Chuẩn đoán bệnh dịch tả lợn cổ điển bằng phương pháp elisa nhóm 1

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP. HỒ CHÍ
MINH

KHOA KHOA HỌC SINH HỌC

CHẨN ĐOÁN BỆNH DỊCH
TẢ LỢN CỔ ĐIỂN BẰNG
PHƯƠNG PHÁP ELISA

GVHD: TS. Huỳnh Văn Biết
Trương Quang Toản

Nhóm: 1
Môn học : Thiết bị và KT CNSH
Thứ sáu, ngày 27 tháng 10 năm 2023

1

Thành viên nhóm

21126245 Nguyễn
Phan Bảo Vy Nguyễn
21126230 Nguyễn
Thị Ngọc Tuyền
21126441
Lương Thảo Nhi

2

NỘI DUNG

01 Giới thiệu 02 Tổng quan và nguyên lý về kỹ

thuật Elisa

03 Phương pháp 04 Kết quả dự

nghiên cứu kiến

3

01 Giới thiệu

4

Dịch tả lợn cổ điển

• Pestivirus là một chi Hình 1: Bệnh dịch tả lợn Hình 2: Virus
virus, thuộc họ cổ điển CSF
Flaviviridea.
5
• CSF (Classical swine
fever) – dịch tả lợn cổ
điển gây ra bởi 1 loại
virus RNA sợi đơn
thuộc chi Pestivirus,
được bao bọc mã hóa
cho một polyprotein duy
nhất.

Ngun nhân:

▪ Nguồn lây chính của bệnh thơng qua đường

tiêu hóa hay đường hơ hấp.
▪ Chuồng trại không vệ sinh
▪ Lây truyền cơ học phổ biến qua ủng, quần

áo,…

Triệu chứng:
• Biểu hiện đầu tiên sau 3-15 ngày, phổ biến

là gây sốt, bệnh tích trên da, co giật, xuất
huyết và có thể diễn biến thứ cấp hoặc mãn
tính. Lợn con nếu mắc bệnh sẽ gây tử vong

6

Triệu
chứng

Hình 3: Lợn buồn nơn, Hình 4: Lợn
lười vận động tiêu chảy

Hình 5: Lợn xuất huyết Hình 6: Lợn da trắng chuyển sang màu

7

Tổng quan và
nguyên lí về kỹ thuật
02

Elisa

8

Tổng quan về kỹ thuật Elisa

❑ Dựa trên sự kết hợp đặc hiệu giữa kháng thể- kháng nguyên, phát hiện
bằng kháng thể đánh dấu khi cho thêm cơ chất, enzyme sẽ thủy phân cơ
chất thành một chất có màu.

❑ Phương pháp cho phát hiện và định lượng vật chất.

Hình 7:
Elisa
9

Nguyên lí hoạt động của bộ kit
test

⮚ Bộ kit test này hoạt động dựa trên nguyên lý elisa
sandwich.

⮚ Elisa sandwich định lượng kháng nguyên giữa hai lớp
kháng thể.

Hình 8: Elisa sanwich trực
tiếp

10

Phương pháp

03 nghiên cứu

11

Nguyên vật liệu

Mẫu : huyết thanh nghi ngờ chứa kháng
nguyên.
Anti-CSFV E2 ab coated plate.
10X sample treatment buffer.
10X washing buffer.
Dilution buffer.
20X whole blood treatment buffer.
HRPO anti-CSFV conjugate.
Strong positive control.
Weak positive control.
Negative control.
TMB subtrate.
Stop solution.

12

Quy trình thực hiện

50 µl dilution 100 µl HRPO 50µl stop
buffer để pha anti-CSFV solution.
loãng mẫu. conjugate.

Ủ 60 phút,
370C.
Rửa 3-5 lần.

1 2 3 4 5 6 7

Đáy giếng gắn 50 µl mẫu, đối 100 µl TMB Đọc kết
kháng thể chứng âm, đối substrate. quả.
kháng kháng chứng dương Ủ tối, 10 phút. OD 450
nguyên CSFV (tỉ lệ pha loãng nm.
E2. 1 :2).
13

04Kết quả dự kiến

14

Đọc kết quả

Sau khi có kết quả. sử dụng
máy đo OD đọc kết quả ở
450nm.

Sử dụng công thức trên để Hình 9: Kết quả
tính và kết luận:
% SP ≥ 20% => dương
tính.
% SP 15~20% => nghi
ngờ.
% SP ≤ 15% => âm tính.

15

Tài liệu tham khảo

1. Bệnh Dịch TẢ lợn cổ điển (CSF). Available at: />ta-lon-co-dien-csf-nd83603.html (Accessed: 25 October 2023).
2.file:///C:/Users/nguye/Documents/Zalo%20Received%20Files/A%CC%89nh%20ma
% CC%80n%20hi%CC%80nh%202023-03-23%20lu%CC%81c
%2016.44.41%20(1).pdf
3.Tổng Quan VỀ Bệnh dịch TẢ lợn cổ điển (CSF - classical swine fever) HappyVet.
Available at: (Accessed:
25 October 2023).
4. MEDLATEC, B. viện đa khoa (2020) Đối tượng và Cách thức thực hiện
xét nghiệm Elisa, Bệnh viện đa khoa MEDLATEC. Available at: />tuc/doi-tuong-va-cach-thuc-thuc-hien-xet-nghiem-elisa-s58-n16722 (Accessed: 25
October 2023).
5. Những điều cơ bản về kỹ Thuật Elisa (no date) Những điều cơ bản về kỹ thuật
ELISA. Available at: />elisa.html (Accessed: 25 October 2023).

16

CẢM ƠN
ĐÃ

LẮNG
NGHE

17