báo cáo thực hành vitamin b12 t1 n2 (bản đầy đủ) (1)

Nhóm 2 – Tổ 1 – Đại học 3 Dược 02
1.Ngô Thị Ngọc Nhi
2. Lê Thị Kim Kiều
3. Võ Thị Thanh Nga
4. Võ Thị Quỳnh Như

Mơn: Hóa Phân Tích

BÁO CÁO THỰC HÀNH
ĐỊNH TÍNH VÀ ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN B12 BẰNG
QUANG PHỔ UV-VIS
I. Cơ sở lý thuyết
* Nguyên tắc của phương pháp đo phổ UV-VIS phổ hấp thụ tử ngoại và khả kiến:
Dựa trên sự hấp thụ ánh sáng (bức xạ điện từ) của dung dịch chất nghiên cứu ở
vùng tử ngoại (UV) và khả kiến (VIS). Định luật cơ bản của sự hấp thụ ánh sáng
của dung dịch là định luật Lambert- Beer:
A= .l.C = .l.C
Trong đó A: mật độ quang
là hệ số hấp thụ phân tử
là hệ số hấp thụ riêng
l: bề dày của lớp dung dịch (cm)
C: là nồng độ của dung dịch
II. Chuẩn bị
1. Hóa chất
- Dung dịch tiêm B12: 1000 µg/ml (ppm)
- Nước cất
2. Dụng cụ
- Máy quang phổ UV – VIS
- Các pipet chính xác
- Cốc thủy tinh
- Các bình định mức

- Cốc có mỏ
II. Định tính vitamin B12
1. So sánh phổ của 2 dung dịch
* Chuẩn bị: Pha loãng dung dịch tiêm vitamin B12 để có nồng độ khoảng 0.0100%
(100 µg/ml)
* Tiến hành:
- Qt phổ dung dịch mẫu chuẩn vitamin B12 100ppm (vừa pha) và dung dịch mẫu
thử D trong cuvet thạch anh với bước sóng từ 600nm đến 240nm.
- Nếu thu được hai phổ trùng nhau hay tương tự nhau thì chứng tỏ trong dung


dịch thử D có chứa vitamin B12.
* Kết quả:
- Phổ của dung dich chuẩn vitamin B12 (100ppm vừa pha) (hình ảnh)
- Phổ của dung dịch mẫu chuẩn vitamin B12(hình ảnh)
- Nhận xét: Hai phổ tương tự nhau và có cực đại hấp thụ giống nhau chứng tỏ
có vitamin B12 trong dung dịch thử.
- Kết luận: Trong dung dịch mẫu thử có chứa vitamin B12.
2.Dựa vào đặc trưng của phổ
Với vitamin B12 ,dung dịch 0,0030% trong nước có 3 cực đại hấp thụ ở 3 bước
sóng 361±1 nm, 550±2 nm, 278±1 nm. Tỷ số độ hấp thụ ở 361nm với độ hấp thụ ở
278nm là 1,70 đến 1,90; tỷ số độ hấp thụ ở 361nm với độ hấp thụ ở 550nm là 3,15
đến 3,45
* Tiến hành
- Quét phổ trong cuvet thạch anh với bước sóng từ 240-640nm.
- Tính các tỷ số hấp phụ.
- So sánh với tỷ số của B12.
* Ta có kết quả của mẫu thử D:
λ
278nm

361nm
549nm
A
0,614244
1,072761
0,333270
є [1,7;1,9]
є [3,15;3,45]
* Kết luận: Trong dung dịch mẫu thử có chứa vitamin B12
II. Định lượng vitamin B12
1. Phương pháp đo trực tiếp.
- Đo mật độ quang của dung dịch phân tích mẫu thử ở bước sóng 361nm:
A=1,072521
- Độ hấp thụ riêng của vitamin B12 ở bước song 361nm bằng 207: =207
- Từ công thức A=1.C%
Với A=1,072521; l=1cm; =207
→ C%thử= 5,18126.10-3 %
= 51,8126 ppm (µg/ml)
Vậy nồng độ của dung dịch phân tích mẫu thử là 51,8126 ppm
2. Phương pháp đường chuẩn
* Tiến hành:
- Pha một dung dịch chuẩn B12 có nồng độ lần lượt là 10ppm, 20ppm,
30ppm, 60ppm, 100ppm từ dung dịch chuẩn 1000ppm.
*1 ống dung dịch B121000 ppm + H2O vừa đủ 10ml => dd B12 100 ppm
Sau đó: + hút 2ml dung dịch 100ppm (vừa pha) + H2O vừa đủ 10ml =>


dung

dịch B12 20ppm (C2)

+ còn lại 8ml dd B12 100 ppm (C5)

* 1 ống dung dịch B121000 ppm + H2O vừa đủ 10ml => dd B12 100 ppm
Từ dd B12 100ppm vừa pha
+ hút 1ml + H2O vừa đủ 10ml => dd B12 10 ppm (C1)
+ hút 3ml+ H2O vừa đủ 10ml => dd B12 30 ppm (C3)
+ hút 6ml + H2O vừa đủ 10ml => dd B12 60 ppm (C4)
- Quét phổ của 5 dung dịch chuẩn và dung dịch thuốc thử mẫu D ở bước sóng
361nm.
* Kết quả:
C (ppm)
10ppm
20ppm
30ppm
60ppm
100ppm
Mẫu D
(C1)
(C2)
(C3)
(C4)
(C5)
A1
0,236571 0,512704 0,716034 1,353736 2,187323 1,072692
A2
0,236506 0,512641 0,716013 1,353872 2,186804 1,072351
A3
0,236502 0,512642 0,715905 1,353760 2,186306 1,072521
Atb
0,236526 0,512662 0,715984 1,353789 2,186811 1,072521

Gọi y là biến của độ hấp thu
x là biến của nồng độ
Phương trình đường chuẩn có dạng y = ax + b
Với a = 0,0214
b = 0,0603

- Phương trình hồi quy tuyến tính là A=0,0214C + 0,0603
Với AThử= AD=1,072521
→ Cthử = 47,3 ppm
3. Phương pháp so sánh .
- Theo nguyên tắc so sánh thì ta chọn một điểm so sánh càng gần với nồng độ của
chất cần xác định thì phép so sánh càng chính xác.
Với mật độ quang của mẫu thử D là AD=1,072521


Thì ta chọn ra dung dịch có độ hấp thụ quang gần với 1,072521 nhất, đó chính là
C4 có A4=1,353789
Ta có cơng thức:
CThử = CD= = 47,534 ppm
Vậy nồng độ vitamin B12 có trong dung dịch phân tích mẫu thử là 47,534 ppm
● Khi dùng ba phương pháp khác nhau để tính nồng độ dung dịch thử, ta thu được
các kết quả có độ chênh lệch khá nhỏ
