Phân lâp vi khuẩn

Bài Báo Cáo
Quy trình phân lập vi khuẩn
Môn:Công nghệ lên men
SVTH : Cao Thị Thùy Trang
Lớp : 08sh2

Nội dung
1. Khái niệm
2. Quy trình phân lập vi khuẩn
2.1. Dụng cụ, thiết bị
2.2. Nguyên liệu và mẫu vật
2.3. Nguyên tắc phân lập
2.4 Quy trình phân lập
3. Kết luận

Khái niệm
Phân lập vi khuẩn là một quá
trình tách rời một loại vi khuẩn từ
quần thể vi sinh vật, sau đó gieo
chúng lên bề mặt môi trường thạch
dinh dưỡng chọn lọc.
Sau khi ủ ở các điều kiện thích
hợp các vi khuẩn sẽ phân chia
nhiều lần tạo thành những quần thể
mọc riêng biệt gọi là khuẩn lạc.

Chủng vi khuẩn thuần khiết (chủng
sạch) là thế hệ con, cháu, dòng có
nguồn gốc từ một tế bào riêng lẻ.
Các chủng vi khuẩn được thu nhận

từ khuẩn lạc phân lập lần đầu chưa
chắc đã thuần khiết vì một khuẩn lạc có
thể được hình thành bởi một hoặc
nhiều tế bào, vì thế phải làm sạch
nhiều lần mới thu được chủng vi khuẩn
thuần khiết.


Trong thiên nhiên hoặc trong các vật
phẩm nghiên cưú, vi sinh vật thường
tồn taị ở dạng hỗn hợp gồm nhiều loài
khác nhau. Muốn nghiên cứu về hình
thái, sinh lý, lý hoá hoặc sử dụng vào
thực tiễn một loài nào đó thì cần phải
đưa chúng về dạng thuần khiết.


Dụng cụ, thiết bị

Nguyên liệu và mẫu vật
Bông không thấm nước, nước cất, cồn
đốt, bông thấm nước, giấy thấm, giấy báo
gói đĩa Petri, dây buộc bằng nilon.
Môi trường thạch đĩa, thạch nghiêng ống
để nuôi cấy vi khuẩn.
Chai tam giác loại 250 ml chứa môi
trường.
Đất vườn, đất đồi, mỗi loại 100-150g.
Các ống giống vi khuẩn chuẩn.
Chất ức khuẩn: streptomycin, penicillin,

gentian violet v.v...

•
Môi trường thạch - thịt – pepton có thành
phần: Nước thịt 1000ml, pepton 10g,
thạch (agar) 20g; pH=7,0; khử trùng 1
atm/30 phút.
•
Môi trường nước mắm – pepton có thành
phần: nước mắm 350 đạm 30ml, pepton
10g, thạch (agar) 20g; pH=7,0; khử trùng
1 atm/30 phút.

Nguyên tắc phân lập
•
Gieo cấy vi khuẩn đã pha loãng trên môi
trường dinh dưỡng đặc trưng (2% thạch
còn gọi agar).
•
Nuôi dưỡng trong điều kiện thích hợp
cho mọc các khuẩn lạc tách biệt nhau.
•
Cấy tách từ khuẩn lạc mọc tách biệt
sang ống môi trường dinh dưỡng thạch
nghiêng để thu nhận chủng vi khuẩn
thuần khiết (do Robert Koch đề ra).

Quy trình phân lập
Pha môi trường

Thu mẫu
Pha loãng mẫu

Nuôi cấy

Thu nhận chủng

Kiểm tra

Bảo quản

Pha chế môi trường
•
Cân, đong chính xác từng thành phần môi
trường
•
Hòa tan các chất vào nước, đun và khuấy cho
tan
•
Làm trong môi trường, kiểm tra thể tích và pH
•
Rót môi trường vào dụng cụ. Làm nút bông, bao
giấy họa báo
•
Khử trùng ở nồi hấp áp lực hơi nước (0,8 – 1,0
atm/30 phút) tùy loại môi trường
•
Chế môi trường thạch nghiêng và thạch đĩa.

Thu mẫu, nuôi tích lũy
Thu mẫu đất, nấm mốc và vi khuẩn được
lấy từ bã mía, vi khuẩn lactic từ nước muối
dưa cải hoặc các cơ chất có vi khuẩn từ
100-150g, trường hợp số vi khuẩn có
mặt ít trong mẫu thì phải nuôi tích lũy
bằng cách ủ mẫu, bổ sung chất dinh
dưỡng và các điều kiện lý, hóa cần thiết
hoặc bổ sung các chất ức chế sinh
trưởng của các vi sinh vật đi kèm.

Pha loãng mẫu
•
Cân lấy 1g mẫu có vi khuẩn cho vào ống
nghiệm chứa 9 ml nước cất vô trùng, khuấy
bằng đũa thuỷ tinh cho tan hết mẫu. Ta có
dung dịch mẫu pha loãng 10
-1
lần.
•
Lấy 1ml dịch huyền phù ở độ pha loãng10
-1
đưa vào ống nghiệm chứa 9 ml nước vô
trùng. Trộn đều ta có dịch pha loãng 10
-2
lần.
•
Tiếp tục làm như trên, ta có một loạt độ pha
loãng dịch mẫu khác nhau như ý.