Phân lập và xác định cấu trúc các hợp chất từ nấm linh chi đen (ganodenrma sinense zhao, xu et zhang) ở việt nam luận văn thạc sỹ hóa học

MỞ ĐẦU
1. Lý do chọn đề tài
Từ 2000 năm qua, các loại nấm thuộc chi Linh chi đã được giới y học
hàng đầu của phương Đông quan tâm, sản phẩm có nguồn gốc từ linh chi hiện
đang có khối lượng bán hàng cao nhất trong thị trường thực phẩm y tế tại Đài
Loan, Trung Quốc. Gần đây, quả thể và bào tử nấm đang nhận được sự quan tâm
của giới y học, mà còn là một nguồn hứa hẹn mới của ngành dược phẩm [1].
Nhiều hợp chất với các hoạt động tim mạch, điều hòa miễn dịch, gây độc tế bào,
giảm đau, trị đái tháo đường, chất chống oxy hóa, chất diệt côn trùng... đã được
cô lập trong hai thập kỷ qua. Chỉ trong có hai lồi Ganoderma lucidum (Linh chi
đỏ; Xích chi) và Ganoderma applanatum (Cổ linh chi) đã thu được hơn 130 loại
chất chuyển hóa với các nhân tế bào loại lanosterol và ergosterol (provitamin
D2), sự phân lập chúng cùng với việc xác định hoạt tính sinh học được giới thiệu
trong một số tài liệu đã công bố [2].
Sự xuất hiện của các chất chuyển hóa thứ cấp chủ yếu là do các loại
nấm không thể tổng hợp các phân tử lớn từ cacbon đioxit và năng lượng từ ánh
sáng mặt trời mà khơng có chất diệp lục. Do đó, ngồi các điều kiện khí hậu của
mơi trường sự phát triển của vi sinh vật được xác định chủ yếu bởi các loại chất
dinh dưỡng của chất nền nơi chúng phát triển, làm cho nấm xuất hiện ở các vùng
khác nhau hoặc phát triển trên các chất nền khác nhau, có thể thay đổi và thay
đổi q trình trao đổi chất của chúng tạo ra nhiều loại hóa chất với cấu trúc khác
nhau có thể trở thành chất mới [3],[4].
Việt Nam có khí hậu nhiệt đới gió mùa và các loại thực vật đa dạng sinh
học hứa hẹn một lượng lớn các loài nấm đặc trưng do các điều kiện cần thiết cho
các loại nấm không thể sinh tổng hợp các hợp chất đã được nghiên cứu của cùng
một loài xuất hiện ở các nơi khác của thế giới. Ở Việt Nam có rất ít nghiên cứu
đến thành phần hóa học của nấm như vậy, những nghiên cứu này chủ yếu nhấn
mạnh vào nội dung của ergosterol (provitamin D 2), mà ergosterol hiện đang
1

được sử dụng trong một số cây trồng ăn được trên quy mô lớn như một nguồn
cung cấp thay thế các loại vitamin, khoáng chất, amino axit, chất xơ và ít chất
béo [5,6] ở Costa Rica.
Vì vậy chúng tơi chọn đề tài: “Phân lập và xác định cấu trúc các hợp
chất từ nấm (Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang) ở Việt Nam”
2. Nhiệm vụ nghiên cứu
Trong luận văn này, chúng tơi có các nhiệm vụ:
- Chiết chọn lọc với các dung mơi thích hợp để thu được hỗn hợp các hợp
chất từ nấm linh chi đen (Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang).
- Phân lập và xác định cấu trúc các hợp chất từ nấm linh chi đen
(Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang).
3. Đối tượng nghiên cứu
Đối tượng nghiên cứu là dịch chiết từ nấm linh chi đen (Ganoderma
sinense Zhao, Xu et Zhang) ở Việt Nam.

2


Chương 1
TỔNG QUAN
1.1. Giới nấm
Nấm là một nhóm lớn các sinh vật (khoảng 500.000 lồi đã được mơ tả,
nhưng người ta ước tính rằng có thể có từ 1 đến 1,5 triệu loài) được phân bố
rộng rãi trong tự nhiên, góp phần vào sự phân hủy các chất hữu cơ và tham gia
vào chu kỳ sinh học, chỉ một số ít là gây bệnh cho động vật và thực vật. Ban
đầu, các loại nấm được phân loại trong giới thực vật và cấu trúc của các chất tạo
nên các sinh vật được coi là có cấu trúc của các chất nền mà sinh vật đó phát
triển. Tuy nhiên, khi áp dụng sinh học phân tử trong các nghiên cứu phân loại
học đã chỉ ra rằng chúng chỉ có cấu trúc gần giống với giới thực vật. Nấm là sinh
vật có nhân điển hình và thường các tế bào khác với tế bào thực vật trong thành

phần của thành tế bào và lục lạp thiếu chất diệp lục, nhân có thành tế bào và sự
hiện diện của ergosterol ở màng tế bào chất [8].
Nấm là vi sinh vật dị dưỡng hóa năng nên có được chất dinh dưỡng bằng
cách hấp thụ và chuyển hóa các hợp chất hữu cơ của các sinh vật khác tổng hợp
được từ năng lượng ánh sáng mặt trời và cacbon đioxit. Các chất dinh dưỡng
được hòa tan bởi các enzyme tiết ra, sau đó hấp thu qua thành tế bào mỏng và
được phân phối bởi sự khuyếch tán đơn giản trong những nguyên sinh chất.
Cùng với vi khuẩn, là nguyên nhân của sự thối rữa và phân hủy các chất hữu cơ
[9]. Điều này ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và phát triển của chúng trong tự
nhiên do kết hợp với các chất hữu đang phân hủy, tham gia vào chu trình tự
nhiên của cacbon và các chu trình tự nhiên khác. Thơng thường sinh sản vơ tính
và cả sinh sản hữu tính, thơng qua các bào tử, sinh sản ra hàng triệu tế bào nấm,
đều có khả năng phát triển thành một lồi nấm mới. Các bào tử sinh ra sau khi
có sự hợp nhất hai hạt nhân của hai sợi nấm tương thích và sự phân bào giảm
nhiễm tiếp theo. Các hình thái sinh sản của các bào tử nấm rất đa dạng và cần
sự quan tâm rất lớn để xác định cấu trúc và phân loại chúng [8].
1.1.1. Đặc điểm hình thái chung
3


Nấm là một loài được xác định dựa trên một tập hợp các đặc điểm chung,
nhưng không nhất thiết phải tất cả các nhóm đặc điểm xuất hiện cùng nhau, đó
là:
a. Tổ chức đơn bào, đa bào hay lưỡng hình, khơng thật sự hình thành các
mơ tế bào.
b. Phần lớn các loại nấm bao gồm các sợi nấm mà sợi mỏng có vách ngăn
với nhau hoặc có thể khơng có vách ngăn, trong đó, khi có các điều kiện cần
thiết về độ ẩm thì có rất nhiều cách khác nhau để hình thành một cơ thể bào tử
quả thể.
c. Thực vật chủ yếu là lưu trữ vật chất ở dạng tinh bột, nhưng nấm chủ

yếu là lưu trữ ở dạng glycogen tương tự như giới động vật.
d. Thành tế bào chủ yếu gồm polysaccarit và các protein khác nhau. Các
polysaccarit quan trọng nhất là chitin (polyme của N-axetyl glucosamine hay 2(axetylamin)-2-deoxy-D-glucozơ), mannan (polyme của mannozơ) và glucan
(polyme của glucozơ).
e. Chủ yếu là ưa khí, mặc dù có vi khuẩn yếm khí chọn lọc.
f. Dị dưỡng dinh dưỡng, một loại enzyme tiêu hóa hiếm được phân tán
trên bề mặt chất nền và các loại nấm bị thối hóa được sử dụng như một nguồn
cung cấp chất dinh dưỡng.
1.1.2. Sự phân bố và mơi trường sống
Nấm phổ biến và thường có sẵn ở khắp mọi nơi và trên hầu như tất cả các
chất nền. Chúng phát triển các chất nền khác nhau: Thân cây mục, trong đất
vườn, phân hữu cơ nguồn gốc động vật khác nhau và thậm chí có thể
được thấy nấm phát triển trên cả thuỷ tinh. Về mặt phân bố địa lý hầu hết
các loài đều phân bố rộng khắp thế giới, tuy nhiên một số lồi có vùng phân
bố hạn chế [11]. Giống như hầu hết nấm hoại sinh, phát triển trên các chất hữu
cơ mục nát. Một số lồi hình thành mối quan hệ cộng sinh với rễ của thực vật có
hoa, sự cộng sinh này mang lại lợi ích cho cả hai lồi là nấm và thực vật có hoa.
Trong sự cộng sinh thì nấm Ectomycorrhizal đóng vai trị đa chức năng trong
q trình cộng sinh với thực vật bậc cao thuộc về hầu hết các Basidiomycetes,
4


trong số đó có loại nấm xâm nhập vào các mô rễ thực vật và không sản xuất hạt
carpophorus mà ta có thể nhận biết bằng mắt thường [12].
1.1.3. Dinh dưỡng và lối sống
Nấm là sinh vật mà khả năng tìm các nguồn chất hữu cơ rất cần thiết cho
sự sinh trưởng và phát triển của chúng rất cao. Điều này có nghĩa là nguồn dinh
dưỡng của nấm chính là từ động vật và thực vật, do đó tính chất của nấm được
hình thành phụ thuộc vào nguồn dinh dưỡng từ xác động thực vật và nấm có vai
trị là sinh vật hoại sinh (sinh vật sống trên các xác động thực vật), phụ thuộc

vào sinh vật sống cộng sinh (sinh vật sống chung với nhau đều có lợi) và sinh
vật sống hội sinh (sinh vật sống chung khơng có lợi cũng khơng có hại) hoặc ký
sinh trùng (sinh vật sống nhờ vào sinh vật chủ nhưng gây hại cho vật chủ) [9].
1.1.4. Phân loại vị trí
Việc phân loại nấm đã thay đổi rất nhiều trong những thập kỷ gần đây.
Tuy nhiên, theo “Dictionary of the Fungi” (từ điển Nấm) tái bản lần thứ bảy,
nấm được phân loại theo hai ngành: Ngành nấm nhày (Myxomycetes) cơ thể của
nấm là một khối chất ngun sinh chất khơng có vách ngăn bao bọc, kích thước
tới vài chục centimet, đơn bào, có một hoặc nhiều nhân (thể hợp bào), di chuyển
và nuốt thức ăn như động vật (amib). Ngành nấm thật (Mycota) là đại diện chính
của giới Nấm, có cấu tạo cơ thể dinh dưỡng là đơn bào (một nhân hay nhiều
nhân) hoặc đa bào, tế bào nấm có vách ngăn bao bọc như tế bào thực vật, đa số
có cấu tạo bởi chittin, nhiều tế bào nấm cịn tích trữ đường ở dạng glycogen
giống như động vật. Tuy nhiên, theo tái bản lần thứ chín của “Dictionary of the
Fungi” do sự đối chiếu về phân tử (như ARN ribosome 12S) đã vẽ được cây
phát sinh của nấm cho thấy thực tế nấm khơng là một nhóm monophyletic
(chung nguồn gốc) mà là polyphyletic (nhiều nguồn gốc khác nhau) nhưng do sự
tiến hóa hội tụ nên có những điểm tương đồng.
Do có những điểm tương đồng nguồn gốc polyphyletic, nấm thuộc về cả
ba giới khác nhau, như giới thực vật, giới động vật nguyên sinh và giới nấm.
Được coi đúng là nấm (theo phân chia nấm cũ) mà nay là một ngành của nấm,

5


được chia thành bốn nhánh (phyla) với những đặc điểm cụ thể, thể hiện trong
bảng 1.1.
Bảng 1.1. Phân loại các lồi nấm
Giới nấm (nấm).

Các tính năng.
Khơng có vách ngăn giữa nấm và sợi
nấm.
Chúng khơng có vách ngăn (đơn hợp

Phylum zigomycota (nấm hợp tử)

tử).
Sinh sản bào tử: Tiếp hợp hai giao tử
thành bào tử.
Ví dụ: Endomycorrhizae
Vách ngăn
Nhóm các loại nấm nhiều nhất và phức

Phylum ascomycota (nấm sắc - nấm túi

tạp nhất.

hay nang).

Sinh sản các bào tử trong nang.
Ví dụ: Nấm men.
Vách ngăn
Sinh sản bào tử đảm bên ngồi.

Phylum basidiomycota (nấm đảm).

Ví dụ: Ectomycorrhizae, Rovellons,
Boletus, Linh chi đỏ.
Không vách ngăn bào tử động

Phylum chytridiomycota (nấm roi nấm trứng).
1.1.5. Lớp nấm Basidiomycetes

Có một giai đoạn sinh dưỡng bao gồm các sợi nấm vĩ mô. Basidiomycetes
trải qua ba giai đoạn phát triển tương ứng với ba hình thức của sợi nấm: sợi nấm
dạng nhỏ, sợi nấm dạng vừa và sợi nấm lớn. Đầu tiên là các sợi nấm đơn bào có
vách ngăn phát triển sau khi nảy mầm từ một bào tử sinh sản được hình thành từ
sợi nấm trưởng thành và đơn bội. Các sợi nấm có nguồn gốc từ sợi nấm dạng
nhỏ. Các sợi nấm lớn sẽ xảy ra hình thức sinh sản hữu tính, sợi nấm trong các
cấu trúc như vậy được hình thành cấu trúc hình kẹp (xương mác) trong mỗi vách
6


ngăn, thơng qua đó duy trì tình trạng di chuyển hạt nhân dicariontica vách ngăn
khác [6].
1.1.6. Họ Polyporaceae
Có khoảng 25000 lồi Basidiomycetes trong đó 500 lồi thuộc
Polyporaceae phân biệt với những lồi khác có các “lỗ chân lơng”, bên ngồi
cứng mà chúng mọc trên gỗ mục nát tiêu biểu, hầu hết các loại nấm thuộc
Polyporaceae có thể được tìm thấy ngay cả trong thời tiết khô hoặc vào mùa
đông, một số lồi tìm thấy quanh năm và lồi Basidiocarps được tạo ra trong
thời gian ngắn [13].
1.2. Linh chi đỏ (Ganoderma lucidum).
Nấm Linh chi đỏ còn được gọi là nấm Reishi, thuộc chi đặc trưng bởi có
hệ thống từ chức sợi nấm đó cung cấp cho độ bền kết cấu, một số bào tử màu
nâu bất thường có hai vách và sự phân hủy gỗ gây ra màu trắng (do sự suy giảm
lignin). Cây mọc hoang trong rừng gần như tất cả các vĩ độ ấm của hành tinh, cả
châu Á và Mỹ và Amazon, vùng khí hậu cận nhiệt đới nhiều hơn trong ơn đới.
Tăng trưởng tự nhiên của nó diễn ra hàng năm ở thân cây đã chết hoặc bị hư

hỏng, đặc biệt là gỗ sồi, cây phong, cây du, cây liễu, hoa mộc lan, mận [13,14].

Hình 1.1. Linh chi đỏ
1.2.1. Hình thái học

7


- Mũ nấm (carpophorus): Dài 2-20 cm, lúc đầu thắt nút khơng đều, nhưng
đến khi trưởng thành ít nhiều mang một cấu trúc xác định (hình tai hoặc hình
quả thận), thường với một bề mặt thơ mịn, bóng và sáng, khi trưởng thành có
màu nâu hoặc màu vàng - đỏ với các vùng sáng trắng về phía bên lề, đơi khi có
màu hơi xanh. Độ dày có thể đạt tới 5 cm trong giai đoạn cuối của sự tăng
trưởng.
- Lớp mô mặt dưới mũ nấm (hymenium): Chiều sâu của ống 2 cm, bề mặt
lỗ có màu trắng, trở thành màu nâu sẫm khi trưởng thành, đường kính trong lỗ 47 mm (nhìn thấy bằng mắt thường).
- Cuống nấm (stipe): Thời gian đầu chưa có, sau phát triển thường phổ
biến với chiều dài khoảng 3-14 cm và bề dày đạt tới 3 cm, cùng màu với mũ
nấm, thường phát triển lệch về một bên.
- Bào tử nấm: Kích thước 7-13 x 5-9 μ; ít nhiều có hình elip, đơi khi với
một típ cắt ngắn; khi trưởng thành có thể thơ kệch [14,15].
1.2.2. Sự đa dạng các chất chuyển hóa nguồn gốc của nấm
Các chất chuyển hóa thứ cấp là đối tượng của nhiều đề tài nghiên cứu về
nấm, liên quan nhiều đến thành phần hợp chất hóa học của các sản phẩm từ tự
nhiên, dẫn đến sự cô lập của một loạt các hợp chất quan trọng có nguồn gốc từ
nấm mà có thể được phân loại theo bảng [6] (xem bảng 1.2).
a. Chất chuyển hóa thứ cấp mà khơng có sự can thiệp từ axetat (A).
b. Chất chuyển hóa thứ cấp có nguồn gốc từ các axit béo (B).
c. Polyketit một chất chuyển hóa thứ cấp từ vi khuẩn, nấm, thực vật và
động vật (C).

d. Tecpen và sterol (D).
e. Chất chuyển hóa thứ cấp có nguồn gốc từ sản phẩm trung gian của chu
kỳ axit tricacboxylic (E).
f. Chất chuyển hóa có nguồn gốc từ các axit amin (F).

Bảng 1.2. Đa dạng các chất chuyển hóa có nguồn gốc từ nấm
8


Phân
loại
A

B

Chất chuyển hóa

Nguồn gốc

Estroptomicin
Muscarin
Methyl salicicat
Gravillin B
Axit
4-(6-amino-9H-Purin-9-il)

D

Streptomyces sp
Amanita muscarine

Phổ biến ở nhiều loài
Chi Penicillium
Lentinus edolo

1
2
3
4

Aspergillus oryzae
Phổ biến ở nhiều loài
Pseudokoningii

propionic
Asperopterin
Axit 2-D-hidroxidecanoic
Tricodermen A1

C

Stt*

6
7

trichoderma
Streptomyces sp
Phổ biến ở nhiều loài
Grisseofulvun penicillium
Pyrenophora avenae

Chi Penicillium
Chi Penicillium
Chi Penicillium
Chi Penicillium
Monosporium bonorde
Steotomyces aureofacines
Cronartium fusiliforme
Cronartium fusiliforme
Giới Helminthosporium
Fusarium poae
Stereum hirsutum
Palmivorus sp.
Clitocybe illudens
Sydowi Aspergillus
Fusarum moniliforme
Cyathus striatus
Cochliobolus miyabeus
Paspali claviceps
Phổ biến ở nhiều loài
Phổ biến ở nhiều loài
Cereviceae saccharomyces
Applanatum sp.
Cyathus helenae
Phellinus torulosus
Phellinus pomaceus
Nlakesleanus phycomyces

Brefaldina A
Griseofulvin
Axit orcelinic

Pirenoforin
Axit puberlonic
Purpurogenon
Tetrahidrocatenarin
Axit fulvic
Monordemo
Metilantron
α-pinen
Limonen
Longifolen
Axit phức tạp
Axit esterpuric
Isopentasol
Torreyol
Axit sidon
Axit gibberellic
Estriantin A
Ofiobolin A
Paspalacin
Ergosterol
Cerevisterol
Parkeol
Friedelin
Glachidon
Axit natalic
Pomaceron
β-caroten
9

5

8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36

37
38


E
F

Axit roccellaric
Heveadrida
Dicetopiperacin
L-glycine)
Dicetopiperacin

Roccellaria mollis
Heveae helminthosporium
cyclo-(L-prolyl- Fasarium oxysporum
cyclo-(L- Phytophthora cinnamomi

isoleusil-L-valine)
Dicetopiperacin cyclo-(L-tyrosyl- Pestalotia palmarum
L-proline)
Macrofominol
Axit 6-amino penicillinic

Macrophomia phaseolina
Penicillium chrysogenum
Acremoniun

Dicacetoxi-cephalosporin C

cephalosporium

39
40
41
42
43
44
45
46

*Các cấu trúc được liệt kê trong Phụ lục 2

1.3. Thành phần hóa học của một số loài nấm
Nghiên cứu tiến hành ở các loài khác nhau cho thấy chất chuyển hóa thứ
cấp của nấm linh chi nhận quan tâm nhiều nhất, bởi vì họ vấn tiếp tục xác định
cấu trúc mới, phù hợp với hợp chất có nguồn gốc từ nhân tế bào là các dẫn xuất
của ergostan (47) và lanostan (48) (chủ yếu là sterol và axit lanostanic) [11].

47

48

1.3.1. Các sterol
Các sterol có nhiều nhất trong các loại nấm là ergosta-5,7,22-trien-3-β-ol
(ergosterol-49) chiếm khoảng 0,3-0,4% trong G. Lucidum, ergosta-7,22-dien-3-

10

β-ol (dihidroergosterol-50), thêm vào đó là những ergosta-7-en-3-β-ol (51),
ergosta-5,7,9(11),22-tetra-3-β-ol (52) và peroxide ergosteril (53) [17].

HO

HO

49

50

HO

HO

51

52

O

O

HO

53
Các ergosterol tìm thấy rất nhiều trong một số loài nấm ăn được và được
chuyển thành vitamin D2 bởi các phản ứng quang hóa bằng cách sử dụng bức xạ
tia cực tím, cũng là nguyên liệu để tổng hợp phân tử sinh học quan tâm như hố
chất nơng nghiệp brassinoesterol, ecdyson và sterol oxy hóa cao [17].

11


Khi chiếu xạ với ánh sáng cực tím ergosterol tạo ra một preergocalciferol
thơng qua việc mở vịng, và sau đó thông qua một phản ứng nhiệt được chuyển
thành vitamin D2 (ergocalciferol). Chỉ có 50% ergosterol được chuyển kể từ khi
chúng xảy ra photoreactions thứ cấp gây ra bởi sự kích thích của trien, đó là
những phản ứng ngược lại tạo vịng của lumisterol [6].
C9H17

Hν
H
HO

Hν

Ergosterol

C9H17

Precalciferol

Chuyển vị
C9H17
CH3

CH
CH3 9 17

H

HO

Luministerol
Vitamin D2
Ergcalciferol

Hình 1.2. Ergosterol chuyển đổi vitamin D2.
1.3.2. Nguồn gốc phát sinh của ergosterol
Các sterol là có nguồn gốc Biogenetically của các axetyl (nguồn từ axetat)
thông qua mevalonat và squalene. Các ergosterol là chất tiền thân trực tiếp của
lanosterol, theo cách thức tương tự có nguồn gốc từ tritecpenoit. Sterol tham gia
vào các quá trình của sinh tổng hợp như metyl hóa của carbon 24, đề metyl
cacbon 4 và 14, như khử hóa và hiđro hóa [18,19].

12


OPO3H2
OPO2H
CH2
Axetyl-CoA
Difosfat de farnesil (DFF)
(DFF)

Preescualen
NADPH
NADP

Escualen
Escualen epoxidas

O
2 - 3 - epoxiescualen
2 -3- oxidolanosteroeidasa

HO

Ergosterol

HO
Lanosterol

Hình 1.3. Sinh tổng hợp của ergosterol
1.3.3. Lanostanoit tritecpenoit
Có khoảng 130 tritecpenoit loại lanostanoit oxy hóa cao đã được phân lập
từ sợi nấm và bào tử chủ yếu là của G. lucidum và các G. aplanatum, trong các
axit là ganoderic A, B, C, D, E, F, H, I, J, Md, Me, Mf, N, OP, Q, R, ST, U, V,
13


W, X, Y , Z; axit ganoderenic A, B, C, D; axit ganolucidic A, B, C, E; axit
lucidenic A, B, C, D, E, F; ganoderiol A, B, C, D, E, F, G, H, I; ganoderol A, B,
ganodermatriol, ganodermanontriol; hợp chất B8, B9, C5, C6; metyl ganoderat
M, N, O; metyl lucidenat H, I J, K, L, M, epoxyganoderiol A, B, C; ganoderal A
và B, axit ganoderma Ja, JB, P1, P2, R, T-N, T-O, T-Q, trong số các hợp chất
khác [20,21].
Gần đây, các nghiên cứu tập trung chủ yếu vào Ganoderma lucidum
[22,23], nổi tiếng tại Hàn Quốc, Nhật Bản, Trung Quốc và khu vực Đông Á
khác, nơi mà y học tự nhiên được sử dụng để điều trị các bệnh như ung thư,
viêm gan, viêm phế quản mãn tính, hen suyễn, bệnh trĩ và triệu chứng của mệt

mỏi [24]. Bên cạnh đó cung cấp một số lượng lớn các hợp chất, ngày nay vẫn
tiếp tục cơ lập các chất chuyển hóa có hoạt tính dược lý mới đã được cơng bố
gần đây [25,26]. Vì vậy, trong những năm gần đây trong nhiều lồi nấm thì G.
tsugae và G. australae đã nhận được sự quan tâm hơn cả của nhiều người.
Trong số các hợp chất mới được phân lập từ các bộ phận khác nhau của
G. lucidum là:
Các

axit

20(21)-dehidrolucidenic

A

(54)

và

metyl

20(21)-

dehidrolucidenat A (55) và axit hidroxilucidenic 20-D2 (56), F (57), E2 (58), N
(59), P (60) phân lập từ cơ quan quả thể bởi Toshihiro Akihisa và các cộng sự
[27].

COOH

H2C

CH3

CH3
O

O

CH3

CH3
CH3

O
H3C

COOCH 3

H2C

H
CH3

OH

CH3

O
O
H3C

54

H
CH3

O

OH

55

14


HO
OAcH3C
CH3

COOH

H3C
O

CH3

CH3
CH3

H3C

H
CH3

CH3

O
O

O

H
CH3

H3C

57

HO
OAcH3C
CH3

COOH

OH

H3C

COOH

CH3

O

O

CH3

CH3
CH3

H3C

O

O

56

HO

COOH

CH3

O

O

HO

CH3

O
HO

O

H
CH3

H
CH3

H3C

O

O

58

59

OAcH3C
CH3

OH

COOH

O
CH3
CH3
HO
H3C

O

OH

H
CH3

60
Các hợp chất khác là axit lucidenic N (61) và các metyl lucidenat F (62)
phân lập từ cơ quan quả thể bởi Tian-Shung Wu và các cộng sự [28].

15


O
H3C

H3C

OH

CH3

O

O

O

CH3

CH3
CH3

HO

CH3

O

OH
H3C

OCH 3

CH3

O

CH3

O

O

H3C

CH3

61

62

Ba tritecpenoit loại lanostan với một nhóm andehit gọi là lucialdehit A
(63), B (64) và C (65) phân lập từ quả thể bởi Giang-Cao Jing và các cộng sự
[29].
H3C

CHO

H3C

CH3

CHO

CH3
CH3

CH3

CH3

CH3
CH3

CH3

HO

O
H3C

CH3

O
H3C

CH3

63

64
H3C

CHO

CH3
CH3
CH3
CH3
HO

O
H3C

CH3

65
Ngoài ra có tới sáu loại tritecpenoit lanostan oxy hóa cao, được gọi là axit
ganoderic γ (66), δ (67), ε (68), ζ (69), η (70) và θ (71) phân lập từ các bào tử
bởi Min Byung-sun và các cộng sự [30].

16


H3C

H3C

COOH

CH3

O

OH

OH

CH3
HO

CH3

OH
O

O

CH3

67

H3C

H3C

COOH

CH3

O

OH

CH3

COOH

CH3

O

OH

CH3
HO

CH3

O
HO

OH

CH3

68

HO

69

H3C

COOH

CH3
OH

O

CH3

H3C
OH
CH3

COOH

OH

CH3

CH3

CH3
CH3

CH3

OH
HO

OH
H3C

O

O
H3C

CH3

HO

CH3

CH3

CH3

O

OH

OH
H3C

CH3

66

H3C

CH3

CH3

CH3

H3C

CH3

O

CH3

COOH

O
H3C

CH3

O

CH3

70

71

Từ loài nấm G. concinna, Antonio G. Gonzalez và cộng sự phân lập 5αlanosta-7,9(11),24-trien-3β-hidroxi-26-al (72), 5α-lanosta-7,9(11),24-trien-15α26-dihidroxi-3-on (73), và 8α,9α-epoxi-4,4,14α-trimetyl-3,7,11,15,20-pentoxit5α-pregnan (74) [7].
H3C

COH

H3C

CH3

CH 2COH

CH3
CH3

CH3

CH3

CH3
CH3

HO

CH3

OH

O
H3C

CH3

H3C

72

CH3

73
17

O

CH3

CH3

O
CH3

O
CH3

O

O

O
H3C

CH3

74
Từ quả thể của loài Hoàng chi (G. Golossum), Peter Kleinwachter và cộng
sự phân lập sáu tritecpenoit mới, colosolacton B (75), C (76), D (77), E (78), F
(79) và G (80) [31].
CH3

O

H3C

O

O

O

HO

H

75
CH3

O

H3C

O

CH3

O

O

O

O

OH
O
H3C

H
CH3

H
CH3
O

76

O
CH3

77

18

O


CH3

O

CH3

O

O

O

HO

O
H
CH3

CH3

O
OH
CH3

O

O

O

O

O

O

CH3

CH3

CH3

78

79
CH3

O

O
OH
CH3
O

O

CH3
O

O
CH3

80
Từ loài nấm G. tsugae, Chun-Nan Lin và các cộng sự đã phân lập hai
lanostenoit mới, axit 3α-axetoxy-5α-lanosta-8,24-dien-21-oic (81) và axit 3oxo-5α-lanosta-8,24-dien-21-oic (82) [32].

CH3
HOOC

CH3

HOOC

CH3

CH2

CH3
CH3

CH3

CH3

CH3
CH3

AcO

OH
CH3

AcO
H3C

CH3

H3C

81

CH3

82

19


Trong cùng loại nấm, Kim-Hong Gan và cộng sự tách ra một lanostenoit
mới dạng của este glucosit, axit 3α-axetoxy-5α-lanosta-8,24-dien-21-oic este βD-glucosit (83) [33].
RCOO

CH3

CH3
CH3
CH3
CH3
AcO
H3C

H
CH3

R = β-D-glucosil. 83
1.4. Tác dụng dược lý

Các loài nấm thuộc chi Linh chi được sử dụng từ lâu trong y học cổ
truyền Trung Quốc, trong những năm gần đây được nghiên cứu tác dụng dược lý
của chúng trên các bệnh nhân viêm gan, tăng đường huyết, viêm phế quản mãn
tính, ung thư, tăng huyết áp, tăng cholesterol máu và bệnh bạch cầu đã thu được
kết quả đầy hứa hẹn [35].
Các hợp chất hóa học với tính chất hoạt tính sinh học cao hơn là
tritecpenoit và polysaccarit. Các polysaccarit có trong hầu hết các loại nấm và
cũng là thành phần chính của thành tế bào, tuy nhiên, các tritecpenoit đặc biệt
tìm thấy trong nấm linh chi và đã phân lập được chủ yếu là axit ganoderic, các
axit ganoderiol và axit lucidenic. Được tìm thấy nhiều nhất là axit ganoderic
[36].
Các hợp chất khác nhau cho thấy sự khác nhau về hoạt tính sinh học, ví
dụ như: chống HIV-1 (ganoderiol F và ganodermanontriol), giảm cholesterol
(axit ganoderic B và C) [37], kháng histamin (axit ganoderic C 1 và C2), các hoạt
chất chống HIV-1 proteas (lucidumol B và ganodermanontriol) [38], tác dụng
gây độc tế bào chống lại meth-A (sarcoma) (ganodermanondiol và lucidunol A
và B) [39], ung thư phổi của Lewis (LLC) (lucidunoles A và B axit ganoderic θ)
[40], T-47D (ung thư vú) (ganodermanondiol) [41], còn được gọi là sự ức chế vi
20


khuẩn cariogenic streptococcus mutans của glucosiltransfersa ( axit ganoderic
S1 và C) [42].
1.4.1. Polysaccarit kháng u
Các phần nhỏ của polysaccarit trong nấm chứa β-D-glucan (84) với dư
lượng heterosacarit như xylozơ, galactozơ, mannozơ axit gluconic và các loại
đường khác, cũng như glycopeptit hoặc glycoprotein [43]. Phần lớn các β-Dglucan cho thấy tính chất kháng u là β-(1→3)-D-glucopyranozơ với trọng lượng
phân tử từ 500.000 đồng đến 2.000.000 và phân nhánh β-(1→ 6)-D-glucozyl.
Các mức độ hoạt động liên quan chặt chẽ đến khối lượng phân tử, sự phân
nhánh và khả năng hòa tan trong nước (khối lượng phân tử lớn, ít phân nhánh,

khả năng hịa tan trong nước tốt thì khả năng hoạt động cao) [44].
Ngoài ra polysaccarit tăng cường sản xuất và đời sống của tế bào lympho
CD4 trợ giúp, mà bị phá hủy khi xâm nhập do virus và phối hợp trong việc giảm
cường độ của các triệu chứng, cả trong nhiễm virus chẳng hạn như những sản
xuất bởi vi rút AIDS (HIV) [43].

OH
O

HO

O
HO

OH

OH
O

HO
HO

OH

O
O

OH

OH

HO
OH

O

HO
O

O

HO
O

OH

OH

OH

OH

O

HO
O

O

HO

O

OH

OH

OH

m
n

β-D-glucan [(1-6)-D-glucozyl nhánh β-(1-3)-D-glucopyranozơ] (84)
1.4.2. Kháng khuẩn chất chuyển hóa
Theo đánh giá về hoạt động sinh học gần đây của khoảng 200 loài nấm,
hơn 75% cho thấy hoạt động kháng khuẩn mạnh [45]. Hoạt động này không chỉ
liên quan đến chất chuyển hóa phân tử nhỏ (như sterol, tritecpenoit, ... ) mà cả
với những polysaccarit khối lượng lớn có trong thành tế bào.

21


Việc tìm kiếm các hợp chất kháng khuẩn có nguồn gốc từ Basidiomycetes,
mà con người chia sẻ các nghiên cứu về mầm bệnh vi khuẩn như Escherichia
coli (vi khuẩn đại tràng), Staphylococcus aureus (tụ cầu khuẩn hay tụ cầu vàng)
và Pseudomonas areuginosa (trực khuẩn mủ xanh) do đó có kết quả cao từ khả
năng tự vệ của các loài nấm được sử dụng để chống lại vi sinh vật [46].
Ví dụ: hai hợp chất ganomycin A (85) và ganomycin B (86), phân lập từ
một loại nấm châu Âu G. pfeifferi cho thấy ức chế sự tăng trưởng vừa phải
chống lại sự sống của vi khuẩn gram dương và B. subtilis (trực khuẩn vi khuẩn),
S. aureus (tụ cầu vàng) và Micrococcus flavus. Ngoài các loại nấm này đã thu

được trên ganodermadiol (87), lucidadiol (88), và axit applanoxidic (89) có hoạt
tính kháng khuẩn chống lại loại virut cúm A [47].
OH

HO

R
COOH

85 R= OH
86 R = H
H3C

H3C

CH 2OH

CH 2OH

CH3

CH3

CH3

CH3
CH3

CH3

CH3

CH3
HO

HO
H3C

O
H3C

CH3

CH3

87

88
OH

H3C
O

CH3

O

CH3
O

CH3

O
H3C

CH3

89
22

CH 2OH

OH

CH3


Linh chi G. applanatum, có sterol như 5α-ergost-7-en-3β-ol (49); 5αergost-7,22-dien-3-β-ol(50); 5,8-epidioxy-5α,8α-ergost-6,22-dien-3β-ol (53),
lanostenoit (90) mới với các hoạt tính chống lại vi khuẩn gram dương [48].
COOH
CH3

HO

CH3

O
CH3

O

OH

CH3
H
HO

H

O

O
H3C

CH3

90
1.4.3. Chất chuyển hóa có đặc tính chống oxy hóa
Oxy hóa có liên quan với tăng nguy cơ bệnh thối hóa như bệnh tim mạch
và ung thư, rất nhiều bài báo đã được ghi nhận rộng rãi rằng các loài nấm (G.
lucidum, G. tsugae, G. aplanatum) có nhiều lợi ích cho các động vật và ảnh
hưởng sức khỏe con người bảo vệ gan, chống ung thư và tim mạch [49]. Vì vậy
các hoạt tính chống oxy hóa của chất chiết xuất từ các loại nấm là tương quan
với sự hiện diện của triterpenoit polysaccarit-protein phức tạp, và polysaccarit
[50].
Các chất chống oxy hóa được phân lập từ họ Polipoaraceae là các sterin
A (91) và sterin B (92) từ các quả thể của Stereum hirsutum [51].

CH3

HO

O

O
H

O

CH3

H3C
HOC

OH

H

H

H
OH

OH

OH

91

92

23

CH3


Hai chất ức chế của lipit peroxy, betulin A (93) và betulin B (94), được
phân lập từ các chiết xuất metanol của Lenzites betulina [52].

O

O

H3CO

O

OCH 3

OCH 3

O

O

93

94

1.5. Nấm linh chi đen

Tên thường gọi: Nấm linh chi đen
Tên khoa học: Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang
Họ: Ganodermaceae
1.5.1. Mơ tả
Nấm hóa gỗ, sống một năm hay lâu năm. Thể quả có mũ dạng thận, trịn
hoặc dạng quạt, dày, đường kính 3-10cm, cuống dài đính lệch, hình trụ trịn hay
dẹt, có khi phân nhánh; mặt trên mũ có những vịng đồng tâm, mép lượn sóng.
Bào tử hình bầu dục hoặc hình trứng, cụt đầu, mầu gỉ sắt, có một mấu lồi và
nhiều gai nhọn. Toàn cây nấm mầu nâu đỏ, đỏ vàng hoặc nâu đen.

Hình 1.4. Ảnh nấm linh chi đen
Nấm mọc hoang dại ở nước ta, Triều tiên, Trung Quốc và nhiều nước
khác.
24


1.5.2 Thành phần hoá học
- Những hợp chất đa đường (45% số lượng): beta-D-glucane,
arabinogalactane; ganoderane A, B va C;
- Triterpen: các axit ganoderic A, B, C, D, F, H, K, M, R, S, và Y, các axit
lucidenic A, B, C, D, E, F, G…, các lucidon A, B, C, các axit ganolucidic A, B,
C, D và E, ganoderal A, các ganoderiol A, B, C, D, E, F, G, H, I, các ganoderol
A và B, ganodermanonol, ganodermatriol...
- Ganodermadiol, phân sinh của axit lanostaoic.
- Esteroid: Ganodosterone.
- Axit béo: các axit tetracosanoic, stearic, palmitic, nonadecanoic,
behenic.
- Khoáng chất: germanium, calcium, K, Fe, Mg, Mn, Zn, Ca, Be, Cu, Ag,
Al, Na...
Những chất khác: manitole, trechalose, adenine, uracine, lysine, axit

stearic, tất cả rất nhiều axit amin.
1.5.3. Hoạt tính và sử dụng
- Có tác dụng tư bổ cường tráng. Germanium giúp khí huyết lưu thơng,
làm tăng sức cho tế bào hấp thụ oxy tốt hơn. Lượng polysaccharid cao có trong
Linh chi làm tăng sự miễn dịch của cơ thể, làm mạnh gân, cô lập và diệt các tế
bào ung thư. Axit ganodermic có tác dụng chống dị ứng và chống viêm.
Theo những tài liệu cổ như Bản thảo cương mục (của Lý Thời Trân),
Thần nông bản thảo, Trung dược học... Linh chi đã được xếp vào loại Thượng
đẳng dược. Các loại Linh chi đều có tính chất bổ ích khí huyết, bồi dưỡng ngũ
tạng suy nhược hư lao, ích trí, dưỡng tâm, an thần, bình suyễn, tăng trí tuệ, dùng
trị các bệnh thuộc ngũ tạng, lục phủ, cơ nhục, xương khớp..., dùng lâu sẽ được
“diên niên ích thọ”, thân thể nhẹ nhàng, tinh thần hoà lạc, sảng khối.
Linh chi bình hồ vơ độc, nên dùng một thời gian dài liên tục mới thấy hiệu quả
rõ rệt. Theo những nghiên cứu gần đây trên thế giới, linh chi có những đặc tính
chung sau đây :
- Cải thiện sự hấp thu chuyển hoá trong dinh dưỡng
25