ẢNH HƯỞNG CỦA BIỆN PHÁP XỬ LÝ KHỬ TRÙNG MẪU

Ðây là phiên bản html của tập tin />G o o g l e tự động tạo ra những phiên bản html của các tài liệu khi chúng tôi crawl web.
Để liên kết tới hoặc đánh dấu trang này, hãy sử dụng URL sau: />%E1%BA%A5y+in+vitro%22&hl=vi&ct=clnk&cd=4&gl=vn
Google không có một mối liên hệ nào đến các tác giả của các trang web này cũng như không chịu trách nhiệm về nội dung của chúng.
Những cụm từ tìm kiếm này đã được tô sáng: môi trường nuôi cấy in vitro
Page 1
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------
Trung tâm Nghiên cu Khoai tây, Rau & Hoa –
1
 N H H   N G C  A BI  N PHÁP X  LÝ KH  TRÙNG M  U
VÀ CÁC Y  U T  MÔI TR   N G TRONG NHÂN NHANH
GI  NG DÂU TÂY IN VITRO
Phm Xuân Tùng & Phm Th Lan
Trung tâm Nghiên cu Khoai tây, Rau & Hoa
Vin Khoa hc K thut Nông nghip min Nam
Tóm tt
Các thí nghim    c tin hành   ánh giá hiu qu kh trùng mu ca CH
và nh h  ng ca mt s yu t môi tr ng   n vic nhân nhanh ging dâu tây in
vitro. Kt qu cho thy vi ch phm CH 36%, dung dch 8% có hiu qu kh
trùng tt nht vi mu là chi  nh ca cây con khi x lý 15 phút (85,6% cây sng
không b nhim nm, khun). Môi tr ng MS có b sung 0,4-0,6 mg/l BAP cho h
s nhân chi cao nht (51,6 ln) vi cht l  ng chi khá tt. Chi tách t cm nuôi
cy trên MS+BAP v  n thân tt nht khi cy chuyn hai ln cách nhau 15 ngày
trên môi tr ng MS không có cht i u hòa sinh tr ng. MS có b sung 0,2 mg/l
NAA và 0,2 g/l than hat tính là thích hp cho vic tái sinh b r in vitro. Phi hp
vi phun b sung phân NPK tím và Atonik, 10 ngày mt ln, giá th   t mùn en
rt thích hp cho vic cy chuyn cây dâu tây ra v n   m.
T khóa: dâu tây, Fragaria x ananasa, môi tr  ng Murashige-Skoog, calcium
hypochlorite, 6-benzylamino purine, naphthalene-acetic acid, indole-butyric
acid.
Summary
Experiments were conducted to investigate the effect of CH on sterilization

of apical doom and influence of other factors in the culture medium on in vitro
rapid propagation of strawberry. Results indicated that 8% solution of the currently
available preparation 36% CH was highly effective in sterilization of apical dooms
from runners for 15 minutes (85.6 % live explants free from comtamination). MS
medium containing 0.4-0.6 mg/l BAP gave the highest shoot multiplication rate
(51.6x) with good shoot appearance. Shoot buds excised from callus masses,
cultured in MS medium suplemented with high concentration of BAP, grew best in
height when subcultured twice after every 15 days on MS medium free of plant
growth regulators. MS medium suplemented with 0.2 mg/l NAA and 0.2 g/l active
charcoal showed the best results in in vitro regeneration of root system.
Incombination with NPK and Atonik sprays at 10-day intervals, the black peat-
moss gave the best results in transplanting the in vitro plantlets into the nethouse
nursery.
Key words: strawberry, Fragaria x ananasa, Murashige – Skoog medium, calcium
hypochlorite, 6-benzylamino purine, naphthalene acetic acid, indole-butyric
acid.
Page 2
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------
Trung tâm Nghiên cu Khoai tây, Rau & Hoa –
2
1.   T V  N  
Nh vi nhiu lai cây trng nhân ging vô tính khác, nuôi cy mô là biên pháp k
thut    c s dng rng rãi   nhân ngun ging sch bnh dâu tây (Fragaria x
ananasa). Có th tái sinh cây in vitro t mnh lá (Nehra & Stushnoff, 1989; Liu &
Stanford, 1988), t nõan cha th tinh hoc tràng hoa (Prediery và cs, 1989), t ht
phn (Rosati và cs, 1975) hoc phôi cha tr ng thành (Wang và cs, 1984). Tuy
nhiên, ph ng pháp có ý ngha thc tin và ph bin nht là to mu sch bnh t
mô phân sinh, nuôi cy callus, to và nhân nhanh cm chi, to cây có r in vitro,
sn xut xut cây ging t thân bò (runner). Cht l ng cây ging in vitro là yu t
có nh h  ng quan trng   n hiu qa sn xut cây ging tiêu chun cng nh kh

nng sinh tr  ng và nng sut ca v n dâu (Rancillac & Nourrisseau, 1989;
Stapteton & cs, 2001).
Nuôi cy mô là k thut    c ng dng nhân nhanh ging dâu tây ti  à Lt
trong nhng nm gn ây. Tuy nhiên, cây ging ca mt s c s nhân ging   a
ra sn xut là rt khác nhau v cht l  ng và sc sng. H s nhân luôn là vn  
quan trng nht    c quan tâm, nhng kích th c cây và quy mô b r là vn   có
ý ngha quyt  nh   n sc sng, kh nng phc hi và phát trin nhanh khi cy
chuyn ra giá th ex vitro. Báo cáo này trình bày mt s kt qu nghiên cu nhm
xác  nh các yu t nh h  ng ca môi tr  n g nuôi c y in vitro và giá th ex vitro
nhm xây dng hòan chnh quy trình sn xut ging cht l  ng cao phc v sn
xut ti  à lt.
2. V  T LI U VÀ PH   N G PHÁP NGHIÊN C  U
2.1. Vt li u nghiên c u
Vt liu là ging Angelique ( M  á) nhp ni t Israel, ging này thích
ng khá tt vi i u kin khí hu  à Lt và có nhiu   c i  m u vit nh qu   p,
cng và nng sut cao.
2.2. Ph   n g pháp nghiên c u
Môi tr  ng Murashige- Skoog (MS) (1962) có b sung 8g/l agar, 30 g/l    n g và
pH 5.8    c dùng làm môi tr ng nuôi cy c bn cho các thí nghim (TN) nuôi
cy in vitro. Ph  ng pháp b trí cho tng thí nghim nh mô t d i ây.
Thí nghim 1: Kho sát nng   calcium hypochlorite (CH)[36 % Ca(OCl)
2
]
và thi gian x lý kh trùng mu ban   u.
Các nghim thc gm:
C
1.1
= CH 4 %, trong 10 phút
C
2.1

= CH 6%, trong 10 phút
C
1.2
= CH 4 %, trong 15 phút
C
2.2
= CH 6%, trong 15 phút
C
3.1
= CH 8%, trong 10 phút
C
3.2
= CH 8%, trong 15 phút
Chi  nh ca tay non (runner) kho mnh    c chn làm vt liu cho
quá trình nhp mu. Chi này    c ra sch bi   t bng xà phòng tr c khi
   c x lý trong dung dch kh trùng CH vi nng   và thi gian kh trùng
Page 3
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------
Trung tâm Nghiên cu Khoai tây, Rau & Hoa –
3
theo các nghim thc nêu trên. Tr c khi tách  nh sinh tr  ng, mu x lý
   c ra sch bng n c ct vô trùng 3 – 4 ln trong i  u kin vô trùng. Mi
mu  nh sinh tr ng    c cy trong mt ng nghim có cha 8 ml môi
tr ng ã tit trùng. TN    c b trí hòan tòan ngu nhiên vi ba ln nhc li,
30 mu / mt ln nhc. Ch tiêu theo giõi là t l (%) mu sng và sch nm,
khun 20 ngày sau khi cy.
Thí nghim 2: Kho sát nh h ng nng   6-benzylamino purine (BAP) trong
môi tr  ng MS   n tc   nhân chi.
Các nghim thc gm:
C

0
= MS + 0,0 mg/l BAP
C
3
= MS + 0,6 mg/l BAP
C
1
= MS + 0,2 mg/l BAP
C
4
= MS + 0,8 mg/l BAP
C
2
= MS + 0,4 mg/l BAP
C
5
= MS + 1,0 mg/l BAP
Nhng mu sng, sch và có sc sinh tr ng tt thu    c t TN 1    c
chn làm mu cy   to chi. TN    c b trí hòan tòan ngu nhiên vi ba ln
nhc li, 10 bình/ ln nhc, 3 chi / bình tam giác 250 ml cha 40 ml môi tr  ng ã
tit trùng (theo tng nghim thc). Các s liu thu thp sau 50 ngày cy gm: h s
nhân (s chi/c m chi); trng l ng trung bình ca cm chi.
Thí nghim 3: Xác  nh môi tr  ng v  n thân cho dâu tây trong nuôi cy in vitro.
Các nghim thc gm:
V
1.1
= MS + 0,0 mg/l BAP , cy chuyn mt ln
*
V
1.2

= MS + 0,0 mg/l BAP, cy chuyn hai ln
**
V
2.1
= MS + 0,05 mg/l BAP, cy chuyn mt ln
V
2.2
= MS + 0,05 mg/l BAP, cy chuyn hai ln
V
3.1
= MS + 0,1 mg/l BAP, cy chuyn mt ln
V
3.2
= MS + 0,1 mg/l BAP, cy chuyn hai ln
*
Cy chuyn mt ln: nuôi 30 ngày mi chuyn sang môi tr  ng mi;
**
Cy chuyn hai ln: cng nuôi 30 ngày, nhng 15 ngày chuyn mt ln
sang môi tr ng mi có cùng hàm l ng BAP;
Mu cy là nhng chi có kích th c nh nhau    c tách ra t nhng cm
chi chn t nghim thc tt nht ca TN2. TN gm ba ln nhc vi 10 bình tam
giác 250 ml / ln nhc, 15 chi / bình. Ch tiêu theo giõi: chiu cao trung bình ca
chi (cm) sau 30 ngày.
Thí nghim 4: Kho sát nh h ng ca naphthalene-acetic acid (NAA) và indole-
butyric acid (IBA)  các nng   khác nhau   n kh nng ra r ca cây dâu tây in
vitro.
Các nghim thc gm:
R
0
= MS

R
1
= MS + 0,1 mg/l NAA
R
4
= MS + 0,1 mg/l IBA
R
2
= MS + 0,2 mg/l NAA
R
5
= MS + 0,2 mg/l IBA
R
3
= MS + 0,3 mg/l NAA
R
6
= MS + 0,3 mg/l IBA
Page 4
-----------------------------------------------------------------------------------------------------------
Trung tâm Nghiên cu Khoai tây, Rau & Hoa –
4
Cây   n l   ng   u    c chn t nghim thc tt nht ca TN 3 làm vt
liu. Các nghim thc    c b trí hòan tòan ngu nhiên vi ba ln lp li, mi ln
10 bình tam giác 250 ml vi 20 cây/bình. Môi tr ng cho TN ra r in vitro còn
   c b sung thêm 0,2 g/l than hot tính. S liu thu thp sau 15 ngày cy: s r
trung bình / cây, chiu dài r trung bình / cây (cm).
Thí nghim 5: Kho sát nh h ng ca mt s loi giá th và phân bón   n t
l sng và sc sinh tr  ng ca cây in vitro khi ra v  n   m.
TN    c b trí   kho sát mt s loi giá th và phân bón khác nhau nhm

xác  nh    c lai giá th và phân bón phù hp cho cây dâu tây in vitro khi cy
chuyn ex vitro. Tt c các loi giá th    c x lý vô trùng bng dung dch
formalin theo ph ng pháp thông th ng.
Các lai phân bón hóa hc    c b sung tùy tng nghim thc và    c bón
d  i dng phun s  ng. Hàm l ng và s ln bón là nh nhau cho các nghim thc:
8 g/l, 3ln/tháng. Thành phn các lai phân bón s dng nh sau:
+ Atonik 1.8 DD, gm 3   ng phân:
Sodium -5- nitroguaire olate 0,3%
Sodium - o- nitrophen olate 0,6%
Sodium - p- nitrophen olate 0,9%
+ NPK tím: 15% N, 5% P
2
O
5
, 20% K
2
O; 0,5% Bo, 0,02% Fe, 0,02% Zn
+ Urea: 46 % N
Cây in vitro có b r 10 ngày tui    c chuyn ra v n   m (  nguyên
trong bình)   thích ng (acclimatization) trong mt tun. Sau ó, cây    c ly ra
khi bình, ra sch môi tr ng bám trên r và cy vào khay xp 96 bu (   ng
kính bu 3 cm).
Các nghim thc    c b trí ngu nhiên trong nhà l  i vi 3 ln nhc li,
100 cây / ln nhc. Trong nm ngày   u, cây    c che 60 % nng trc tip bng
l  i en thoáng t 9 h -16 h. Các k thut chm sóc khác    c áp dng theo quy