HOẠT ĐỘNG NGĂN NGỪA VÀ CHỐNG VIÊM CỦA VỎ RỄ CÂY DÂU TẰM TRẮNG

Báo Cáo
HOẠT ĐỘNG NGĂN NGỪA VÀ
CHỐNG VIÊM CỦA VỎ RỄ CÂY
DÂU TẰM TRẮNG

Sinh viên thực hiện:

Khoa Công Nghê- Đại Học Cần Thơ

Cán bộ hướng dẫn:
Huỳnh Liên Hương


Tổng Quan
• Viêm tụy là tình trạng đặc trưng viêm rất nặng
trong tuyến tụy, khơng có thuốc đặc trị, ngoại
trừ các loại thuốc hỗ trợ.
• Nghiêm cứu hiện tại đánh giá tác dụng bảo vệ
tụy của chiết xuất vỏ rễ cây dâu tằm trắng
bằng cách sử dụng cồn và mô hình gây ra bởi
Cerulein của viêm tụy.
• Nghiêm cứu cũng điều tra hồ sơ hóa thực vật
thơng qua GC-MS và HPLC.


Tổng Quan
• Chiết xuất methanolic của chiết xuất vỏ rễ dâu tằm
trắng (MEMARB) đã được nghiêm cứu GC-MS và
HPLC.
• Chuột bạch Wistar đực được sử dụng ethanol
(0%-36%) và cerulean (20mg/Kg) với có và khơng

có MEMARB.
• Serum Lipase, amylase, caspase-1, sản phẩm của
lipid peroxidation,glutathione và enzyme chống oxi
hóa đã được xác định, các thay đổi mô học trong
tuyến tụy cũng đã được đánh giá.


Tổng Quan
• Cudraflavone B trong MEMARB đã được định
lượng bởi HPLC là phát hiện được 1 lượng
đáng kể. Sự gia tăng rõ rệt nồng độ Serum
amylase, lipase, caspase-1, IL-18, IL-1 đã được
quan sát ở chuột được sử dụng Ethanol,
cerulean hơn so với chuột dùng MEMARB. Kiểm
tra mô cho thấy MEMARB làm giảm đáng kể
những thay đổi về viêm và xơ.
=> Kết quả cho thấy tác dụng bảo vệ tụy mạnh
mẽ của chiết xuất vỏ rễ cây dâu tằm trắng và
chống viêm bao gồm Cudraflavone B.


1

• Giới Thiệu

2

• Vật Liệu Và Phương Pháp

3

• Kết Quả

4

• Thảo Luận

5

• Kết Luận


1. Giới Thiệu:


1. Giới Thiệu:
• Tình trạng viêm dai dẳng khơng thế phục hồi và
xơ hóa của tụy là viêm tụy mãn tính (Chronic
Pancreatitit-CP), 50/100.000 người.
=> Các chịu chứng bao gồm đau bụng,
thường xuyên viêm tụy cấp suy giảm
chức năng ngoại tiết và nội tiết.
• Lạm dụng rượu gây ra 70% CP trong khi hút
thuốc, đột biến gen, cường tuyến cận giáp và tự
miễn dịch là những nguyên nhân khác.


1. Giới Thiệu
• Viêm tụy cấp là tình trạng viêm của tuyến tụy
cấp tính dẫn đến tổn thương tế bào nang

tuyến do sự tiêu hủy của các men tụy, từ mức
độ nhẹ đến nặng và có thể dẫn đến tử vong.
• 5% bệnh nhân CP,40-50% bệnh nhân viêm tụy
cấp di truyền phát triển thành ung thư tuyến tụy
gây tử vong cao.


1. Giới Thiệu
• Các biện pháp hỗ trợ như nhập viện, hồi sức
tích cực, cho đường ruột nghỉ ngơi và truyền
dinh dưỡng qua đường tiêu hóa, bổ sung
enzyme và kiếm sốt cơn đau thơng qua thuốc
chống viêm khơng Steroid (NSAID).
=> Ngay cả viêm tụy mãn tính và cấp tính, các tế
bào tuyến tụy bị tổn thương và chết là nguyên
nhân chính gây viêm và yếu tố khởi đầu của hoại
tử và hyroptosis, yếu tố quyết định chính mức độ
nghiêm trọng của bệnh.


1. Giới Thiệu
Tế bào
Acinar

Xây dựng phản
ứng miễn dịch

Tiết ra cytokine (TNF-a, IL-1b, IL-6 và
IL-10), chemokine (MCP-1)

Tổn thương nội
sinh các mơ
hình phân tử
liên quan
(DAMPs)

- Viêm nhiễm NLRP3 là một bẩm sinh nội bào
đa protein cảm biến miễn dịch: NLRP3, sự liên
kết tế bào chết giống như đốm protein, và
procaspase-1.


1. Giới Thiệu
• Nó tập hợp để đáp ứng với các kích thích đa
dạng và tạo thành giá đỡ cho việc kích hoạt các
tiền viêm cytokine IL-1beta và IL-18 và gây ra sự
giải phóng HMGB1 biểu hiện quan trọng trong
viêm tụy, tổn thương tế bào nhu mơ và giải
quyết bệnh.
• Các tiền viêm cytokine IL-1 beta và IL-18 là tác
nhân gây ra bệnh pyroptosis, một dạng chết tế
bào có tính ly giải cao, dường như chủ yếu
trong viêm tụy.


1. Giới Thiệu

• Trước mối đe dọa từ các trường hợp viêm tụy
gia tăng và khơng có thuốc được cấp phép cụ
thể, các nguyên nhân gây viêm đã được giám

sát kỹ lưỡng để tìm mục tiêu phù hợp cho các
phân tử thuốc kháng viêm có tiềm năng.


Đã được thử nghiệm
Thalidomide

Nhắm mục tiêu TNF-alpha

Panhaematin

Giảm sự thâm nhập của bạch cầu

Montelukast

Đối kháng IL-R

Chất ức chế MCP 1

Ức chế MCP 1

Vitamin K3

Ức chế quá trình tự hấp thụ

Quercetin

Chống viêm

Resveratrol

Chống viêm

Curcumin

Chống Viêm

Chất ức chế COX - 2
flavocoxid

Ức chế COX - 2 flavocoxid


1. Giới Thiệu
Flavon

Alkaloid

Slibene
Flavanones

Phân tích hóa
chất thực vật
Dẫn xuất
Coumarin và
Terpenoit

Benzophenones

Flavonoid

Prenyl Falvonoid được ghi nhận với các hiệu ứng
sinh học cao do chuỗi prenyl


1. Giới Thiệu

Giảm đau
Kháng khuẩn

Chống viêm

Bảo vệ thần kinh

Hoạt Tính Sinh
Học

Hạ đường huyết

Chống Oxy hóa
Kháng Virut
Bảo vệ thận

Chống nhiễm trùng


1. Giới Thiệu
Đánh giá liệu pháp hiệu quả của các
chất dinh dưỡng của rễ cây dâu tằm
trắng đặc biệt

Mục đích

Tham chiếu đến ảnh hưởng của
chúng đến mức độ sản xuất
cytokine
Tác động của chúng đối với tổn
thương tế bào acinar được theo dõi
về mặt serum và các enzym đánh
dấu tuyến tụy và chất chống oxy
hóa tế bào.


2. Vật Liệu và Phương Pháp
-Hóa Chất
-Tiêu

chuẩn tham chiếu cho HPLC - axit gallic,
galangin, rutin, quercetin và thymoquinone
-Dung môi cấp HPLC.
-Bộ ELISA cho IL-Ib và bộ kit Invitrogen ELISA cho
IL-18.
-Bộ dụng cụ xét nghiệm Lipase và alpha-amylase
đã mua từ Coral Clinical Systems, Goa, Ấn Độ.
-Tất cả các hóa chất khác được sử dụng là loại
phân tích.


2. Vật Liệu Và Phương Pháp:
-Thu thập, xác định và khai thác vật liệu thực

vật


2. Vật Liệu và Phương Pháp:
Rễ cây dâu tằm trắng tươi được thu thập từ
Khoa khoa học Thực vật, Đại học Madras
Vỏ rễ cây dâu
tằm trắng
Một trang trại dâu tằm tư nhân ở Purisai
Rửa,
Rễ

làm khô

Cạo nhẹ để lộ
lớp màu vàng

Dùng dao

Bong vỏ
rễ

Cắt thành
miếng

Tán thành
bột trong
máy xay
Rây

Bột

Làm khô
Chiết cặn lại Lọc
trong khơng bằng Metanol
khí

Sàng

Bảo quản thùng
kín 4oC

Khuấy trong
máy lắc 24h

Ngâm trong
Metanol

Bột mịn đồng
nhất

Thí nghiệm trên động vật, hỗn hợp
bột đồng nhất + 0,1% DMSO


2. Vật Liệu và Phương Pháp:
Động Vật
175-200gram

Nuôi trong điều

kiện vệ sinh,
22-24oC, 12h
sáng/12h tối

Đực, trường
thành, 7-8 tuần
tuổi

Nước uống, thức ăn
viên cho chuột đạt
tiêu chuẩn


-Sàng lọc sơ bộ hóa học thực vật bằng GC-MS.
=> Chiết xuất methanolic của vỏ rễ cây dâu tằm trắng
(M.alba) đã được phân tích GC-MS.
=> Phân tích được thực hiện trên máy sắc ký khí Agilent
6890N với cột HP-5ms được kết hợp với máy khối phổ
JEOL GC-MATE II ở chế độ ion hóa điện tử (EI) với điện áp
ion hóa được đặt thành 70eV.
=> Phạm vi quét phổ khối của máy phân tích khối lượng
được đặt thành 50-600 AMU. Heli được sử dụng làm khí
mang với lưu lượng khơng đổi 1 mL / phút. Nhiệt độ đầu vào
phía trước là 220 C.


=>Lị GC được thiết lập cho cấu hình nhiệt độ
sau: tốc độ tăng từ 50C-250oC ở 10oC / phút.
Cơ sở dữ liệu khối phổ GC-MS của NIST (Viện
Tiêu chuẩn và Cơng nghệ Quốc gia) được sử

dụng để giải thích khối phổ bằng thời gian lưu.


HPLC để xác định flavonoid và định lượng
Cudraflavone B

Mẫu+Metanol

Cân chính xác
Pha loãng

Nồng độ cụ
thể
1:1 (20mL)

Bột rễ cây
+Metanol:
H2O:HCl

Hồi lưu
135p

Thủy phân glycosid
flavonoid và thành phần
được tạo thành bằng
metanol

Phân tích HPLC

• Được chạy trên cột C18 (kích thước lỗ 100 Å, 3,5 mm, 4,6 mm 250
mm)
• Thời gian chạy 40 phút.
• Pha động được sử dụng là hỗn hợp metanol, nước và axit
photphoric được trộn theo tỷ lệ (100: 100: 1).
• Q trình rửa giải là đẳng cấp với tốc độ dịng được đặt ở 1,5 mL /
phút.
• Các flavonoid được theo dõi bằng máy dị tia cực tím đặt ở bước
sóng 270 nm.
• Hệ thống dữ liệu EZChrom được sử dụng để thu thập, xử lý dữ liệu
và tạo báo cáo. Các sắc đồ thu được, được ghi lại và các khu vực
dưới các đỉnh chính được đo.
• Flavonoid được xác định bằng cách phù hợp với thời gian lưu và
các đặc điểm phổ của chúng so với các đặc điểm của chất chuẩn.


2. Vật Liệu và Phương Pháp:
N1: Chế độ ăn bình thường trong 5 tuần

Viêm tụy mãn tính do ethanol và cerulein:

N2: được uống chế độ ăn bình thường và
MEMARB (300 mg/kg thể trọng/ ngày)
trong 3 tuần cuối của giai đoạn thí nghiệm

N3: nhận chế độ ăn kiêng có chứa ethanol
và 20mg/kg thể trọng của cerulein trong
phúc mạc trong 3 tuần qua.
N4: nhận được chế độ ăn kiêng có chứa
ethanol, 20 mg/kg thể trọng của cerulein

trong bụng và MEMARB (300 mg / kg thể
trọng) bằng đường uống, trong 3 tuần
qua.

Chuột nhịn ăn qua đêm và
gây mê bằng cách tiêm vào
cơ ketamine hydrochloride
[30 mg / kg thể trọng] và bị
giết. bằng cách chặt đầu.
Máu được thu thập và
huyết thanh đã tách được
lưu trữ thích hợp cho đến
khi phân tích thêm.