quá trình cố định carbon được thúc đẩy bởi phân tử hydro dẫn đến sự phát triển tăng cường hóa vô cơ tự dưỡng của helicobacter pylori

<span class="text_page_counter">Trang 1</span><div class="page_container" data-page="1">

<small>GVHD: GS.TS. Trần Linh Thước</small>

<b><small>Tổ 5: </small></b>

<small>Phạm Thị Thanh Tình 22C64014Lê Võ Bảo Trân 22C64015 Nguyễn Quốc Vủ 22C64016</small>

<b>ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP. HỒ CHÍ MINH TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN </b>

<b>Quá trình cố định carbon được thúc đẩy bởi phân tử hydro dẫn đến sự phát triển tăng cường hóa vơ cơ tự </b>

<i><b>dưỡng của Helicobacter pylori</b></i>

<b>Bài báo tham khảo: </b>Carbon fixation driven by molecular hydrogen results in

<i>chemolithoautotrophically enhanced growth of Helicobacter pylori</i>

<small>1</small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 3</span><div class="page_container" data-page="3">

• Tác nhân gây loét dạ dày và viêm dạ dày mãn tính. • Nguồn: Acid hữu cơ nhỏ, amino acid, peptide.

Trong nghiên cứu này, chỉ ra việc bổ sung H₂tăng nồng độ enzyme ACC.

<i><b>Helicobacter pylori</b></i>

<small>3</small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 4</span><div class="page_container" data-page="4">

<b>Nguyên liệu – Phương pháp</b>

<b>Chủng và điều kiện tăng trưởng.</b>

<b>Nuôi cấy tế bào và phân đoạn dưới tế bào. Phân cắt bằng tryptic trong gel.</b>

<b>Phân tích LC-MS/MS.</b>

<b>Phân tích hấp thu [</b>

<b><small>14</small></b>

<b>C] bicarbonate tồn tế bào.Phân tích hoạt tính acetyl-CoA carboxylase.</b>

<small>4</small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 5</span><div class="page_container" data-page="5">

<b>Chủng và điều kiện tăng trưởng</b>

<i>H.Pylori: </i>

<b>WT 26695ATCC 43504</b>

<b>26695 ∆ℎ𝑦𝑑ABCDE</b>

Mơi trường BHI có 0.4% β-

cyclodextrin- 1 µM NiCl

₂

Chọn lọc trên mơi trường

Tạo huyền phù trong môi trường

BHI-βc-NiỦ 37

<small>0</small>

C, lắc 200 v/p

ĐK: 10% O

₂

, 5% CO

₂

, N

₂

cân bằngTăng

sinh trên LK1

<small>Thu tế bào+ 10ml khuẩn </small>

<small>vào bình 165 ml</small>

<small>5</small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 6</span><div class="page_container" data-page="6">

<b>Chủng và điều kiện tăng trưởng</b>

<small>6</small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 7</span><div class="page_container" data-page="7">

<b>Nuôi cấy tế bào và phân đoạn dưới tế bào</b>

<i>H.Pylori </i>

WT 26695

Nuôi cấy BA ở 37°C/36h.

ĐK: vi hiếu khí khơng

đổi

Rửa bằng đệm phosphate pH

7.5 có PMSF

Huyền phù trong 3 ml PBS + French pressure cell 18.000 lb/in<small>2</small>

Loại vụn vỡ TB

Thu dịch nổi

<small>Ly tâm</small>

Thu dịch nổi, phần tế bào màng được huyền phù lại PBS

<small>WT-Ly tâm</small>

<small>Ly tâm</small>

<small>7</small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 8</span><div class="page_container" data-page="8">

<small>Alkyl hóa </small>

<small>55 mM iodoacetamideKhử 10 mM DTT </small>

<small>50 mM </small>

<small>NH</small>₄<small>HCO</small>₃<small>-50% acetonitrile </small>

<small>(ACN)Khử màu</small>

<small>Dịch phân cắt được sấy chân không + bảo quản ở -20°C chờ phân tích khối </small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 9</span><div class="page_container" data-page="9">

<small>Tạo huyền phù/2% 0,1% FA</small>

<small>ACN-Agilent 1100 capillary liquid chromatograph (LC)</small>

<small>LTQ linear ion trap mass spectrometer</small>

<small>Phổ khối MS/MS thô  mzXML  Mascot (MGF) </small>

<small>thông qua Proteomic </small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 10</span><div class="page_container" data-page="10">

<b>Phân tích hấp thu [</b>

<b>14</b>

<b>C] bicarbonate tồn tế bào</b>

<b><small>Ni trong 7h</small></b>

<small>- Sục khí N</small>₂<small>.- Thêm vào: 5mM NaHCO</small>₃<small>,</small>

<small> 1,3 Ci NaH14CO</small>₃

<b><small>Ủ thêm 12h</small></b>

<small>(37oC + 200 v/p)</small>

<small>- Lấy 1 ml dịch nuôi, cho vào mỗi:</small>^{3 lọ chứa chất}

<small>nhấp nháy </small>

<small>(0,3 ml TCA 60%)</small>

<b><small>Lắc + tủ hút 48h</small></b>

<small>- Mẫu trắng => bỏ.</small>

<small>- Mẫu chứa tế bào.</small>

<b><small>Lặp lại 3 lần</small></b>

<small>- Mật độ tế bào </small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 11</span><div class="page_container" data-page="11">

<b>Phân tích hoạt tính acetyl-CoA carboxylase</b>

Xác định bằng cách sử dụng enyme kết hợp với pyruvate kinase và lactase dehydrogenase.

<b>0,5 ml hỗn hợp:</b>

+ 10 U pyruvate kinase

+ 9,3 U lactate dehydrogenase+ 0,1 mM NADH

+ 1 mM acetyl-CoA + 50 µM ATP

<small>Phản ứngỞ 340nm</small>

bổ sung 3 µl dịch chiết tế bào/nước

</div><span class="text_page_counter">Trang 12</span><div class="page_container" data-page="12">

<b>Kết quả và thảo luận</b>

<b>2.1 lần</b>

<small>12</small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 13</span><div class="page_container" data-page="13">

<b>Điều kiện Vi hiếu khí (Microaerophilic)</b>

<small>13</small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 14</span><div class="page_container" data-page="14">

<small>14</small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 16</span><div class="page_container" data-page="16">

<b>Acetyl-CoA carboxylase </b>

</div><span class="text_page_counter">Trang 17</span><div class="page_container" data-page="17">

<b>HYDROGENASE [NiFe]</b>

<small>17</small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 18</span><div class="page_container" data-page="18">

<b>Hấp thụ [C</b>

<b>14</b>

<b>]bicarbonate</b>

<small>18</small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 19</span><div class="page_container" data-page="19">

<b>Tăng hoạt tính ACC</b>

<small>19</small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 20</span><div class="page_container" data-page="20">

<b>Kết luận</b>

- Tăng biểu hiện của hydroase và tiểu đơn vị ACC biotin carboxylase.

- Tăng hoạt tính ACC.

- Chuyển hóa và tăng trưởng tổng thể tốt hơn, thể hiện qua năng suất tăng trưởng cao hơn.

<i>- Các vai trò cụ thể của H. pylori liên quan đến động lực proton </i>

<small>20</small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 21</span><div class="page_container" data-page="21">

<b>Thu hoạch</b>

•Biết được cơ chế hoạt động của hydrogenase trong việc liên kết với co-factor là [Ni-Fe].

•Biết được 1 số protein nằm trên màng và protein trong tế bào chất.

<small>21</small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 22</span><div class="page_container" data-page="22">

Thank you!

<small>22</small>

</div><span class="text_page_counter">Trang 23</span><div class="page_container" data-page="23">

<b>Cơ chế Beckman LS6000TA scintillation counter</b>

<small>23</small>

</div>