Bài thuyết trình kháng thể tái tổ hợp, phương thức sản xuất và ứng dụng

KHÁNG THỂ TÁI
TỔ HỢP, PHƯƠNG
THỨC SẢN XUẤT
VÀ ỨNG DỤNG
GV hướng dẫn: PGS.TS Trương Quốc Phong


THÀNH
VIÊN
Trần Thị Thảo Anh
Lê Hoàng Hưng
Nguyễn Xuân Lương
Phạm Thị Minh Phương
Nguyễn Ngọc Tân
Trần Minh Thao
Trương Phúc Thịnh

20190306
20190340
20190351
20190373
20190380
20190382
20190386


01

02

GIỚI THIỆU

CHUNG

ƯU ĐIỂM

03

04

PHƯƠNG
THỨC SẢN
XUẤT

ỨNG DỤNG


0
1

GIỚI
THIỆU
CHUNG


1. KHÁI NIỆM.
Kháng thể tái tổ hợp (Ricombinant
Antibodies) là loại kháng thể được
tạo ra trong phịng thí nghiệm, sử
dụng cơng nghệ ADN tái tổ hợp,
tách biệt hoàn toàn với sự kiểm soát
của hệ miễn dịch.

2. ĐẶC
ĐIỂM.

Các kháng thể tái tổ hợp có thể có các định dạng khác nhau, bao gồm: các globulin
miễn dịch có chiều dài đầy đủ (Ig), các đoạn kháng thể đơn hóa trị như biến đoạn
chuỗi đơn (scFv) và liên kết kháng nguyên đoạn (Fab), và các định dạng đa phân tử
như các thể tiểu đường (dimeric scFv) hoặc triabodies (scFvs trimeric).


3. CẤU TRÚC KHÁNG
THỂ.
● Vùng bám bổ thể
● Hai chuỗi nặng giống nhau
●

Hai chuỗi nhẹ giống nhau

●

Mỗi chuỗi có 1 vùng biến đổi và
1 vùng không biến đổi

●

Vùng siêu biến

●

Vùng bản lề

● Khi được cắt bởi 2 mảnh Papain sẽ
tạo ra ra 2 mảnh: mảnh bám kháng
nguyên (Fab) và mảnh không biến đổi
● Cầu disulfide
● Carbonhydrate


0
2

ƯU
ĐIỂM


01

Cần ít lượng kháng nguyên tinh sạch để sản xuất
hơn so với mAbs.

02

Hạn chế khả năng đặc hiệu của kháng thể đơn dịng.

03

Có thể được tổng hợp dựa vào bất kỳ kháng nguyên
nào, bao gồm: kháng nguyên người và có độ bảo
tồn cao, các tác nhân không gây đáp ứng miễn dịch,

và kể cả những phân tử độc tố.

04

Các thông số trong liên kết sinh học có thể được lựa
chọn cho các điều kiện liên kết kháng thể kháng
nguyên mong muốn.


05

Nồng độ phối tử kháng nguyên và sự lắp ráp oligomeric
có thể được kiểm sốt dễ dàng.

06

Những tiến bộ trong việc tự động hóa quy trình sinh học
tạo kháng thể tái tổ hợp đã làm giảm đáng kể công sức,
thời gian và chi phí cần thiết.

07

Nhờ thư viện kháng thể tái tổ hợp các chất kết dính từ
q trình tạo dịng sinh học có thể được đặc trưng dễ
dàng thơng qua giải trình tự DNA.


08

Vật chủ mà hầu hết các phương pháp kháng thể tái tổ

hợp đã được phát triển là vi khuẩn Escherichia coli. Sự
phát triển của vi khuẩn nhanh chóng và khơng tốn kém.


0
3

PHƯƠNG
THỨC SẢN
XUẤT


1. SẢN XUẤT KHÁNG THỂ TÁI
TỔ HỢP.
• Các kháng thể tái tổ hợp được tạo ra thông qua các phương pháp kỹ
thuật di truyền/tái tổ hợp khác nhau, được gọi là công nghệ hiển thị.

Hiển thị nấm n thị nấm nấm m men

Hiển thị nấm n thị nấm nấm m
phage

Hiển thị tế bào
đơng vật có vú


• Các bước sản xuất kháng thể tái tổ hợp:

o Bước 1: Tạo ra một thư viện kháng thể chứa một số lượng lớn các
phage.

o Bước 2: Kháng nguyên quan tâm được cố định trên bề mặt rắn và
thư viện kháng thể được áp dụng trên đó.


o Bước 3: Các dịng vơ tính đích cụ thể được khuếch đại và sàng lọc.


2. KỸ THUẬT TẠO KHÁNG THỂ TÁI
TỔ HỢP TRONG VI KHUẨN ECOLI.
o Tạo Protein dung hợp:
Protein dung hợp (protein lai) được mã hóa
bởi một gen lai do sự dung hợp in vitro hai
đoạn gen khác nhau. Vì vậy, protein dung
hợp sẽ mang trình tự amino acid của hai
protein khác biệt.
Sự dung hợp gen được thực hiện bằng
cách gắn phần mã hóa của gen được tạo
dịng ở gần đầu cuối 3’ của gen vi khuẩn
(ví dụ: gen lacZ).

Protein dung hợp. Bao gồm gen được tạo dòng
(gen A) và một gen khác của vi khuẩn (gen B), do đó
protein dung hợp có chứa một phần protein của vi
khuẩn. SD: đoạn Shine-Dalgarno.


o Các hệ thống vector biểu hiện các gen dung hợp với gen lacZ.

01
Một số hệ thống vector được
phát triển để biểu hiện các gen
dung hợp với gen lacZ

02
Một hệ thống vector tương tự khác
cũng được phát triển để sản xuất
các protein dung hợp


o Xây dựng plasmid biểu hiện và phát hiện các protein dung hợp.
Gắn plasmid vector (pUR hoặc pEX) thích hợp với đoạn DNA
ngoại lai để tạo ra một sự dung hợp trong khung đọc.
Biến nạp các vector này vào E.coli (chủng K12 71/18 hoặc JM
103 cho các vector pUR, chủng M5219 cho các vector pEX).


o Tách chiết các protein dung hợp để sản xuất kháng thể.

Protein dung hợp có thể được tách chiết
theo một số cách: dùng dịch chiết urea, sắc
ký ái lực aminophenyl thiogalactoside, điện
di SDS polyacrylamide gel hoặc phối hợp
giữa các cách này.
Nhuộm gel và phát hiện băng protein mới,
sau đó cắt băng này ra khỏi gel, đông khô
khoảng 2 ngày rồi nghiền thành bột mịn.
Bột này sẽ được dùng tiêm vào thỏ để sản
xuất kháng thể.