Sử dụng phương pháp sắc ký kết hợp kỹ thuật chiết tách để xác định các chất kích thích trong mẫu sinh học

Bạn đang xem bản rút gọn của tài liệu. Xem và tải ngay bản đầy đủ của tài liệu tại đây (14.78 MB, 46 trang )

(1)<div class='page_container' data-page=1>

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI

TRƯỜNG ĐẠ I H Ọ C K H O A H Ọ C T ự N H IÊN

***************

SỬ DỤNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ

KẾT HỢP KỸ THUẬT CHIÊT TÁCH ĐỂ

x á c đ ị n h

CÁC CHẤT KÍCH THÍCH TRONG MAU

s i n h h ọ c

M Ã SỐ : Q T-01-12

C H Ủ T R Ì Đ Ê T À I : TS. Lê Như T hanh
C Á C C Á N BỘ T H A M G IA : ThS. N guyễn X uân Phú

ĐAI HỌC QUÔC GIA HÀ NỘI
TRUNG TẦM THÔNG TIN THƯ VIỀN

</div>
(2)<div class='page_container' data-page=2>

Báo cáo tóm tắt

a. Tên đề tài: Sử dụng phương pháp sắc ký kết hợp kỹ thuật chiết tách để xác định các

chất kích thích trong mẫu sinh học
Mã số: QT-01-12

b. Chủ trì đề tài: TS. Lê Như Thanh

c. Các cán bộ tham gia: ThS. Nguyễn Xuân Phú, Viện Khoa học Hình Sự-Bộ Cơng an

d. Mục tiêu và nội dung nghiên cứu

Sử dụng phương pháp sắc ký lỏng cao áp (SKLCA) để tách và xác định hai hợp
chất đại diện cho nhóm chất kích thích dạng amphetamin

Tìm các điều kiện tối ửutong phương pháp chiết để tách sơ bộ và làm giàu các
chất cần xác định trong các mẫu thực tế, sau đó sử dụng phương pháp SKLCA để xác
định.

Từ các điều kiện tìm được áp dụng để tách và xác định metamphetamin và
ecstasy trong các mẫu thực tế.

e. Các kết quả đạt được

Đã khảo sát và tìm ra được các điều kiện tối ưu trong phương pháp SKLCA để
tách và xác định metamphetamin và estasy: cột tách, pha động, buớc sóng detutor, tốc
độ dịng, thể tích vịng mẫu.

Đã đề ra được quy trình chiết pha rắn để tách sơ bộ và làm giãn mẫu trước khi
đưa vào hệ thống sắc ký.

</div>
(3)<div class='page_container' data-page=3>

f. Tình hình kinh phí của đề tài:

Tổng kinh phí được cấp: 8.000.000d 
Đã chi: 8.000.000đ

XÁC NH Ậ N CỦA BAN CHỦ N HIỆM KHOA CH Ủ TRÌ Đ Ể TÀI

XÁC NHẬN CỦA TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC T ự NHIÊN

</div>
(4)<div class='page_container' data-page=4>

Summary

a. Title of the subject

Using high pressure liquid chromatography method and extraction
technicquefor the determination amphetamin type stimulant

Code N°: QT-01-12

b. Head of subject: Dr. Lê Như Thanh

c. Participant: Nguyễn Xuân Phú, MA

d. The aim and contents of the subject:

Using high pressure liquid chromatography method for the separation and
determination two compounds of the amphetanin type stimulants group.

Investigation of the aptimal conditions of the extraction technique for
preliminaryseparation and enrichment of amphetamin type stimulants.

Application of the procedue in the real samples.

e. Results:

Set up the uptimal conditions of the high pressure liquid chromatography
method for the separation and determination of metamphatamin and ecstasy: packing
material, mobile phase, wavelength of detector, speed of the mobile phase, volume of
the sample...

Set up the procedure to solid extraction technicque of the samples.

</div>
(5)<div class='page_container' data-page=5>

Mực

LỤC

Phần I. Mở đầu 2

Phần n . Nội dung nghiên cứu 3

Á. Tổng quan 3

1. Tổng quan về chất ma t nhóm kích thích thần kinh 3

1.1. Vài nét về nhóm ma t kích thích 3

1.2. Lịch sử và nguồn gốc 4

1.3. Metamphetamin 5

1.4. Ecstasy 6

1.5. Phân tích Metamphetamin và MDMA bằng sắc ký lỏng áp suất cao 7

B. Thực nghiệm 8

1. Thiết bị và thuốc thử 8

1.1. Thiết bị 8

1.2. Hoá chất 9

2. Phương pháp sắc ký lỏng áp suất cao (HPLC) 9

2.1. Khảo sát ảnh hưởng nồng độ dietylamin trong pha động đến sự 9
tách của Met và MDMA

2.2. Khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ axetonitril trong pha động đến sự tách 11
của hai cấu tử Met và MDMA

2.3. Khảo sát độ tuyến tính 13

3. Nghiên cứu quá trình chiết 14

3.1. Chiết lỏng - lỏng 15

3.2. Chiết pha rắn 15

4. Phân tích mẫu thực tế 17

4.1. Chuẩn bị mẫu phân tích 17

4.2. Kết quả phân tích mẫu thực tế 18

c . Kết luận 23

Tài liệu tham khảo 24

</div>
(6)<div class='page_container' data-page=6>

PHẦN I - MỞ ĐẦU

Các chất kích thích sinh học rất đa dạng. Nó có thể được dùng để chỉ các
chất kích thích dùng trong việc tăng cường năng lực của cơ thể m ột cách cưỡng

bức và giả tạo thông qua việc cưỡng bức chuyển hoá ( các chất doping trong thể
dục thể thao), nó có thể được dùng để chỉ các chất kích thích thẩn'kinh... N hóm
chất kích thích thần kinh này gây nghiện rất nhanh và hết sức ’nguy hiểm cho
người sử dụng và cho tồn xã hội. Chính vì vậy, việc tách và xác định chúng
trong các m ẫu sinh học là hết sức cấp thiết. Công tác này đóng góp m ột phần
quan trọng để đấu tranh loại trừ m ối nguy hại lớn lao của toàn xã hội.

Đ ã có nhiều cơng trình khoa học của th ế giới nghiên cứu, phân tích nhóm
m a túy kích thích, đối với V iệt N am chỉ dừng ở góc độ phân tích nhận biết, chưa 
có điểu kiện nghiên cứu phân tích sâu hơn trên các hệ thống phân tích hiện đại.
M ặt khác, đối với mỗi vùng khu vực khác nhau thường có những dạng ch ế phẩm
khác nhau, cùng với tính chất sử dụng có tính đặc trưng riêng của m ỗi nước càng
làm cho tính phức tạp và khó khăn của cơng tác phân tích giám định chất m a túy
nói chung và chất m a túy nhóm kích thích nói riêng.

N hóm m a túy kích thích ATS (thuốc lắc, hồng phiến) đang có chiều hướng
phát triển m ạnh. Các phương pháp đang được sử dụng để phân tích nhóm m a túy
này là các phản ứng màu nhận biết nhóm , phân tích sắc ký bản m ỏng. K ết quả
phân tích cho phép xác định định tính, phương pháp sắc ký khí cũng đã được
nghiên cứu ứng dụng, tuy nhiên do tính chất của nhóm có nhiều đặc thù đòi hỏi
các điểu kiện phân tích sắc ký khí, kết quả tách trực tiếp chưa đạt hiệu quả, yêu
cầu dẫn xuất hóa, do vậy đã hạn c h ế nhiều đến công tác giám định, việc phân
tích xác định định lượng chưa thực sự đáp ứng được.

</div>
(7)<div class='page_container' data-page=7>

hai chất đang có xu hướng sử dụng nhiều và là hai chất đặc trưng của nhóm chất
kích thích hướng thấm.

V iệc phân tích đồng thời cho phép định tính và định lượng các chất m a túy
nhóm ATS sẽ hỗ trợ rất nhiều đến cơng tác đấu tranh phịng chống m a túy; nó
khơng chỉ dừng ở chỗ giải quyết giám định xác định chất m a túy m à còn m ở ra

hướng nghiên cứu rộng và sâu hơn. V í dụ như nhóm m a túy kích thích ATS là
nhóm m a túy tổng hợp do vậy trong thành phần của sản phẩm bao gồm rất nhiều
các hợp chất phụ, là các chất đầu đưa vào phản ứng, các sản phẩm dẫn xuất.
Thông thường các hợp chất này có cấu trúc tương đối giống nhau trên cơ sở
khung của A m phetam in, như M etam phetam in và Ecstasy.

Phân tích chất ma túy nhóm ATS (M etam phetam in và M D M A ) đặc biệt
trong nước tiểu sẽ mở ra m ột hướng nghiên cứu tiếp nối quan trọng.
M etam phetam in và M DM A là hai chất có nằm trong danh m ục các chất Dopinh
cấm sử dụng trong thi đấu thể thao do Tổ chức IOC quy định. Trong tiến trình
hội nhập của các lĩnh vực khoa học, phân tích giám định các chất m a túy nhóm
kích thích trong danh mục Doping là m ột đối tượng mới và khó, để đảm nhận
được phân tích Doping phải là phịng thí nghiệm chuẩn do IO C công nhận, tuy
nhiên việc chuẩn bị nền tảng nghiên cứu đối với V iệt N am là rất cần thiết và
quan trọng.

PHẦN II - NỘI DUNG NGHIÊN

cứu

A. T Ổ N G Q U A N

1. T ổng quan về chất m a túy nhóm kích thích thần kinh
1.1. Vài nét về nhóm ma túy kích thích

N hóm chất này là loại m a túy tổng hợp (được tổng hợp từ các chất ban đầu
như efedrin, gọi là tiền chất). Theo công ước quốc tế năm 1971 về quản lý các
chất hướng thần, nhóm chất này có các chất như: A m phetam in, M etam phetam in,

</div>
(8)<div class='page_container' data-page=8>

Ecstasy (M DM A: 3,4-M etylendioxym etam phetam in), M DA , M DEA ,
M M D A ,...

N hóm chất này đều có cấu trúc hóa học tương tự nhau trên cơ sở khung
của A m phetam in và được gọi là chất kích thích dạng A m phetam in (A m phetam in
Type Stimulants-ATS).

N hóm ATS có tác dụng lên hệ thống thần kinh trung ương gây hưng phấn
và ảo giác hoang tưởng, chính vì vậy tên gọi lóng của chúng là thuốc lắc, thuốc
điên. Do tác đụng lên hệ thần kinh trung ương dẫn đến làm cho người sử dụng
m ất ngủ, m ất cảm giác đói, tăng cường thể lực và tâm thần m ột cách giả tạo.
Trước đây nhóm chất này được dụng trong Y học là thuốc chống trầm cảm , giảm
thể trọng. N ếu dùng thời gian dài sẽ gây nghiện, làm cho người nghiện thiếu
ngủ, chán ăn, đánh trống ngực, chóng m ặt và có dấu hiệu cường giao cảm như
tăng huyết áp, tăng thân nhiệt và rối loạn tâm thần, rối loạn tiết tố, rối loạn sinh
lý. Liều cao có thể gây tử vong [1 ,4 ].

1.2. Lịch sử và nguồn gốc

A m phetam in là chất cơ bản của nhóm và xuất hiện sớm nhất. Lần đầu
tiên, Am. được L. Edeleano tổng hợp vào năm 1887. Tiếp theo đó khi nghiên cứu
Ephedrin có trong cây M a hoàng năm 1888, nhà bác học người N hật Bản
N agayoshi N agai đã phát hiện được M etam phetam in. Đến năm 1893, người ta
mới chứng m inh và khẳng định được tác dụng kích thích thần kinh của Am.
N gay sau đó, năm 1935 chất này được sản xuất dưới dạng dược phẩm và tung ra
thị trường ở M ỹ với tên gọi Benzein. Đ ến năm 1941, Công ty dược phẩm Takda
của Nhật Bản sản xuất và bán dưới tên hiệu Zedin [4].

</div>
(9)<div class='page_container' data-page=9>

nạn này. N ăm 1971 đánh dấu m ột hoạt động đấu tranh m ạnh của quốc tế, rất
nhiều nước đã cùng nhau cam kết thực hiện Công ước Q uốc tế năm 1971 vể quản
lý chất hướng thần. Đây là m ột công cụ pháp lý Quốc tế hữu hiệu nhằm kiểm
soát và ngăn chặn tình hình gia tăng của ATS [2, 4],

Trước đấu tranh m ạnh m ẽ của nhân loại, tình hình ATS có dịu đi đơi chút
nhưng những lực lượng ngầm vẫn hoạt động m ột cách âm ỉ và chúng lại bùng lên
vào những năm 90 của thế kỷ XX và sự trở lại của chúng cho thấy sự vô cùng
nguy hiểm về tính chất và mức độ, rất nhiều loại ch ế phẩm khác nhau xuất hiện,
nhóm ATS được kết hợp với nhiều loại hoạt chất khác nhau.

V iệt N am vài năm gần đây có rất nhiều đường dây buôn bán loại chất ma
túy này bị bắt giữ với số lượng m a túy bị thu giữ rất lớn, có nhiều vụ thu giữ vài
nghìn viên m a túy kích thích nhóm ATS. Thực tế tại Việt Nam hiện đã và đang
có m ặt M etam phetam in dưới dạng viên nén trịn nhỏ, đường kính 4m m , trọng
lượng khoảng 0,09gam , trên bề m ặt có hình W Y , viên nén hình trịn m àu vàng
có logo 88 có chứa M DM A, M etam phetam in.

1.3. M etam phetam in

Tên khoa học: (±)-s-N -dim etylphentylam in
Tên khác: D -deoxyephedrin; D esoxyephedrin
Cơng thức hóa học: c10h15n

Cơng thức cấu tạo:

^ \ ^ H 2 C H N H C H 3

I I

c h 3

</div>
(10)<div class='page_container' data-page=10>

Tính chất lý hóa: M etam phetam in là chất lỏng không m àu, linh động bay
hơi nhẹ, tan nhẹ trong nước, trộn lẫn với m ethanol, clorofoc và ete.

Tỷ trọng 0,921-0,922 g/ml; nhiệt độ sôi khoảng

240°c

Các dạng thường gặp khác là:

M etam phetam in hydroclorat, C 10H I5N.HC1, dạng tinh thể hoặc bột trắng,
nhiệt độ nóng chảy

172-174°c.

Tan trong nước (1/2); etanol (1/4).

1.4. E cstasy

Tên khoa học: (±)-S-N -a dim etyl-3,4 (m etylan-dioxy) phentylam in
Tên khác: 3,4-M etylendioxym etam phetam in, M DM A,

Công thức cấu tạo: c10h13n o

Cơng thức hóa học:

Tính chất lý hóa:

M D M A là chất lỏng linh động, không m àu

D ạng m uối HC1: bột, có nhiệt độ nóng chảy 147-148°c, tan tốt trong nước,
etanol, ít tan trong clorofoc [4, 5].

</div>
(11)<div class='page_container' data-page=11>

cồng tác đấu tranh phòng chống tội phạm . Đ ể ngăn ngừa cũng như phát hiện kịp
thời các hành vi của tội phạm, công tác giám định phân tích m a túy luôn được
đánh giá quan trọng, các giám định viên ln phải tìm tịi, nghiên cứu để có
những phương pháp phát hiện chính xác, kịp thời các chất này.

1.5. Phán tích M etam phetam in và M D M A bằng sắc ký lỏng áp su ất cao

Phương pháp sắc ký là m ột phương pháp tách và xác định chất được sử
dụng hữu hiệu trong việc xác định các chất m a tuý. Trong đó sắc -ký lỏng áp suất
cao là m ột phương pháp có độ chính xác cao, thuận lợi trong phân tích và xác
định các chất m a túy nhóm ATS. Trên th ế giới đã có nhiều cơng trình khoa học
nghiên cứu phân tích nhóm chất này bằng kỹ thuật sắc ký lỏng áp suất cao. Tuy
nhiên, tính chất phức tạp của từng nước không giống nhau, sử dụng hệ thống sắc
ký lỏng áp suất cao để tách và xác định nhóm chất này (mà điển hình là M et. và
M D M A ) là cơng trình nghiên cứu đầu tiên tại V iệt Nam.

Theo m ột số tài liệu [5, 6] cho thấy nhóm chất này có thể phân tích theo
hệ sắc ký pha thường hoặc sắc ký pha ngược. Các loại cột đã được các tác giả
nghiên cứu tách và xác định A m phetam in và M etam phetam in là cột Silica 5 Ịim,
cột ODS 5 u m ... Các hệ dung m ôi sử dụng khác nhau như m ột số hệ sau:

1. A m oniperclorat 0 .0 IM trong m etanol
pH 6.7

Cột tách Silica 5 |am; 125 X 4.9
Kết quả hệ số k ’ am phetam in: 0.9
k ’ m etam phetam in: 2.0

2. 0.2M axit photphoric; 0.1M dietylam in trong m ethanol
pH 3.15

Cột tách ODS-Silica 5 |im ; 250x5
Kết quả hệ số k ’ am phetam in: 8.48
K ’ m etam phetam in: 10.52

</div>
(12)<div class='page_container' data-page=12>

21.5m l dung dịch axit nitric
thêm nước đến 1000ml

p H = 10

Cột Silica 5nm : 250x5

K ết quả hệ sô' k ’ am phetam in: 0.26
k ’ m etam phetam in: 2.07

4. Cột O D S.l, 5|im : 125x5
Axetonitrin/nước = 57/943
A xit photphoric 8.5g/l
Hexylam on 0.28m l/l

Thời gian lưu: am phetam in: 5.12 phút
M etam phetam in: 7.44 phút

5. Cột ODS 5|im ; 125x4.0

Pha động: axetonitrin/m ethanol/axit sunfuric 0 .0 IM = 20/20/60 (v/v/v)

D etector phát hiện nhóm ATS thường sử dụng detector

u v

với bước sóng
190mm [5] hoặc 248m m [6]

Đ ể có được những kết quả tốt hơn so với hiện nay, chúng tôi nghiên cứu
áp dụng phương pháp sắc ký lỏng áp suất cao cho các m ẫu thực tế ở V iệt Nam.
Đ ể có thể áp dụng được phưong pháp này trong thực tế, các điều kiện cụ thể
trong phương pháp sắc ký lỏng áp suất cao đã được nghiên cứu kỹ lưỡng.

B. TH Ự C N G H IỆ M

1. T h iết bị và thuốc thử
1.1. T hiết bị

</div>
(13)<div class='page_container' data-page=13>

M áy siêu âm

1.2. H óa chất

M etanol (tinh khiết sắc ký M erck)
A xetonitrin (tksk M erck) (ACN)
D ietylam in (tinh khiết)

A xit photphoric (tinh khiết)
Nước cất hai lần

Chất chuẩn M etam phetam in (M et) và M DM A do V iện Khoa
học hình sự cung cấp nồng độ dung dịch gốc là lm g /m l

2. Phương pháp sác ký lỏng áp suất cao (HPLC)

Đ ề tài định hướng nghiên cứu chọn điều kiện tách xác định M et và
M D M A bằng hệ thống HPLC với

Cột tách ODS 5|am; 125x4,6,
D etector u v 248m m;

D ung môi pha động bao gồm các thành phần sau:
Axetonitrin/nước; thêm vào đó là D ietylam in (hoặc hexylam in) và
axit photphoric

Tốc độ dòng lm l/phút

Đ ộ nhạy detector 0,001 AU
Thể tích vịng bơm mẫu: 10|il

N gồi nhưng thăm dò sơ bộ m à chúng tôi viết ở đây: chọn cột tách, tốc độ
dòng tối ưu, thể tích vịng m ẫu... chúng tôi đã tập trung nghiên cứu về thành
phần của pha động để tìm ra các điều kiện tối ưu.

K hảo sát m ột số điểu kiện ảnh hưởng dung môi pha động: thay thế
hexylam in bằng dietylam in và khảo sát ảnh hưởng nồng độ dietylam in trong pha
động đến sự tách của Met và M DM A , khảo sát ảnh hưởng tỷ lệ axetonitrin trong
pha động đến sự tách của M et và M DM A.

2.1. K h ả o sá t ảnh hưởng nồng độ dietylam in trong p h a động đến sự 
tách của M e t và M D M A

</div>
(14)<div class='page_container' data-page=14>

Chuẩn bị pha động:

- CỐ định: tỷ lệ A xetonitrin/Nước = 50/950 (v/v)

nồng độ axit photphoric 8,5g/l

Thay đổi thể tích D ietylam in đưa vào pha động như sau: (cho 11 pha
động):

SỐ ml: 0.02; 0.25; 0.30; 0.35; 0.40

M ẫu chuẩn Met và M DM A được chuẩn bị có nồng độ l |i ‘g/ml được bơm
vào cột, xác định hệ số k ’ theo công thức sau:

‘o

Thời gian lưu t0 được xác định là thời gian có pic ngược trên sắc đồ.

H ệ số k ’ thay đổi theo thể tích D ietylam in đưa vào được đưa ra trong bảng
dưới đây:

Bảng 1. H ệ số k ’ của M et và M D M A khi thay đổi tỷ lệ Dietylam in

T hể tích 
D ietylam in (ml)

k ’

M et M DM A

0,20 11,58 14,00

0,25 10,12 12,51

0,30 8,92 11,02

0,35 8,21 9,85

</div>
(15)<div class='page_container' data-page=15>

H ìn h 1. Sự biến đổi k ’ theo tỷ lệ thể tích D ietylam in đưa vào pha động

N hận thấy rằng sự ảnh hưởng của D ietylam in đến sự tách của M et và
M D M A như sau: hai cấu tử vẫn tách ra khỏi nhau với nồng độ D ietylam in nhỏ
nhưng khi đó các pic có thời gian lưu lâu, sự doãng rộng và độ cân xứng của pic
không đạt khi thể tích Dietylam in đưa vào khoảng 0,2-0,25m l. Lựa chọn thể tích
0,30m l D ietylam in đưa vào llit dung m ôi pha động là thích hợp, cho phép tách

tốt hai cấu tử, các pic đạt tiêu chuẩn về độ loãng, phân giải cho phép định lượng
đồng thời cả hai cấu tử.

2.2. K h ả o sát ảnh hưởng tỷ lệ A xetonitrìn trong p h a động đến sự tách 
của h a i cấu tử M e t và M DM A

Đ iểu kiện cố định: Nồng độ axit photphoric: 8,5g/l
Thể tích D ietylam in đưa vào: 0,30m l/l
T hay đổi tỷ lệ A xetonitrin/Nước như sau:

40/960; 50/950; 60/940; 70/930 (v/v)
Dưới đây là bảng kết quả hệ số k ’ thay đổi theo tỷ lệ ACN/Nước

</div>
(16)<div class='page_container' data-page=16>

Bảng 2. H ệ số k ’ của M et và M D M A khi thay đổi tỷ lệ ACN

Tỷ lệ ACN/Nước 
(v/v)

k ’

M et M DM A

40/960 12,01 15,00

50/950 8,92 11,02

60/940 7,32 8,56

70/930 6,89 7,85

H ìn h 2 : Sự biến đổi k ’ theo tỷ lệ ACN/Nước

Tỷ lệ ACN trong pha động càng cao thời gian lưu của M et và M D M A
giảm , hai cấu tử ra nhanh hơn dẫn đến sự tách không đảm bảo, khoảng tỷ lệ
thành phần ACN trong pha động từ 55 đến 70 cho kết quả tách tốt, các pic cân
xứng và cho phép định lượng đồng thời, để thuận lợi cho công tác chuẩn bị pha
c h ế pha động được tốt, chúng tôi lựa chọn tỷ lệ ACN/Nước = 60/940 (v/v) là điều
kiện phân tích m ẫu và khảo sát các điều kiện khác tiếp theo.

</div>
(17)<div class='page_container' data-page=17>

Cột ODS 5um; 125x4,6

Pha động: ACN/Nước = 60/940 (v/v)
Nồng độ axit photphoric: 8,5g/I
Thể tích Dietylamin: 0,30m l/l
D etector u v : 248nm

Độ nhạy Detector: 0,01 AU
Tốc độ dịng: lm l/phút
Thể tích vịng mẫu: 10|-il

H ình 3 : Sắc ký đồ hỗn hợp M etam phetam in (1) và Ecstasy (2) (M D M A )

Trên sắc ký đổ hai chất M etam phetam in và Ecstasy (M DM A) hoàn toàn
tách khỏi nhau. Các pic thu được rất thuận lợi cho việc định lượng.

2.3. K h ảo sát độ tuyến tính

Đ ể khảo sát độ tuyến tính chúng tơi tiến hành pha dãy mẫu chuẩn có nồng
độ thay đổi của M et và M DM A từ 10g/ml đến 50fig/ml và tiến hành phán tích

</div>
(18)<div class='page_container' data-page=18>

theo điều kiện đã lựa chọn tại phần 2.2. K ết quả phân tích xác định diện tích pic
biến đổi theo lượng m ẫu đưa vào được đưa ra trong bảng dưới đây:

Bảng 3: K ết quả tương quan diện tích pic M et và M DM A với các nồng độ khác

nhau

N ồ n g đ ô (n-g/ml)

D iện tíc h pic

M et M D M A

1,0 27093884 77276056

2,0 40408875 108145361

3,0 54004218 146134497

4,0 66889587 181602930

5,0 80374512 219894238

Phương trình hồi quy y = 20,7878x + 5,374 y = 7,2922X + 18,665

H ệ số tuyến tính r = 0,999 r = 0,998

M etam phetam in M DM A

♦
♦

[♦Series! 1
♦

20 40 60

100000000

♦
•
♦

20 40 6
4 Seriesl

3. N ghiên cứu quá trình chiết

</div>
(19)<div class='page_container' data-page=19>

phương pháp chiết đã được lựa chọn: phương pháp chiết lỏng-lỏng và phương
pháp chiết pha rắn ( Solid Phase Extraction)

3.1. C h iết lỏng - lỏng

Q ua nghiên cứu, chúng tôi đã tìm ra điều kiện tối ưu cho kỹ thuật này như
sau:

M ẫu nước tiểu được điều chỉnh pH đến 11 bằng N aO H 0,1N. M ẫu được
chiết bằng dung môi clorofoc/isopropanol (9/1) 3 lần X 20m l. Địch chiết được
lọc qua phễu lọc có N a2S 0 4 khan, rửa phễu bằng 3x5 ml dung dịch chiết. Dịch
lọc được cô nhẹ đến cạn (có thể cho thêm 1-2 giọt HC1 0,1N).

Cặn chiết hòa tan lại bằng M etanol hoặc pha động và tiến hành phân tích
xác định trên hệ sắc ký lỏng áp cao.

3.2 C h iết p h a rắn

Với kỹ thuật chiết pha rắn, các điều kiện tối ưu được tìm ra là:
Cột chiết: trao đổi cationic m ạnh

H oạt hóa cột chiết: 2ml m ethanol; lm l nước cất và 0,5m l axit photphoric
lOmM

M ẫu nước tiểu 5ml thêm 0,5m l axit photphoric lOmM. Cho qua cột chiết
tốc độ khoảng 5m l/phút.

Cột chiết được làm khô dưới dịng khí sạch và làm sạch bằng lm l axit
photphoric lOmM, 0,5m l axit axetic 0,1M và lm l m ethanol.

Cột chiết được làm khơ m ột lần nữa bằng dịng khí sạch.

Rửa giải với dung dịch am m oniac/m ethanol (3% , v/v thể tích 2m l)

D ịch rửa giải được làm khô và hòa tan trong m ethanol hoặc pha động và
tiến hành phân tích trên hệ HPLC.

Các kết quả phân tích trên m ẫu giả của Ecstasy và M etam phetam in trong
m ẫu nước tiểu trắng được chỉ ra trong hình 4:

</div>
(20)<div class='page_container' data-page=20>

MetnocL tor ATS

(CDEDATN 100010.D)

600 - !

500 H . j

!l
'! :
.00 J ll ;

j i i :

300 - ' .

0____________________ 5____________________ 10____________________15____________________ 20

H ình 4: Sắc ký đồ của M etam phetam in và Ecstasy trong mẫu nước tiểu trắng

thiết sắc k ý lỏng áp suất cao
P ic l: M etam phetam in
Pic2: Ecstasy

So sánh sơ bộ hai phương pháp, chúng tôi nhận thấy phương pháp chiết
pha rắn có ưu thế hơn hẳn so với phương pháp chiết lỏng - lỏng vần được áp
dụng trước đây tại các phòng thí nghiệm .

</div>
(21)<div class='page_container' data-page=21>

M ẫu nước tiểu trắng được chuẩn bị như sau: từ dung dịch phân tích có
nồng độ M etam phetam in là 10|ig/m l thêm chính xác 2ịig M etam phetam in vào 
10ml nước tiểu, để ở điểu kiện phòng trong 2 giờ và tiến hành chiết tách theo
điều kiện chiết đã nêu ở phần 2.4. Tiến hành làm 5 thí nghiệm độc lập, định

lượng m ẫu M et. được đưa ra trong bảng dưới đây:

T hí nghiệm Lượng tìm thấy Đ ộ thu hồi (%)

01 16,78 83,90

02 17,70 88,50

03 16,63 83,15

04 17,37 86,85

05 17,65 88,25

Trung bình 86,13

Phương sai

s

2,47

Độ

lệch chuẩn tương đối RSD

2,87%

4. Phân tích mẫu thực tế

4.1. C huẩn bị m ẫu phán tích [4, 5]

Mẫu viên nén, mẫu b ộ t: nghiền m ịn, cân m ột lượng chính xác, hịa tan

trong dung m ôi nư M etanol, Etanol lọc qua m àng lọc 0 ,4 5 |im . Đ ịnh mức dịch
lỏng và tiến hành phân tích mẫu.

M ẫu nước tiểu: phân tích chất ma túy trong m ẫu sinh học (nước tiểu) là

một khâu quan trọng trong cơng tác phân tích giám định các chất m a túy. Trong
khuôn khổ của đề tài chúng tôi không đi sâu nghiên cứu các thành phần, sự phân
hủy, đào thải của các chất ma túy trong cơ thể, theo tài liệu [6] của các công
trình nghiên cứu cho thấy nhóm m a túy kích thích ATS khi vào cơ thể sẽ qua quá
trình hấp thu, đào thải, sản phẩm cuối cùng có trong nước tiểu là chất đầu sử
dụng, những sản phẩm phụ chiếm tỷ lệ khơng nhiều. Phân tích xác định sự có

17

OẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NQ|
TRUNG TÂM THÔNG TIN THƯ VIỀN

</div>
(22)<div class='page_container' data-page=22>

m ặt và định lượng chất m a túy M etam phetam in và M DM A có trong nước tiểu
cho biết đối tượng đã sử dụng loại m a túy ATS trước đó. M ẫu nước tiểu được
kiểm tra và lấy m ẫu theo đúng quy định gửi đến phịng thí nghiệm .

4.2. K ết-quả p h á n tích m ẫu thực t ế

áp dụng quá trình thu được, chúng tôi đã tiến hành tách và phân tích một
loạt các m ẫu thực tế là các viên có ký hiệu W Y, 88,

c c

và m ột số các m ẫu khác,
kể cả m ột số m ẫu cho kết quả âm tính. Các kết quả cụ thể của quạ trình phân tích
m ẫu được chỉ ra trong phần phụ lục. Các kết quả này chỉ ra rằng: phương pháp
sắc ký lỏng ấp suất cao với quy trình chiết nêu trên hoàn toàn đáp ứng yêu cầu
của m ột phuơng pháp giám định chất m a tuý nhóm kich thích ATS.

Các trường hợp cụ thể: M ẫu phân tích là viên nén tròn m àu hổng, có hình
W Y và hình

c c .

M ẫu được nghiền m ịn, cân chính xác khoảng lOmg m ẫu hòa
tan trong 10ml m ethanol và dung dịch được pha loãng thêm 10 lần bằng
m ethanol. D ung dịch phân tích thu được lọc qua m àng lọc 0,45^im và tiến hành
phân tích trên hệ thống HPLC.

</div>
(23)<div class='page_container' data-page=23>

A c q . M e t h o d 
L a s t c h a n g e d 
A n a l y s i s M e t h o d 
L a s t c h a n g e d

I n j e c t i o n D a t e
S a m p l e N a m e
Acq. O p e r a t o r

M e t h o d f o r A T S

6 / 1 0 / 2 0 0 3 1 0 : 4 5 : 1 2 A M

WY

m a r d

C : \ H P C H E M \ l \ M E T H O D S \ N R I P S O l .M 
6 / 1 0 / 2 0 0 3 1 0 : 4 2 : 2 6 A M b y m a r d 
c :\ H P C H E M \ 1 \ M E T H 0 D S \ T H A I L A N .M

6 : 4 9 : 2 2 PM 
( m o d i f i e d a f t e r l o a d i n g )

1
pA
600
500
400

300
200
100
(CDEDAT\06100010 D)

j n

jl

metamphetamin

V ụ ,

I n t e r n a l s t a n d a r d R e p o r t
S o r t e d B y : s i g na l

M u l t i p l i e r : 1 . 0 0 00
D i l u t i o n : 1 . 00 00

Use M u l t i p l i e r & D i l u t i o n F a c t o r w i t h I ST D s
S i g n a l 1:

A r e a P e r c e n t R e p o r t
S o r t e d By

M u l t i p l i e r

M u l t i p l i e r : 1.0 00 0
D i l u t i o n : 1 . 0 00 0

Us e M u l t i p l i e r & D i l u t i o n F a c t o r w i t h I S T D s
Sig n a l

1.0000

</div>
(24)<div class='page_container' data-page=24>

C u r r e n t C h r o m a t o g r a m (s )

600

500

400

300

200

1 0 0

-pA

6 0 0

5 0 0

-400

200

100

(CDEDATV06100009.D)

2 .5

(CDE D A T\06100010 D)

tn Ợ)

o CNJ

V. z

CVJ CO

7.5 10 12.5

Metamphetamm

Vien W Y

Metamphetam

2.5 10 15 17 5

</div>
(25)<div class='page_container' data-page=25>

Ac q. M e t h o d 
L a s t c h a n g e d 
A n a l y s i s M e t h o d

L a s t c h a n g e d

I n j e c t i o n D a t e
S a m p l e N a m e
A c q . O p e r a t o r

M e t h o d f o r A T S _______

(CDEDAT\06100016D)

6 / 1 0 / 2 0 0 3 3 : 1 7 : 4 9 PM
vien c c

m a r d

c :\ H P C H E M \ 1 \ M E T H O D S \ N R I P S 0 1 . M 
6 / 1 0 / 2 0 0 3 3 : 1 0 : 3 0 PM b y m a r d 
C : \ H P C H E M \ 1 \ M E T H O D S \ T H A I L A N .M

6 : 4 9 : 2 2 PM 
( m o d i f i e d a f t e r l oa di ng)
pA

500

400

300

t o CO

fN 0> 
ÕỊ V

CN CÕ

100

WVK ,

5

J L

M D M A

h

I n t e r n a l s t a n d a r d R e p o r t
S o r t e d B y : s i g n a l

M u l t i p l i e r : 1 . 0 0 0 0
D i l u t i o n : 1 . 0 0 0 0

U s e M u l t i p l i e r & D i l u t i o n F a c t o r w i t h I ST Ds
S i g n a l 1:

A r e a P e r c e n t R e p o r t
S o r t e d B y : s i g n a l

M u l t i p l i e r : 1 . 00 0 0
D i l u t i o n : 1. 00 0 0

U s e M u l t i p l i e r & D i l u t i o n F a c t o r w i t h I ST D s
S i g n a l 1 :

H ình 7: Sắc ký đồ viên

c c

trên thiết bị sắc ký lỏng áp suất cao

</div>
(26)<div class='page_container' data-page=26>

C u r r e n t C h r o m a t o g r a m (8)

pA
500

400

300

200

1 0 0

-(CDEDATV06100012.D)

MDMA

—I—

7.5 10I— 15I—

2.5 12.5 17.5

(C D ED A T \06100016.D )
pA

5 0 0

-400

3 0 0

-100

rcg

CDs!

OC\i

Vien

cc

MDMA

2.5

7.5 10I— 12.5

'1 1

— I

-17 5

</div>
(27)<div class='page_container' data-page=27>

c. KẾT LUẬN

1. Đ ã khảo sát tìm được điều kiện ối ưu: trong phương pháp sắc ký lỏng áp
suất cao để tách và phân tích M etam phetam in và Ecstasy:

Cột ODS 5ịim; 125 X 4,6

Pha động: ACN/Nước: 60/940 (v/v)
Nồng độ axit photphoric: 8,5g/l
Thể tích Dietylamin: 0,30m l/l
D etector u v : 248nm

Đ ộ nhạy Detector: 0,01 AU
Tốc độ dòng lm l/phút
Thể tích vịng mẫu: IOịìI

2. Đ ã lựa chọn điều kiện chiết pha rắn (SPE) để chiết tách chất m a túy
M etam phetam in trong nước tiểu là: Cột chiết: Trao đổi cationic mạnh.
H oạt hóa cột chiết: 2ml m ethanol; lm l nước cất; 0,5m l axit photphoric
lOmM.

M ẫu nước tiểu 5ml thêm 0,5m l axit photphoric lOmM. Cho qua cột chiết
tốc độ khoảng 5m l/phút.

Cột chiết được làm khơ dưới dịng khí sạch và làm sạch bằng lm l axit
photphoric lOmM, 0,5m l axit axetic 0,1M và lm l methanol. Cột chiết
được làm khô m ột lần nữa bằng dòng khí sạch. Rửa giải với dung dịch
am m oniac/m ethanol (3%, v/v thể tích 2ml)

3. Phân tích m ẫu thực tế đạt kết quả tốt, hoàn toàn đủ điều kiện là một
phương pháp phân tích giám định chất m a túy nhóm kích thích ATS.

</div>
(28)<div class='page_container' data-page=28>

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1. Nguyễn Phong Hòa, Đặng Ngọc Hùng. Ma túy và những vấn đê về công tác

kiểm sốt ma túy. Nhà xuất bản Cơng an nhân dân, 1994.

2. Phan Quốc Kinh. Các chất ma túy ỏ Việt Nam. Nhà xuất bản Khoa học Kỹ 
thuật, 1995.

3. Nguyễn Đức Tâm. Từ điển các chất ma túy. Nhà xuất bản Công an Nhân dân,

1998.

4. Đặng Ngọc Hùng. Ma túy tổng hợp ATS, thực trạng và giải phập. Nhà xuất bản 
Công an Nhân dân, 2002.

5. C larke’s Isolation and Identification of Drugs - Second Editon. The 
pharmaceutical society of great Britain, 1986.

6. Recommended methods fo r the detection and assay o f Heroin, Canabis,

</div>
(29)<div class='page_container' data-page=29>

Acq. M e t h o d

L aB t c h a n g e d 
A n a l y s i s M e t h o d 
L as t c h a n g e d

In j e c t i o n D a t e
Sample N a m e
Acq. O p e r a t o r

M e t h o d f o r A T S

6/9/2 0 0 3 5:31:39 PM
Metamphetamin
m a r d

c :\ H P C H E M \ 1 \ M E T H 0 D S \ M A I M P 3 N . M 
6 / 9 / 2 0 0 3 2 : 3 2 : 5 7 PM b y m a r d 
C : \ H P C H E M \ 1 \ M E T H 0 D S \ T H A I L A N . M

7 : 0 2 : 1 4 PM 
( m o d i f i e d a f t e r lo a din g)

pA

250

-' (CDEDAT\06100009.D)

cic ) Metamphetamin

I n t e r n a l s t a n d a r d R e p o r t
S o r t e d B y

M u l t i p l i e r
D i l u t i o n
Use M u l t i p l i e r

: S i g n a l

: 1 . 0 0 0 0

: 1.0000

& D i l u t i o n F a c t o r w i t h I S T D s

A r e a P e r c e n t R e p o r t
Sorted B y : S i g n a l

M u l t i p l i e r : 1 . 0 0 0 0

Di lu tio n : 1 . 0 0 0 0

Jse M u l t i p l i e r & D i l u t i o n F a c t o r w i t h I S T D s

</div>
(30)<div class='page_container' data-page=30></div>
(31)<div class='page_container' data-page=31>

Acq. M e t h o d 
Last c h a n g e d

A n a l y s i s M e t h o d

Last c h a n g e d
I n j e c t i o n D a t e
Sample N a m e
Acg. O p e r a t o r

Method f o r A T S

(CDEDAT\06100009 D)

pA

250

-6 / 9 /2003 5:31:39 PM
Metamphetamin
m a r d

C : \ H P C H E M \ l \ M E T H O D S \ M A I M P 3 N . M
6 / 9 / 2 0 0 3 2 : 3 2 : 5 7 PM b y m a r d 
c : \ H P C H E M \ 1 \ M E T H 0 D S \ T H A I L A N . M

7 : 0 2 : 1 4 PM 
( m o d i f i e d a f t e r lo a di ng )

Metamphetamin

10 12 5 15 17.5

I n t e r n a l s t a n d a r d R e p o r t
S o r t e d B y

M u l t i p l i e r
D i l u t i o n

S i g n a l

1.0000
1.0000

Use M u l t i p l i e r & D i l u t i o n F a c t o r w i t h I S TD s

A r e a P e r c e n t R e p o r t
Sorted B y

M u l t i p l i e r
Ji l ut ion

S i g n a l

1.0000

1 . 0000

Jse M u l t i p l i e r Si D i l u t i o n F a c t o r w i t h I S T D s

</div>
(32)<div class='page_container' data-page=32>

Ac q. M e t h o d 
L a s t c h a n g e d 
A n a l y s i s M e t h o d 
L a s t c h a n g e d

I n j e c t i o n D a t e
S a m p l e N a m e
Acq. O p e r a t o r

M e t h o d f o r A T S

6 / 1 0 / 2 0 0 3 1 2 : 1 5 : 2 7 PM

MDMA

m a r a

C : \ H P C H E M \ l \ M E T H O D S \ N R I P S O l .M 
6 / 1 0 / 2 0 0 3 1 2 : 1 3 : 0 7 PM b y m a r d 
C : \ H P C H E M \ l \ M E T H O D S \ T H A I L A N .M

7 : 0 2 : 1 4 PM 
( m o d i f i e d a f t e r loa di ng )

MDMA

Jv -A--V

’ X... .. ..

7.5 10 12.5 15

I n t e r n a l s t a n d a r d R e p o r t
S i g n a l

1.0000

S o r t e d B y 
M u l t i p l i e r

D i l u t i o n : 1. 00 0 0

Use M u l t i p l i e r & D i l u t i o n F a c t o r w i t h I S TD s

A r e a P e r c e n t R e p o r t
S o r t e d B y : Si g na l

M u l t i p l i e r : 1 . 0 00 0
D i l u t i o n : 1 • 0000

Us e M u l t i p l i e r & D i l u t i o n F a c t o r w i t h I S TD s

17.5 n

</div>
(33)<div class='page_container' data-page=33>

C u r r e n t C h r o m a t o g r a m (s )

400

3 0 0

-200

100

(CDEDATN06100009. D) 
(CDEDAT\06100012.D)

\ n
'' ' ■

1‘
—Í—

2.5 10

MDMA

Metamphetamin

15 17.5

</div>
(34)<div class='page_container' data-page=34>

C u r r e n t c h r o m a t o g r a m ( e )

400

300-2 0 0

-1 0 0

-(CDEDAT\06100009.D)

Metamphetamin

2.5 7.5 10 12.5 15

400

3 0 0

-200

100

(CDEDAT\06100012.D)
<^1 ơ> in

(VÌ có

2.5

MDMA

7.5

—I—

10 12.5 “ I— 15 —I—

T
17 5

</div>
(35)<div class='page_container' data-page=35>

600

500

4 0 0

300

200

100

600

500

400

300

200

100

C h r o m a t o g r a m (s )

(CDEDAT\06100010.D)
© csj

Vien W Y

Metamphetarriinrriir

2.5 10

— I—

15
(C D ED A T\06100016.D )

cnt CD

hcg <N cn

ON ở) ■<?

c<rj CN cô

Vien

cc

M D M A

00

13: Sac kv đồ viên VVY và viên c c trẽ n tliiet hi sác kv 1011« á|) suat
cao

</div>
(36)<div class='page_container' data-page=36>

C u r r e n t C h r o m a t o g r a m ( s )
(CDEDAT\06100009 D)
pA
600

500
400
300
200
100
0
pA
600
500
400
300
-200
100

2 .5 5
(0 DE DAT \0G 100012 D)

■*» o> in
O J CM CO

0 2 .5 ______ 5
(CD ED ẦT\0ô 10 0 0 10 D)
pA

600
5 0 0
-400 J
300

200

-100
0

_0 .

pA ị
6 0 0 ;
500
4 0 0
300

200

100

^ --

---2 .5 5
( C O E D A T ^ 10 0 0 ĩi ' P i

U") CO

hCNi (N| CD

ONI cr> -c

rớg CM CO

7.5

7.5 10

Metamphetamin

12 5

MDMA

12.5

Metamphetamin

17.5

M D M A

2 5 10 12 5

</div>
(37)<div class='page_container' data-page=37>

A c q . M e t h o d 
L a s t c h a n g e d 
A n a l y s i s M e t h o d 
L a s t c h a n g e d

I n j e c t i o n D a t e
S a m p l e N a m e
Acq. O p e r a t o r

M e t h o d f o r A T S

6 / 9 / 2 0 0 3 3 : 1 7 : 5 4 P M

s

m a r d

c : \ H P C H E M \ 1 \ M E T H 0 D S \ M A I M P 3 N . M 
6 / 9 / 2 0 0 3 2 : 3 2 : 5 7 P M b y m a r d 
C : \ H P C H E M \ l \ M E T H O D S \ T H A I L A N . M

6 : 4 9 : 2 2 PM

( m o d i f i e d a f t e r l o a d i n g )

l_LL _JyjU.1

I n t e r n a l s t a n d a r d R e p o r t

S o r t e d B y : s i g n a l

M u l t i p l i e r : 1 .0 0 0 0
D i l u t i o n : 1 . 0 0 0 0

U s e M u l t i p l i e r & D i l u t i o n F a c t o r w i t h I S T Ds
S i g n a l 1:

A r e a P e r c e n t R e p o r t
S o r t e d B y : s i g n a l

M u l t i p l i e r : 1. 0 0 0 0

D i l u t i o n : 1 . 00 00

Use M u l t i p l i e r & D i l u t i o n F a c t o r w i t h I S TD s
S i g n a l 1:

</div>
(38)<div class='page_container' data-page=38>

I n j e c t i o n D a t e : 6 / 9 /2003 4:01:43 PM

S a m p l e N a m e : E P S T D
Acq. O p e r a t o r : m a r d

A c q . M e t h o d

L a s t c h a n g e d 
A n a l y s i s M e t h o d

Last c h a n g e d

M ethod f o r A T S

c :\ H P C H E M \ 1 \ M E T H 0 D S \ M A I M P 3 N . M 
6 / 9 / 2 0 0 3 2 : 3 2 : 5 7 P M b y m a r d 
c :\ H P C H E M \ 1 \ M E T H O D S \ T H A I L A N .M

6 : 4 9 : 2 2 P M 
( m o d i f i e d a f t e r l o a d i n g )

(CDEDAT\06090007.D)
pA

’ CN

250

I n t e r n a l s t a n d a r d R e p o r t
S o r t e d B y : s i g n a l

M u l t i p l i e r : 1 .0 0 0 0
D i l u t i o n : 1 . 0 0 0 0

Use M u l t i p l i e r & D i l u t i o n F a c t o r w i t h I S T D s
S i g na l 1:

A r e a P e r c e n t R e p o r t
S o r t e d B y : s i g n a l

M u l t i p l i e r : 1 . 00 0 0
D i l u t i o n 1 . 0 00 0

Us e M u l t i p l i e r & D i l u t i o n F a c t o r w i t h I S T Ds
S i g n a l 1 :

</div>
(39)<div class='page_container' data-page=39>

C u r r e n t C h r o m a t o g r a m ( s )

(CDEDATV06090007. D)

10 12.5 —I— 15

4 0 0

3 0 0

-200

-1 0 0

-pA

4 00

3 00

100

(CDEDATX061 00009.D)

A I

2.5

(CDEDATV061 00012.D)
2* CJ or

Ộ4 (T> in

Csi cvi CÕ

Metamphetamin

10 12.5 —I—15

M D M A

2.5 7.5

- T ---J—

10 12 5 15 17.5

H ình 18: Sắc ký đồ m ẫu ký hiệu EP STD và mẩu chuẩn M etam phetam in,
m ảu chuẩn M DM A trên thiết bị sác ký lỏng áp suất cao

</div>
(40)<div class='page_container' data-page=40>

Injection D a t e : 6/10/2003 1:01:01 PM
Sample N a m e : 88

Acq. O p e r a t o r : m a r d

Acq. M e t h o d 
Last c h a n g e d 
A n a l y s i s M e t h o d 
Last c h a n g e d
Me th od f o r A T S

A, (C DED AT\06100013 D)

c : \ H P C H E M \ 1 \ M E T H O D S \ N R I P S 0 1 . M 
6 / 1 0 / 2 0 0 3 1 2 : 1 3 : 0 7 PM b y m a r d 
c : \ H P C H E M \ l \ M E T H O D S \ T H A I L A N . M

7 : 4 5 : 5 9 A M 
( m o d i f i e d a f t e r loa di ng )

500 c ỌSÍ

400

300

200

100

J j ..

2.5 7.5 10 12 5 17.5

A r e a P e r c e n t R e p o r t
Sorted B y

M u l t i p l i e r 
Dilut io n

Si g n a l

1.0000
1.0000

Use M u l t i p l i e r & D i l u t i o n F a c t o r w i t h I ST Ds
Signal X:

Peak

R e t T i m e
[min]

T y p e w i d t h

[min]

A r e a
[pA*s]

H e i g h t
[pA]

A r e a

%
' ' I

1 2 . 068

1
BV

s 0 . 0 3 4 8 7 3 1 3 . 4 1 4 0 6 2 9 6 1 . 1 6 1 1 3 0 . 1 974 3

2 2 .218 w s 0 . 3 9 5 7 5 . 7 8 6 6 4 e 5 2 . 4 3 7 1 7 e 4 1 5 . 6 2 1 4 9

3 2 . 931 w s 0 . 0 5 1 6 1 . 98 82 6e 4 6 4 2 2 . 4 2 8 2 2 0 . 5 3 6 7 5

4 3 .451 VB s 0 . 3 3 8 3 3 . 0 9 4 9 6 e 6 1.52 4 8 le5 8 3 . 5 5 0 9 6

5 4 . 1 0 9 PB 0 . 0 6 6 0 48 3 . 67184 1 0 0 . 6 9 8 6 3 0 . 0 1 3 0 6

6 4 . 68 0 PB 0 . 0 7 5 9 20 6 . 84283 3 6 . 6 3 3 6 6 0 . 0 0 5 5 8

7 1 0 . 3 0 8 BB 0 . 0 2 9 5 9 4 0 . 1 7 7 8 0 5 1 0 . 2 5 5 3 7 0 . 0 2 5 3 8

8 1 8 . 0 3 9 BB 0 . 0 3 0 1 6 1 6 . 1 2 4 4 5 3 1 0 . 7 7 7 7 1 0 . 0 1 6 6 3

9 1 8 . 2 2 9 BP 0 . 0 3 0 5 3 4 1 . 4 5 8 5 0 1 6 9 . 3 4 4 2 8 0 . 0 0 9 2 2
10 1 8 . 5 5 0 BV 0 . 0 3 1 0 5 7 6 . 3 5 4 0 0 2 8 0 . 7 3 6 9 4 0 . 0 1 5 5 6
11 2 7 . 2 6 1 BP 0 . 0 3 5 5 1 4 9 . 9 5 5 6 9 6 6 . 0 4 6 3 8 0 . 0 0 4 0 5
12 2 9 . 2 9 4 BB 0 . 0 4 8 9 1 4 3 . 9 7 8 0 0 4 6 . 8 0 1 1 4 0 . 0 0 3 8 9

H ình 19: Sắc ký đồ m ẫu ký hiệu 88 trên thiết bị sắc ký lỏng áp suất cao

</div>
(41)<div class='page_container' data-page=41>

C u r r e n t C h r o m a t o g r a m (s )

(CDEDA1A06100009.D)
pA

500

400

300

200

100

10
(C D ED A T \0610 0 0 1 2.D)

20 m i n

pA
500

4 0 0

3 00

200

100

■sr Ơ1

CKl <J> IT

<si < 4 cr

pA
5 00

4 0 0

(C D E DATA06100013. D)
CCD

ip- CO in
— Ỡ) *<T

10 15 20 m i n

3 00

200

100

A K

10 15 20

</div>
(42)<div class='page_container' data-page=42>

A c q . M e t h o d 
L a s t c h a n g e d 
A n a l y s i s M e t h o d 
L a s t c h a n g e d
M e t h o d f o r A T S

I n j e c t i o n D a t e

S a m p l e N a m e
Acq. O p e r a t o r

6 / 1 0 / 2 0 0 3 1 : 4 6 : 4 3 P M

T
m a r d

C : \ H P C H E M \ l \ M E T H O D S \ N R I P S O l .M 
6 / 1 0 / 2 0 0 3 1 2 : 1 3 : 0 7 PM b y m a r d 
c :\H P C H E M \ 1 \ M E T H O D S \ T H A I L A N .M

6 : 4 9 : 2 2 P M 
( m o d i f i e d a f t e r l o a d i ng )
(CDEDAT\06100014.D)

pA-

600-w o 1}
r p>< n s

<!N ÕĨ

Vj-c i j <N r õ

500

-400

300

2 0 0

1 0 0

-10

JUL_______- 4 JL/UL J j I j L

15 20

I n t e r n a l s t a n d a r d R e p o r t
S o r t e d B y : s i gn al

M u l t i p l i e r : 1. 00 00
D i l u t i o n : 1 . 00 0 0

U s e M u l t i p l i e r & D i l u t i o n F a c t o r w i t h IS TDs
S i g n a l 1:

A r e a P e r c e n t R e p o r t
: S i g n al

: 1.0000

& D i l u t i o n F a c t o r w i t h IS TD s

S i g n a l 1:

S o r t e d B y
M u l t i p l i e r
D i l u t i o n
U s e M u l t i p l i e r

</div>
(43)<div class='page_container' data-page=43>

Bảng 2 . Hệ số k ’ cùa M et và M D M A khi thay đổi tỷ lệ CAN

Tỷ lệ A C N /N ước (v/v) k ’

Met M DM A

4 0 /9 6 0 12,01 15,00

5 0 /9 5 0 8,92 11,02

6 0 /9 4 0 7,32 8,56

7 0 /9 3 0 6,89 7,85

Tỷ lệ A C N trong pha động càng cao thời gian lưu của Met và M DM A giảm hai 
cấu tử ra nhanh hơn dẫn đến sự tách không đảm bao, khoảng tỷ lệ thành phần ACN trong 
pha động từ 55 đến 7 0 cho kết quả tách tốt, các pic cân xứng và cho phép định lượng đồng 
thời, để thuận lợi cho công tác chuẩn bị pha ch ế pha động được tốt, chúng tôi lựa chọn ty 
lệ A CN /N ước = 6 0 /9 4 0 (v/v) là điều kiện phân tích mẫu và khảo sát các đieu kiện khac 
tiếp theo.

1.3. Điều kiện trong phương pháp sắc ký lỏng áp suất cao

Từ các kết quả trên, điều kiện tách xác định Metamphetamin và Ecstasy trên hệ 
thống sắc ký lỏn g HPLC đã được lựa chọn như sau:

Cột ODS 5|im ; 125x4,6

Pha động: ACN/Nước = 6 0 /9 4 0 (v/v)
N ồn g độ axit photphoric: 8,5g/l 
Thể tích Dietylamin: 0,30m l/l 
D etector UV: 248nm 
Đ ộ nhạy Detector: 0,01 A U 
Tốc độ dòng: lm l/phút 
Thể tích vịng mẫu: 10^1

Trên sắc ký đồ hai chất Metamphetamin và Ecstasy (M D M A ) hoàn toàn tách khỏi 
nhau. Các pic thu được rất thuận lợi cho việc định lượng.

2. Q uá trình chuẩn bị mẫu

K ỹ thuật chiết lỏng - lỏng và chiết pha rắn đã được nghiên cứu cho quá trình chuẩn 
bị mẫu. K ỹ thuật chiết pha rắn tỏ ra hiệu quả hơn và đã được lựa chọn để chuẩn bị mẫu từ 
đối tượng nghiên cứu là nước tiểu:

V ới kỹ thuật chiết pha rắn, các điều kiện tối ưu được tìm ra là:

Cột chiết: trao đổi cationic mạnh. Hoạt hóa cột chiết: 2ml methanol; lm l nước cất 
và 0,5rril axit photphoric lOmM Mầu nước tiểu 5mi thêm 0,5m l axit photphoric lOmM. 
Cho qua cột chiết tốc độ khoảng 5ml/phút.Cột chiết được làm khơ dưới dịng khí sạch và 
làm sạch bằng 1ml axit photphoric lOmM, 0,5m l axit axetic 0,1M vả lm l methanol. Cột 
chiết được làm khô một lần nữa bằng dịng khí sạch.Rửa giải với dung dịch 
am m oniac/m ethanol (3%, v/v thể tích 2m l).D ịch rửa giải được làm khơ và hịa tan trong

m ethanol hoặc pha động và tiên hành phân tích trên hệ HPLC.

Trong tníờng hợp mẫu là các viên nén chỉ cần hòa tan trong Metanol hoặc Etanol
rồi lọc qua m àng lọc cỡ 0,45 |im.

3. K ết quả phản tích mẫu thực tê

Á p dung quá trình thu dược, chúng tôi đã tiên hùnh tach va phun tích mọt loạt cac
mẫu thưc tề là các viên có ký hiệu W Y , 88, c c và một sô các mâu khác, kê ca mọt sộ 
mâu ch o kết quả âm tính. Các kết quả này chỉ ra ràng: phương pháp sắc ký lòng áp suất 
cao với quy trình chiết nêu trên hoàn toàn đáp ứng yêu cầu cùa một phucmg pháp giam

định chất ma tuý nhóm kich thích ATS. . , - . «1,1/

Các trường hợp cụ thể: Mẫu phân tích là vién nén trịn màu hơng có hình W Y và 
hình c c . Mẫu được nghiển mịn, cân chính xác khoảng lOmg máu hòa tan trong 10ml 
m ethanol va dung dịch được pha loãng thêm 10 lần bằng methanol. Lọc dung dịch thu 
được qua m àng lọc 0 ,4 5 |im và tiến hành phân tích trẽn hệ thơng HPLC.

</div>
(44)<div class='page_container' data-page=44>

H ình 1: sắ c ký đồ của viên w Y và viên c c trên thiết bị sắc ký lòng áp suất cao
Từ kết quả thu nhận được ta thấy trong viên W Y có chứa Metaphetamin và trong 
viên c c c ó chứa Ecstasy. Hiện tại mới chỉ nhận biết được thành phần chính của viên W Y

là

M etam phetam in, trên cơ sở nghiên cứu của đề tài sẽ phát triển nghiên cứu sâu hơn về 
thành phần các chất có trong viên W Y , có thể là hợp chất phụ thêm tăng tác dụng 
(caffein ) hoặc các chất dẫn xuất nhóm ATS.

IV. K Ế T LU Ậ N

Đ ã khảo sát tìm được điểu kiện ối ưu: trong phương pháp sắc ký lỏng áp suất cao

để tách và phân tích Metamphetamin và Ecstasy:

Đ ã lựa chọn điều kiện chiết pha rắn (SPE) để chiết tách chất ma túy

Phân tích mẫu thực tế đạt kết quả tốt, hoàn toàn đủ điều kiện là một phương pháp 
phân tích giám định chất ma túy nhóm kích thích ATS.

TÀI LIỆ U T H A M KH ẢO

1. N gu yễn Phong Hòa, Đ ặng N gọc Hùng. M a tủ y và những vấn đẽ vê công tác kiểm

so á t m a túy. N hà xuất bản Công an nhân dân, 1994.

2. Phan Q uốc Kinh. C á c ch ấ t m a tú y ở V iệt N a m . Nhà xuất bản Khoa học Kỹ thuật,

1995. _

3. N g u y ễn Đức Tâm. T ừ đ iển cá c c h ấ t m a túy. Nhà xuất bản Công an Nhân dán,
1998.

4. Đ ặng N g ọ c Hùng. M a tú y tổng hợ p ATS, thực trạng và giải pliáp. Nhà xuất bản
C ổng an Nhân dân, 2002.

5. C la r k e ’s Is o la tio n a n d Id en tifica tio n o f D rugs - Second Editon. The
pharmaceutical society o f great Britain, 1986.

6 R e c o m m e n d e d m eth o d s f o r the d ctcc tio n a n d a ssa y o f H c to m , CoHCJbis, C ocaine,

Amphetamine Metũlĩtĩìphetơnĩinc, CIHCỈ Ring-Substituted A/ĩìplìctơ/ĩìinc dct IVCMIVCS

</div>
(45)<div class='page_container' data-page=45>

PHIẾU ĐẢNG KÝ

KẾT QUẢ NGHIÊN c ú n K.H - CN

Tên đề tài ( hoặc dự án ):

Sử dụng phương pháp sắc ký kết hợp kỹ thuật chiết tách để xác đinh
các chất kích thích trong mẫu sinh học

M ã số: Q T-01-12

Cơ quan chủ trì đề tài ( hoặc dự án ):

Trường đại học Khoa học Tự nhiên

Địa ch ỉ: 334 Nguyễn Trãi - Thanh Xuân - Hà Nội

T e l : 5583307

Cơ quan quản lý đề tài ( hoặc dự án ):

Đại học Q uốc gia Hà Nội

Địa chỉ: 144 Đường Xuân Thủy - Cầu Giấy - Hà Nội

Tel: 8340564

T ổng kinh phí thực chi: 8 triệu

Trong đó: - Từ ngân sách Nhà nước: 8 triệu

- K inh phí của trường:

- Vay tín dụng:
- V ốn tự có
- Thu hồi:

Thời gian nghiên cứu : 12 tháng

Thời gian bắt đầu: 5/2001

Thời gian kết thúc: 5/2002

Tên các cán bộ phối hợp nghiên cứu:

1. TS Lê N hư Thanh
2. ThS N guyễn Xuân Phú

Sô đăng ký để tài: Sô chứng nhận đăng ký Bảo m ật:

kết quả nghiên cứu: - Phổ biến rộng r ã i : X

Ngày:

.

</div>
(46)<div class='page_container' data-page=46>

Tóm tắt kết quả nghiên cưú:

- Đ ã tìm ra các điều kiện tối ưu của kỹ thuật chiết để tách sơ bộ và
làm giầu mẫu.

- Đ ã tìm ra các điều kiện tối ưu trong phương pháp sắc k ý lỏng áp
suất cao để tách và xác định Metamphetamin và Ecstasy.

- Đ ã thành cồng trong việc áp dụng các kết quả đạt được để tách và
và xác định M etam phetam in và Ecstasy trong mẫu thực tế.

Kiến nghị về quy m ô và đối tượng áp dụng nghiên cứu:

Đ ề nghị các cấp có thẩm quyền cho phép tiếp tục nghiên cứu và áp dụng
các kết quả thu được trong việc nghiên cứu các đối tuợng khác, đặc biệt là các
chất doping trong thể thao.

C hù nhiệm để tài

Thù trường cơ quan
chù trì đề tài

Chù tịch hội đổng
đánh giá chính thức

Thủ trưởng cơ quan
quản lý dé tài

Họ tên & NẢuÀ ĩ h & n ị }ÌC jtU jín tì ư ị-Ị^

H ọc hàm

H ọc vị TC

(j9 75 )c K

K í tẽn

</div>