Tìm hiểu về: phân tích clostridium perfrigens trong thực phẩm

Trường Đại Học Công Nghiệp Thực Phẩm TPHCM
Khoa Công Nghệ Thực Phẩm
Đề tài:
Tìm hiểu về: phân tích clostridium perfrigens trong
thực phẩm
GVHD: Nguyễn Thị Mỹ Lệ
Nhóm: 8


Mục Lục
I. Giới thiệu về
clostridium perfrigens
II.Quy trình phân tích
III. Ví dụ


I. Giới thiệu về
clostridium perfrigens


họ
Bacillacae
sinh bào tử,
phần lớn di
động
tạo các khuẩn
lạc màu đen
trong môi
trường phân
lập quy định

sinh nha bào

Đặc điểm

phân giải
Sodium sulfil
hoặc phân giải
protein tạo
H2S.

vi khuẩn Gram
dương

hình que

kị khí
không bắt
buộc




Hình thái vi khuẩn Clostridium perfrigens.

Hình thái vi khuẩn Clostridium perfrigens.


Phân động
vật

Phân người
nước
cống rãnh

Nơi sống

Trong thực
phẩm nhất
là thực
phẩm đồ
hộp).

bùn đất,


3.  Đặc điểm nuôi cấy:




Trên môi trường Fluid Thioglycolate: sau 24 – 28
giờ nuôi cấy vi khuẩn phát triển tốt làm đục môi
trường.



Trên môi trường thạch máu: sau 24 – 28 giờ nuôi
cấy ở 37, vi khuẩn phát triển tạo khuẩn lạc tròn ướt
có hai vòng dung huyết xung quanh

 Trên

môi trường SPS, TSC agar vi khuẩn phát triển

cho khuẩn lạc tròn màu đen, do vi khuẩn sinh H2S
tác dụng với Fe (trong môi trường) tạo thành FeS có
màu đen.
 Trên

môi trường nước thịt gan yếm khí vi khuẩn mọc

rất tốt, nhanh chóng làm đục môi trường.


.Quy trình phân tích:


10g mẫu + 90ml dd đệm 10-1
Tiếp tục pha loãng mẫu đến 10-2 10-3 10-4…
Lấy 1ml mẫu vào trong ống nghiệm vô trùng, đỗ 1015 ml môi trường ISA ở 450C lắc đều
Đỗ lớp ISA thứ hai cao 1-2 cm sau khi phần dưới
đông đăc, ủ 370C , 24-48 giờ
Đếm tất cả các khuẩn lạc màu đen xuất hiện trong ống
Tính kết quả số clostridium trong 1ml/1g mẫu phân
tích


1. Các bước thực hiện

 Bước

1: Chuẩn bị dịch đồng nhất hoặc pha loãng

mẫu để ở các độ pha loãng 10-1, 10-2, 10-3…
 Bước

2: Dùng pipet lấy ở mỗi nồng độ pha loãng

1ml dung dịch huyền phù ban đầu hoặc 1ml mẫu thử
cho vào giữa đĩa pipet, mỗi nồng độ 02 đĩa.
 Bước

3: rót 15-20ml môi trường TSC vào

đĩa petri và trộn đều


 Bước

4: Khi môi trường đã đong chặt, rót thêm một

lớp 10ml môi trường TSC phủ lên trên.
 Bước

5: để đông và xếp các hộp Petri nắp ở phía trên

vào bình kị khí
 Bước

6: đếm và ghi lại số lượng khuẩn lạc điển hình

ở các đĩa. Khuẩn lạc Clostridium perfrigens co màu
đen.


2. Xác nhận:


Chon tổng số 10 khuẩn lạc điển hình từ các
đĩa đã đếm.
Cấy ria các khuẩn lạc này trên môi trường
thạch cơ bản TSC, phủ thêm một lớp 10ml môi
trường TSC cơ bản. Để đông và nuôi yếm khí ủ
37oC ± 1oC, 18-24 giờ.

Tách mỗi đĩa ít nhất một khuẩn lạc
điển hình và dễ tách biệt.


3. Xác định tính sinh hóa


3.1. Thử nghiệm tính di động:


Làm môi trường thạch đứng Mannitol Mobility Nitrate.
Cấy sâu khuẩn lạc đã phân lập vào môi trường. Nuôi
dưỡng trong điều kiện yếm khí 37oC ± 1oC, 18-24 giờ.

 Kiểm

tra ống môi trường để xem dạng sinh

trưởng dọc theo đường cấy sâu. Sự sinh
trưởng khuyếch tán vào môi trường từ vết
cấy thể hiện rõ tính di động của vi sinh vật
nuôi cấy.


3.2. Thử nghiệm sự có mặt của nitric:
 thêm

0,2-0,5ml thuốc thử phát hiện nitrit vào mỗi

ống môi trường nitrat di động (tiến hành trong tủ
HOP). Sự hình thành màu đỏ xác nhận phản ứng khử
nitrat thành nitrit. Nếu trong 15 phút mà màu đỏ
không hình thành thì thêm thì thêm một lượng nhỏ
bột kẽm. Để yên 10 phút, nếu màu đỏ được hình
thành sau khi thêm bột kẽm thì không có phản ứng
nitrat thành nitrit.


3.3. Xác định sự hóa lỏng gelatin:


Cấy các khuẩn lạc đã phân lập vào ống nghiệm chứa
môi trường gelatin-lactose. Nuôi dưỡng trong điều

kiện yếm khí ủ 37oC ± 1oC, 18-24 giờ. Kiểm tra ống
môi trường xem có sự sinh khí và có chuyển màu
vàng không (tạo acide ) cho biết sự lên men của
lactose. Làm lạnh 1giờ ở 5oC và kiểm tra sự hóa lỏng
của gelentine. Nếu môi trường vẫn rắn, nuôi cấy
thêm 24 giờ và kiểm tra sự hóa lỏng của geletine.


III.Ví dụ:


Nghiên cứu và phát
hiện vi khuẩn
Clostridium
perfrigens trên thịt
gà tươi tại một số
chợ ở TP.nha Trang.


 Áp

dụng quy trình phân lập vi khuẩn C. perfringens

theo quy trình phân lập của Bộ môn nghiên cứu Vi
trùng Phân viện Thú y miền Trung:
 Sơ

đồ phân lập:

1. Các bước thực hiện


a. Chuẩn bị mẫu:


Cân chính xác 25 gam mẫu thịt gà, cắt nhỏ hoặc
nghiền nát trong điều kiện vô trùng cho tới khi được
thể đồng nhất. Sau đó bổ sung 225 ml nước muối
sinh lý. lắc đều từ 2 - 3 phút thu được dung dịch mẫu
thử có nồng độ 10-1