Nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật PCR phát hiện bệnh Greening trên cây có múi (Khóa luận tốt nghiệp)

: Chính quy
Chuyên ngành
Khoa

: CNSH - CNTP
: 2011 2015

THÁI NGUYÊN - 2015


K

: Chính quy
Chuyên ngành
Khoa

: K43 - CNSH
: CNSH - CNTP
: 2011 2015
: ThS

Khoa CNSH-CNTP

THÁI NGUYÊN - 2015


i

a khoa CNSH - CNTP, T
c

m Khoa CNSH

CNTP

:
greening trên cây có múi

m khoa CNSH -

u
hoa CNSH - CNTP, cùng

i ThS.

n

!
Thái Nguyên, ngày 30
Sinh Viên


ii

Trang
..............................5
2009 ..........................................................................................................13

2009 ..........................................................................................................14
2009. ..........15
............15

(Hung và cs,
1999b), (Hung và cs, 2004) [28], [29] .....................................................27
.................................28
.....................................................29
:

...........................................................32

B ng 4.1: K t qu

u cam sành huy n Quang Bình, t nh Hà Giang .......34

B ng 4.2: K t qu

u chanh, quýt và cam thu t i Hà N i, L

Nguyên .....................................................................................................35
B ng 4.3: K t qu so sánh s bi u hi n b nh qua tri u ch ng b n ngoài và gi i ph u
mô t bào th c v t ....................................................................................38
B ng 4.4: K t qu

nh b nh vàng lá greening

cam, quýt và chanh.............43


iii

Trang
..............................................................17

.......................18
Hình 4.1. M u lá cây có múi thu th

nh b nh vàng lá greening ............33

Hình 4.2. Hình nh gi i ph u mô t bào m u lá cam sành.......................................36
Hình 4.3. Hình nh gi i ph u mô t bào lá quýt ng t ...............................................37
Hình 4.4. Hình nh gi i ph u mô t bào lá có bi u hi n nghi nhi m........................37
Hình 4.5. K t qu tách chi t DNA t ng s ...............................................................40
Hình 4.6

n di s n ph m PCR m

nh b nh greening. ........................41


iv

BVTV
Cs
CTAB

: Cetyl trimethyl ammonium bromide

DNA

: Deoxyribonucleic Acid

dNTP

a Dnase và RNase

EDTA

: Ethylene diamine tetraacetate

FAO

: Food and Agriculture Organization

NN&PTNT
PCR

: Polymerase Chain Reaction

RNA

: Ribonucleic Acid


v

Trang
:
1. 1.

......................................................................................................1
...........................................................................................................1
..............................................................................................2
.............................................................................................2

.................................................................................................3
..............................................................................................3
n .....................................................................................3

:

...........................................................................4
.....................................................................................4
.....................................................................................4
.......................................................................................5
.............................................................7
......................................................................9
...............................................................10
........................................................................12
.............................................................16

2.

.............................................................................................16
............................................................16
.............................................19

greening.....................................................................................................................21
R......................................................21
.................................................................22
............................22
.................................................................22
...................23
..............................................23

vi

..............................................25
..........27

:

............................................................................................27
..............................................................................................27
......................................................................27
........................................................28
.........................................................................................28
...................................................................28
..........................................................................................29
....................................................................................29
.................................................................29
..................................30
3.4

...............................................................................32

Ph n 4: K T QU VÀ TH O LU N ..................................................................33
4.1. K t qu thu th p m u v t li u ............................................................................33
4.2. K t qu
4.2.1. K t qu

nh m

bi u hi n c a b nh. ...................................................34

nh s bi u hi n c a b nh thông qua các tri u ch ng bên

ngoài .........................................................................................................................34
4.2.2. K t qu

nh s bi u hi n c a b nh thông qua quan sát hình thái mô t bào

th c v t.......................................................................................................................36
4.3. K t qu

nh b nh vàng lá greening b ng k thu t PCR v i c p m

c

hi u ............................................................................................................................39
4.3.1. Tách chi t DNA t ng s m u lá......................................................................39
4.3.2. K t qu

n gen 16s rDNA ..................................................................40

Ph n 5: K T LU N VÀ KI N NGH ..................................................................45
5.1. K t lu n ..............................................................................................................45
5.2. Ki n ngh ............................................................................................................45


1

1. 1.
Rutaceae

- 12%
-

-

20

n

4

124,

[3]. Vì

300 ha

và chanh là 18,000 ha

2014) [8
v

Dòng châu á có tên là Candidatus liberibacter asiaticus, dòng châu phi có tên là
Candidatus liberibacter africanus


2

Diaphorina citri

erytreae)

hi (Hung.T.H và cs, 2004) [29

Trioza
reening là

].

Ngày nay v

:
PCR, real-time PCR

, 2008) [11

.
1.2.
trên cây có múi

-

-

-

-

: Cam, chanh,

3

-

-

viên, nhà kho

- Giúp sinh viên c

cho công
tác sau này.
- Hoàn

-


4

Câ

citrus

Nam châu Á. Tanaka (1979) [37

Citrus sinensis

Citrus nobilis

(T

].

Plantae
Rutales
Rutaceae
Chi Citrus
genera
].

162 loài (Specias


5

Tuy nhiên, các nhà
q

ó 10 nhóm quan
True Citrus group

2003) [3].
1: Các loài cam,
STT

Tên loài

1

C.sisnensis Osbeck

Sweets Orange

2

C.aurantium L

Sour Orange

Cam chua

3

C.reticulata Blanco

Mandarin

Quýt

4

C.limon Osbeck

Lemon

Chanh núm

5

C.medica L

Citron

Chanh yên

6

C.aurantifolia Swingle

Lime

7

C.trifolia L

Trioliate

8

C.grandis L

Shadock

9

C.paradishi L

Pomelo

10

C.fortunenna

Kumquat
[3]
múi

- 90 mg/100
3) [3].


6

Citrus

(

[3].

-

/ha. Cây cam q

-

[3].
ra oxy trong không khí làm
không khí

2003) [3].


7

-

-

) [5].

-

cây,

ành hè
C
[5].

25

-9


8

-

-

vùng Á

khí
].
-

5C5A(20-40)G(8-15)

i cây có múi

].
hà
[5].

-

man


9

-

[5].
- Nhi
27oC

29oC

-

5o
o

57oC

[3].

- Ánh sáng: Cây có múi

15.000
17h/ngày), cây có múi
ây có múi

(N

].
-

2400

-

5,


10

-

Preslay.D,
1993) [34].

h gây

Closterovirus

òn lây lan

-

vàng lá


11

vùng v

Diaphorina citri
vàng lá

Xanthomonas

campestris citri

-

Phytophthora

Phytophthora

parasitica Dast và Phytophthora citrophthora

-

P.digitalium

trong không khí và xâm

Alternaria

Penicillium italicim và


12

cây có múi (Hà Minh
Trung, 2006) [12].

-

tháng 3.
vàng lá greening trên cây có múi.
-N
-R

o

x

3 (Preslay.D, 1993) [34].
cây có múi


13

2

quýt
- 2009

2007

2008

2009

1.626.988

1.635.580

1.679.635

2.515.562

2.491.642

2.423.009.

3.991.106

4.113.896

4.169.898

582.325

593.488

584.202

37.503

33.173

30.195

8.753.484

8.867.779

8.886.939

81.694

85.716

87.432

186.458

196.275

190.052

Châu Á

110.574

115.249

121.685

Châu Âu

181.376

189.201

177.428

176.429

178.302

174.218

132.006

137.753

137.695

13.291.588

14.019.595

14.685.525

46.904.827

48.904.766

46.049.959

Châu Á

44.131.476

47.412.474

50.741.784

Châu Âu

10.561.998

11.228.878

10.365.411

661.663

591.482

526.053

115.551.552

122.157.195

122.368.732

Châu Phi

Châu Á
Châu Âu

Châu Phi

Châu Phi

[25]


14

3
2009
/ha)

2002

7.640.276

140.689

107.490.468

2003

7.712.571

137.961

106.403.954

2004

7.942.740

142.774

113.401.980

2005

7.885.232

140.799

111.023.743

2006

8.345.461

140.182

116.989.100

2007

8.753.484

132.006

115.551.552

2008

8.867.779

137.753

122.157.195

2009

8.886.939

137.695

122.368.732

(

135

cam quýt trên

)[25]


15

4

2009.

2002

(nghìn ha)

2005

2006

2007

2008

2009

75,7

87,2

84,8

100,4

117,3

111,2

53,5

60,1

62,3

64,6

67,8

87,5

87,85

99,41

98,07

102,48

98,85

117,3

470,0

606,4

611,0

662,0

670,2

683,3

4) [1]
ha
cho

2 (53,

2009 (87,500
87,

B

5

cam,

STT

trung bình
ha)

1

5,9

104,3

53,2

2

15,5

49,4

57,8

3

1,5

45,6

6,6

4

8,3

76,9

55,1

5

0,8

42,9

2,2

0,9

60,0

3,0

7

7,9

86,4

71,5

8

46,7

149,5

433,9

87,5

117,3

683,3

6

Tây Nguyên

2014) [1]


16

,700
, quýt

683,

433,
Vùng
,

quýt trun

cam,

,
trên cây có múi

Liberibacter asiaticus
rung Q
g (Trung tâm l
1937

greening (Hà Minh Trung, 2006) [12].
+

B

+

2.2.2.1. Nguyên nhân gây b
Liberibacter gây ra, dòng châu
Á có tên là Liberibecter asiaticum và dòng châu Phi có tên là Liberibacter
africanum. Dòng châu Á là dòng c
châu Phi là dòng

1999b) [28].

32oC, dòng
24oC (Hung.T.H và cs,


17

+
Diaphorina citri

+
Trioza erytrea
,2

hi. R

Diaphorina citri

3,5 mm, toàn thân

[3].

A

B

Hình 2.1
A
Brlansky.R.H và Rogers.M.E, 2007) [24]

vàng lá greening
.C

lùn
gân lá xanh.

[3].