TÁCH VÀ ĐỊNH TÍNH CÁC CYCLIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÍ LỚP MỎNG

THAM KHẢO

BÁO CÁO THỰC TẬP BÀI 3
Nhóm:
Tên SV:

PHIẾU PHÂN TÍCH

ĐỊNH TÍNH CÁC CYCLIN
BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỚP MỎNG
• Bản mỏng:
Thủy tinh

 Nhôm, nhựa

 Cellulose



silica gel G

 silica gel F254

 Kieselguhr



silica gel H

 silica gel F366

 Khác



• Hệ dung môi: Acetonitril – Methanol – dung dịch acid oxalic 6,3% đã điều
chỉnh pH đến 2,0 bằng amoniac đậm đặc (20:20:60)
• Kỹ thuật chạy sắc kí: Kỹ thuật chạy sắc kí 1 chiều, dung môi di chuyền từ đầu
dưới lên đầu trên của bản mỏng, kéo theo chất cần phân tích (pha động) di
chuyển trên bản mỏng (pha tĩnh), theo cơ chế hấp phụ, dựa vào ái lực hấp phụ
khác nhau với silica gel, các chất cần phân tích di chuyển chậm hay nhanh do
sự bắt giữa của của hạt silica gel.
• Kích thước bản sắc kí: 10cm x 6cm
• Khoảng cách chạy: 7,0 cm
• Rf (Oxatetracyclin) =

2,6

• Rf (Miocyclin HCl) =

3,4

7,0

7,0

= 0,37

;

Rf (Tetracyclin HCl) =

= 0,49

;

Rf Mẫu thử =

2,4
7,0

2,3
7,0

= 0,33

= 0,34


Cách pha mẫu:
Chất chuẩn:
-

Nguồn gốc: PTN

Số lô:

Dung dịch đối chiếu 1 (vết số 1): 5mg oxytetracyclin chuẩn trong
methanol và pha loãng thành 10mL với cùng dung môi.

-

Dung dịch đối chiếu 2 (vết số 2): 5mg tetracyclin HCl chuẩn trong
methanol và pha loãng thành 10mL với cùng dung môi.

-

Dung dịch đối chiếu 3 (vết số 3): 5mg minocyclin HCl chuẩn trong
methanol và pha loãng thành 10mL với cùng dung môi.

-

Dung dịch đối chiếu 4 (vết số 4): Hoà tan hỗn hợp 5mg oxytetracyclin
chuẩn, 5mg tetracyclin HCl chuẩn và 5 mg minocyclin HCl chuẩn trong
methanol và phan loàn thành 10mL cùng với dung môi.

Mẫu thử:
-

Viên nén chứa hoạt chất cyclin, cân 30mg chế phẩm hoà tan trong 25mL
ethanol, khuấy kỹ. Lọc, bay hơi dung môi trên bếp cách thuỷ đến 10mL.

• Kết quả

1

2

3

4 Mẫu thử

Silica gel Merck pha đảo RP-18

Silica gel F254 Merck


• Yêu cầu và kết luận
So sánh các vệt sắc kí khi sử dụng 02 loại bản mỏng khác nhau (silica gel
F254 Merck và silica gel Merck pha đảo RP-18).
Loại bản mỏng nào phù hợp để sử dụng chạy sắc kí để phân tích các cyclin
theo yêu cầu.
Chế phẩm có chứa Tetracyclin HCl vì giá trị Rf Mẫu thử 0,34 ≈ Rf (Tetracyclin HCl) 0,33
Vệt sắc kí của bản mỏng silica gel F254 Merck (thông thường) có tách nhưng
không rõ, kéo đuôi, mờ, không bắt được vết của oxytetracyclin, dung môi bị bắt giữ
và ái lực mạnh với pha tĩnh nên vạch cuối không thẳng hàng.
Vệt sắc kí của bản mỏng silica gel Merck pha đảo RP-18 tách rõ, các vết gọn,
tách hoàn toàn, vạch dung môi chạy đều trên bản mỏng, vạch cuối thẳng hàng.
 Sử dụng bản mỏng silica gel Merck pha đảo RP-18 để phân tích các
cyclin cho kết quả tách tốt.
• Giải thích:
Bản mỏng silica gel F254 Merck (bản thường) có pha tĩnh phân cực, hệ
dung môi là acetonitril là chất phân cực mạnh aprotic (moment phân cực 3.92 D),
methanol là chất phân cực mạnh protic (moment phân cực 1.70 D) hệ dung môi
phân cực mạnh. Điều này dẫn đến pha tĩnh bắt giữ mạnh hệ dung môi, giải thích
cho việc phần dưới bản mỏng kéo vệt đen do các dung môi đã hấp phụ lên bề mặt
silica gel, che đi các chất phát huỳnh quang ở 254nm.
Ngược lại, Silica gel Merck pha đảo RP-18 gắn thêm mạch 18 carbon nên
pha tĩnh không phân cực (pha đảo), nên hệ dung môi chạy tốt trên bản sắc ký,
không bị bắt giữ bởi silica gel, chỉ có các cyclin có tính phân cực khác nhau ít nhiều
hấp phụ trên bề mặt silica gel  các vết tách tốt.