0,25-

-

:5
-0,15 cm;

-35 µm.
2 ô hay 3 ô

: 2-

-

-

-4 mm [54].


7

Chùm hoa

Lá

Lá chét

Hình 2.2: M t s hình nh nh n d
2.2
ng c
tr ng

o Polynesie

Malaysia, Indonesia, Campuchia, Lào...

c

Vi

c tr ng khá ph bi n
b nh vi

làm c nh, làm thu c và rau gia v [2].
m và có th

lo

m xá,

t, th m chí v i m

u bóng, tr

c trên nhi u

t r t ít trong ch u nh , cây v n có th s

theo ki u cây c nh bonsai. Tr ng b ng cành sau 2-

c,


8

c cây con m c t h

e. V i m t

n thân ho c cành c m xu

2.2.3

u tr thành cây m i [54].

ng
R c

a nh ng cây trên

i thu hái vào mùa thu, lúc này

r m m, nhi u ho t ch t, r a s ch. R nh
m

ch

nguyên, r to ch dùng v r . Thái r
mb

m ch t [2].

2.2.4
V r

a saponin, alcaloid, các vitamin B1, B2, B6, vitamin

C, 20 acid amin, glycosid, alcaloid, phytosterol, tanin, acid h
nguyên t

ng. Trong lá còn có saponin triterpen (1,65%),

m t ge

c là acid oleanolic [2].
T

Vi

u, nhi u

c li u thành ph H Chí Minh thu c
c li u thành ph H Chí Minh thu c Vi

c li u

c5

h p ch t polyacetylen là panaxynol, panoxydol, heptadeca - 1,8 (E) - dien - 4,6 diyn
- 3, 10 diol, heptadeca - 1,8 (E) - dien - 4,6 diyn - 3 ol - 10 on và heptadeca - 1,8 (Z)
- dien dien - 4,6 diyn - 3 ol - 10 on. Hai h p ch t sau ch
y có trong các cây thu c chi Panax và h Araliaceae. Trong r
y 5 h p ch

có panoxydol, panaxynol và

heptadeca - 1,8 (E) - dien - 4,6 diyn - 3,10 diol là trùng h p v i các ch t trong lá. Ba
ch t này có tác d ng kháng khu n m nh và ch ng m t s d
2.2.5

[2].

c lý [2]
ng t

Thân và lá có tác d

l

trong b nh s t rét th c nghi
tác d ng an th

ng v t thí nghi

ng v t; t

ul

i.

u tr c a cloroquin
cung v

t ni u;

c.
c nghiên c u và ch ng minh có tác d ng n i ti t ki u

oestrogen.
c s
trùng tiêm mao Paramoecium caudatum và m t s

i v i trùng roi Euglena viridis,
ng v t nguyên sinh khác trong


9

cs
ph n v

m

v a, b o v

ng ch ng choáng

c 60% chu

D a theo kinh nghi

c áp d

u tr b nh nhân

l amip c p. Sau 10 ngày h t tri u ch ng lâm sàng, và sau 16 ngày xét nghi m l i,
trong phân h t th amip th c huy t, h t kén.
ng kháng Entamoeba histolytica
kén và có tác d ng kích thích mi n d ch gây chuy n d ng lympho bào trong thí
nghi m nuôi c y in vitro.
c nghiên c u tác d ng kích thích mi n d

c hi u

trong thí nghi m gây m n c m chu t nh t b ng h ng c u c
tách t bào lách và

v

m s t bào t o m ng

dung huy t và th

hi n tác d ng kích thích mi n d ch m

tác d ng ch ng tr m u t theo nghi m pháp "tr ng thái th t v ng", ch ng tr m u t.
Trong thí nghi
vitro,

ng v

m in

cu

t ch c não ho c gan v i d ch chi

men MAO, th

ng ho

ng c ch m nh ho

MAO

não và gan.

ng gi m ch
n i sinh b ng Tween 80.
D ch chi

c th tác d

th y K+ Na+

i v i ATPase màng t bào, và

c kích thích b i d ch chi t thân, r và lá c

v i ATPase d ng hòa tan, k t qu
thích c a ho t tính men có kh

ATPase c a màng t bào. S kích
i kháng s kìm hãm K+ Na+ ATPase c a
ng kích thích sinh d c

c
2.2.6.

i

ng v t già và kích

ng v t gây m t m i, tác d ng kéo dài và b n v ng.


10

inh
[55].

và cs [40]

và 3
.
[55]:
-

-

-

-0,50

-

inh

ác.
2.2.7
T

N


11

c tr ng làm c nh ho c làm r
c

n nay, t i nhi

c nhân r ng di n tích, phát tri

c

li u.

t.

khác [51].

là công ty

Traphac

i qua nh ng bài h c l

bán s

c li u không rõ ngu n g

c u, không n

c kh

ng th c t

kém và không an toàn, còn ch a d
n ng, t p ch t gây b nh...

ng lo i yêu
c li u có hi u qu tác d ng

ng thu c tr sâu, phân hóa h c, kim lo i

ng l n t i k ho ch nghiên c u, s n xu t, m t th i

i s n ph m gây thi t h

i v i công ty [27].

(GACP-WHO).
phát tri

c li u

H i H u hi
tr

các xã H i Hà và H i Quang.

c li

p trung nhi u nh t
- 2.000

- 25 nghìn


12

-

- 580

[28],[51].
WHO,

[28],[51].
2.
2.

n vô trùng [12].
in vitro

[12].

in vitro

in vitro
].

2.3.2.

in vitro
in vitro


13

nh [29

n [42].
in vitro

inh và tái phân chia.
Các quá trình trên có th tóm t

Phân

T bào phôi sinh

T bào chuyên hóa


14

B n ch t c a quá trình này là m t quá trình ho t hóa, c ch các gen. Trong
quá trình phát tri n cá th ,

t ng th

m nh

u có m t s gen nh

c ho t hóa cho ta tính tr ng m i, m t s gen khác l i b
này x y ra theo m

nh

ho

u

c mã hóa trong c u trúc phân t ADN c a

m i t bào khi

ng phát tri n c

hòa. M t khác, khi n m trong kh

th c v

c hài

ng, t bào luôn b chi ph i b i các

t bào xung quanh. Khi t

c tách riêng r , tác d ng c ch c a các t bào

xung quanh không còn n

c ho t hóa và quá trình phân hóa s x y

ra theo m

nh s n [21].

2.3.3.

in vitro

Nuôi c y mô t bào th c v t, th c ch t là m

ng vô

i v i nhi u loài th c v t quý hi m, có giá tr kinh t

c cao

nhân gi ng h u tính thì nhân gi ng vô tính in vitro là

g

công c vô cùng h u ích. Trên th c t có nhi u loài th c v t nhân gi ng h u tính
n ti n hành nhân gi ng vô tính in vitro là do

b ng h t có h s

ng h u tính b ng h t m c dù cho h s nhân gi ng cao,
d b o qu n và v n chuy

i m t s cây tr ng, khi nhân gi ng b ng h t s

cho ra các cây con không hoàn toàn gi ng b m c v hình thái và thành ph n hoá
h c [35]. S

ng nh

n xu t

theo dây truy n công nghi p vì các cây có ch
làm gi m giá tr
v ch
không

c bi

ng s n ph

i v i cây thu c thì vi

ng các ch t ho t tính) s d

c nhu c u s n xu t. Ví d

i v i các cây l y
uv

thành ph n ho t ch t, cây c d u khi nhân gi ng b ng h
ng lynalylacetat t

nhân gi ng h u tính có s phân ly r t l n v

ng nh t

n h u qu là nguyên li u

tinh d u, vi c nhân gi ng b ng h t d n t i s

con phân ly t

u,

ng các

ng tinh d u

cây

n 78 %; cây b c hà

ng và thành ph n tinh d u [47].


15

d

t

s

c vì v

am t

Nhân sâm, H

uyên
khung 2 -

[3

in vitro

-

-

- B o qu
- Có kh

t
n xu

- Có th nhân nhanh nhi u cây không k t h t trong nh
nh

u ki n sinh thái

nh ho c h t n y m m kém.
- H s nhân gi ng c c k

ph m vi t 36-1012

n th

c

loài cây khác nhau trong

t gi ng m i vào s n xu

i trà [4].


16

-

không

-

-

in vitro

in vitro

true-to-

D.fLoribunda

D.foLoribunda

u [50

ra 8-

32

hoai
in vitro
].

m
y in vitro

m chính c
t ti n và k thu t cao nên ch có hi u qu
khó nhân gi ng b ng

i trang thi t b

i v i nh ng cây có giá tr cao ho c

[46

này còn có

nh ng b t l i sau:
- M c dù s
c nh

ng cây gi

i ph i có ch

- Cây có th có nh
- Kh
- Kh

c có th r
c bi t

n sau ng nghi m.

c tính không mong mu n.

t bi n
b m

y truy n callus hay huy n phù t

bào nhi u l n.
- Cây gi ng có th b nhi m b

ng lo t.


17

ng in vitro

Tuy v

c s d ng r ng rãi

ph c v nh ng m
- Duy trì và nhân nhanh các ki u gen quý hi m làm v t li u cho công tác
ch n gi ng.
- Nhân nhanh và duy trì các cá th
lo i cây tr

u dòng t

cung c p h t gi ng các

c có c , cây rau, cây hoa, cây c nh và

c li u thu c nhóm cây thân th o.
- Nhân nhanh và kinh t các ki u gen quí hi m c a gi ng cây lâm nghi p và
g c ghép trong ngh tr

, cây c nh thu c nhóm thân g .

- Nhân nhanh

u ki n vô trùng và cách ly tái nhi m k t h p v i làm s ch virus.

- B o qu n

các t

ng nhân gi ng vô tính và các loài giao

ph n trong ngân hàng gen.
2.3.4

in vitro
Theo Debergh [39] thì quy trình nhân gi

n:

L y m u và x lý m u
n quan tr ng quy

nh vi nhân gi ng. Kh

c a m u ph thu c vào cách l y m u, x lý m
ng nhi
i và á nhi

m b nh

u ki n kh trùng. M i cây

m phù h p khi b o qu n và x lý m u. V i cây nhi t

i thì nhi

250

u ki n gi m u thích h p, t

l nhi m b nh th p [39].
Tái sinh m u nuôi c y
M
ng là ch

m u nuôi c y. M u
nh, ch i nách hay lát c

nghiên c u. Quan tr ng nh t là c n c

t thân tùy thu

ng và m

n tr ng thái sinh lý c a m u. Kh

thành công c a nuôi c y mô, t bào ph thu c ch y u vào tr ng thái tu i c a t
bào, càng g n tr ng thái phôi sinh bao nhiêu thì nuôi c y càng có kh
công b

y, t

ng có tri n v ng nh t r
nh ng

ngh (ch i nách).

ur

bào

nt

nh

tr ng thái ng