Phương pháp rửa cột sắc ký lỏng pha đảo

Phương pháp rửa cột sắc ký lỏng pha đảo
Trong kỹ thuật sắc ký lỏng cao áp (HPLC), cột pha đảo (C18, C8, C4, Phenyl…) được sử dụng
phổ biến nhất, vì nó được dùng để phân tích các chất không phân cực và những chất có khả năng
ion hóa hoặc những hợp chất ion. Sau một thời gian sử dụng, cột thường có những dấu hiệu bị
giảm hiệu năng, gây khó khăn cho quá trình phân tích. Điều này phụ thuộc rất nhiều vào nền
mẫu và pha động đang sử dụng. Những hợp chất không mong muốn trong nền mẫu như: muối,
dầu, các chất béo, protein…đều có thể tạo liên kết hoặc vật lý hoặc hóa học với cột sắc ký trong
suốt quá trình sử dụng. Vấn đề đặt ra là, làm sao để giữ tuổi thọ cho cột pha đảo và giữ nguyên
hiệu năng của chúng. Sau đây tôi sẽ giới thiệu với các bạn hai cách rửa cột sắc ký lỏng pha đảo
hay được sử dụng như sau.
Pha động sử dụng trong HPLC thường có hai phần chính: A (Acetonitril hoặc Methanol) và B
(muối; đệm; acid nhẹ…). Sau khi kết thúc phân tích, chọn chương trình rửa tăng dần tỉ lệ
Acetonitril từ 95 % nước : 5 % Acetonitril (Methanol cũng được sử dụng nhưng ít phổ biến hơn)
đến 100 % Acetonitril.
Tái tạo lại cột sắc ký pha đảo
Khuyến cáo: Không nên kết nối với đầu dò.
Tốc độ rửa cột 1 ml/phút. Thứ tự các dung môi được sử dụng để rửa cột nhằm tái tạo lại hiệu
năng của cột theo thứ tự như sau:
1. Pha động nhưng không có đệm hoặc muối…
2. 100 % Methanol
3. 100 % Acetonitril
4. 75 % Acetonitril : 25 % Iso propanol
5. 100 % Iso-propanol
6. 100 % Dichloromethan


7. 100 % n-hexan
8. 100 % Dichloromethan
9. 100 % Iso-propanol
10. 75 % Acetonitril : 25 % Iso-propanol
11. 100 % Acetonitril

Trong quá trình tái tạo cột, quan sát áp suất hệ thống để điều chỉnh tốc độ dòng thích hợp, sau đó
nâng dần lên đến 1ml/phút.

Hình 2: Cột sắc ký lỏng

Hình 1: Bảo vệ cột
Có rất nhiều yếu tố để giữ tuổi thọ cho cột sắc ký như làm sạch mẫu, lựa chọn pha động phù hợp
(ít nhất phải có 5 % dung môi hữu cơ như Methanol hoặc Acetonitril trong pha động),dung môi


hữu cơ là loại tinh khiết dùng cho sắc ký lỏng… Nhưng trên hết, cần phải có bộ phận bảo vệ cột
tương ứng để loại bỏ các chất bẩn trước khi mẫu đi vào cột sắc ký và định kỳ thay thế bảo vệ cột
này.