Tài liệu Xác định hoạt tính quang hoá của lục lạp tách rời pptx

Bài thực hành 5

Xác định hoạt tính quang
hoá của lục lạp tách rời


1. Nguyên tắc của phương
pháp

Lục lạp tách rời khỏi lá bằng các
dung dịch dinh dưỡng thích hợp, khi
được chiếu sáng có thể thực hiện
được một phần các phản ứng quang
hợp, cụ thể là có thể thực hiện được
các phản ứng quang phân li nước
giải phong oxi và có thể khử các
chất, nếu có các chất nhận điện tử
nhân tạo, nhờ H + và e của nước.
Người ta gọi phản ứng của lục lạp
tách rời này là phản ứng Hill.
Phản ứng diễn ra như sau:
A + H
2
O =(ánh sáng, lục lạp)=>
AH
2
+ 1/2 O
2

(A - chất nhận điện tử, Ví dụ: DCPIP
- dichlorophenol Indophenolat natri).

DCPIP ở trạng thái oxi hoá có màu
xanh da trời, ở trạng thái khử mất
màu. Lượng oxi thải ra và tốc độ thay
đổi màu là chỉ số đánh giá hoạt tính
quang hoá của lục lạp tách rời.
2. Đối tượng, hoá chất và
dụng cụ thí nghiệm
- lá tươi
- ống đong
- cân kĩ thuật
- cối chày sứ
- cốc
- vải lọc
- ống li tâm
- máy so màu
- đệm photphat 0,06 M pH = 7,1
- DCPIP 1.10 -4 M
- NaCl
3. Các bước tiến hành
Thí nghiệm 1 :
Cân khoảng 2 gam lá, dùng kéo cắt
nhỏ, nghiền trong cối sứ với 10 ml
môi trường tách (0, 87g NaCl hoà tan
trong 50 ml đệm photphat 0,06 M pH
7,1). Thêm vào dịch nghiền một ít
môi trường, rồi lọc dịch nghiền vào
cốc qua 2 lớp vải lọc. Sau đó cho dịch
lọc vào ống li tâm và li tâm với tốc độ
500 - 1000 vòng/phút trong 3 phút.
Sau khi bỏ cặn, li tâm lớp dịch phía

trên 10 phút với tốc độ 2000 vòng /
phút. Bỏ lớp dịch lỏng ở phía trên, ta
thu được cặn màu xanh lục. Đó chính
là lục lạp. Khuấy đều lục lạp trong
ống li tâm bằng một ít môi trường,
sau đó cho dịch lục lạp vào ống đong,
cho thêm môi trường cho đến 20 ml.
Đo mật độ quang học của khối dịch
chứa lục lạp trên máy so màu quang
điện với kính lọc đỏ và pha loãng dịch
tới giá trị của OD là 0, 260. Giá trị
này tương ứng với nồng độ của
clorophin trong khối dịch là 10 micro
gam/ ml. Để dịch chứa lục lạp trong
tối.
Thí nghiệm 2 :
Xác định hoạt tính của phản ứng Hill
với 2,6 - DCPIP
Để xác định hoạt tính của phản ứng
Hill, lấy 2 ống nghiệm, cho vào mỗi
ống 5 ml dịch lục lạp và 2 ml DCPIP
nồng độ 1.10- 4 M (phân tử lượng của
DCPIP là 290) Một ống nghiệm đặt
trong tối làm ống kiểm tra, ống thứ 2
đặt trong phòng và chiếu sáng bằng
bóng đèn điện 200 W trong 5 phút (để
ống nghiệm cách đèn 20 cm). Sau 5
phút chiếu sáng, nhanh chóng xác
định mật độ quang học của dịch lục
lạp trong cả hai ống nghiệm trên máy

so màu quang điện. Mẫu đối chứng là
nước cất. Dùng cuvet có độ dày 5 mm
và đo với kính lọc màu đỏ.
Tính sự biến đổi mật độ quang học
của ống thí nghiệm trong thời gian thí