xác định môi trường tối ưu để thu sinh khối và enzyme của vi khuẩn bacillus subtilis

BÁO CÁO KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP
“XÁC ĐỊNH MÔI TRƯỜNG TỐI ƯU ĐỂ THU SINH
KHỐI VÀ ENZYME CỦA VI KHUẨN
Bacillus subtilis, Lactobacillus acidophilus.
THỬ NGHIỆM SẢN XUẤT CHẾ PHẨM SINH HỌC”
GVHD: CN. TÔ MINH CHÂU
TS. LÂM THỊ THU HƯƠNG
SVTH: NGUYỄN ĐỨC DUY ANH
NỘI DUNG BÁO CÁO
1. Đặt vấn đề
2. Vật liệu và phương pháp thí nghiệm
3. Kết quả và thảo luận
4. Kết luận và đề nghị
ĐẶT VẤN ĐỀ
Giải pháp ?
Sử dụng chế phẩm sinh học
(probiotic): B. subtilis, L.
acidophilus…
Chất hóa học,
chất kháng sinh
Tồn dư trong thịt  giảm
phẩm chất thịt
Gây kháng thuốc và rối loạn hệ
vi sinh vật đường ruột
MỤC ĐÍCH
Xác định được môi trường tối ưu
của vi khuẩn Bacillus subtilis và
Lactobacillus acidophilus để sản
xuất chế phẩm sinh học.
YÊU CẦU
Đối với Bacillus subtilis


Nuôi cấy Bacillus subtilis trên nhiều loại môi
trường khác nhau  tìm môi trường tối ưu để
vi khuẩn sản sinh enzyme amylase và protease.

Sản xuất chế phẩm chứa Bacillus subtilis .

Kiểm tra chất lượng của chế phẩm vừa sản xuất
và sau thời gian bảo quản.
Đối với Lactobacillus acidophilus

Phân lập từ chế phẩm Antibio.

Tìm môi trường nhân giống thích hợp cho sinh
khối và độ chua cao nhất.

Sản xuất chế phẩm chứa vi khuẩn L.acidophilus.

Kiểm tra chất lượng của chế phẩm vừa sản xuất
và sau thời gian bảo quản.
YÊU CẦU
Giống vi khuẩn

Bacillus subtilis ATCC - 6633

Lactobacillus acidophilus được phân lập từ chế phẩm
Antibio do Hàn Quốc sản xuất.
Thiết bị - dụng cụ
Hóa chất
Môi trường nuôi cấy: tăng sinh, nhân giống cấp 1, cấp 2,

môi trường sản xuất
VẬT LIỆU THÍ NGHIỆM
PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM
Giống gốc Bacillus subtilis
Môi trường NB
Tăng sinh
Nomura
Fragie
rỉ đường + 2% tinh bộtEdwards
pepton - gelatin
5 % giống
48 giờ, t phòng
Kiểm tra
Hoạt tính amylase
Số lượng vi khuẩn có trong 1ml
Hoạt tính protease
Chọn môi trường tối ưu nhất
10 % giống
Môi trường
A
Môi trường
B
Môi trường
D
Môi trường
C
Môi trường
E
Môi trường NB
Sơ đồ bố trí thí nghiệm đối với Bacillus subtilis

Nhuộm Gram,
kiểm tra độ thuần
PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM
Môi trường
A
Môi trường
B
Môi trường
D
Môi trường
C
Môi trường
E
Chọn môi trường tối ưu nhất
Sản xuất chế phẩm chứa Bacillus
subtilis
Bảo quản, kiểm
tra
PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM
Nước 60 – 65 % so
với nguyên liệu
Môi trường nhân giống
cấp 2 tối ưu
Khoáng hỗn hợp
Hấp khử trùng 121
0
C trong
20 - 25 phút
Đổ lên khay
Làm nguội đến 37

o
C
Nuôi 72 giờ ở nhiệt độ phòng
Giống Bacillus subtilis 10%
Sấy khô 40 - 45
o
C
Đánh tơi
Xay mịn
Sơ đồ quy trình sản xuất chế phẩm chứa Bacillus subtilis
Xay mịn
Chế phẩm chứa
Bacillus subtilis
Đóng gói, kiểm tra và
bảo quản
PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM
Phân lập
Chế phẩm Antibio
(chứa L. acidophilus)
MRSA
MRSB tăng sinh (24 giờ /37
o
C)
Chọn khuẩn lạc điển hình
Kiểm tra sinh hóa
Xác định Lactobacillus acidophilus
PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM
Sơ đồ bố trí thí nghiệm đối với Lactobacillus acidophilus
Xác định Lactobacillus acidophilus
Chọn ra môi trường thích hợp

Sản xuất chế phẩm chứa L. acidophilus
Số lượng vi khuẩn có trong 1ml Độ chua Therne
Môi trường sữa đặc có đường
Môi trường sữa đậu nành
24 giờ, t phòng
Kiểm tra
Kiểm tra, đóng gói và bảo quản
PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM