Chương 3 Nuôi cấy tế bào động vật phần 4 TS. Đặng Đức Long

CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
Các phương pháp chuyển gen
• Phương pháp chuyển gen sử dụng virus
• Phương pháp chuyển gen không sử dụng virus
-
Phương pháp hóa học
-
- Phương pháp vật lí
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
Chuyển gen không sử dụng virus
• Phương pháp hóa học
- Calcium Phosphate
- DEAE dextran

-
Liposome
-
Liposome
• Phương pháp vật lí
- Điện biến nạp
- Súng bắn gen
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
• Phương pháp hóa học
- Sử dụng lần đầu tiên vào năm 1965
- Giúp cho DNA dễ dàng bám và di chuyển qua màng tế bào,
màng nhân.
-
Hiệu quả thấp hơn so với các phương pháp chuyển gen sử
-
Hiệu quả thấp hơn so với các phương pháp chuyển gen sử
dụng virus
- Yêu cầu nghiêm ngặt về hóa chất sử dụng
- Không liên quan đến các vấn đề về an toàn sinh học
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
• Phương pháp hóa học
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
• Phương pháp hóa học
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
• Phương pháp hóa học
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT

3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
• Phương pháp hóa học
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
• Phương pháp hóa học
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
• Phương pháp hóa học
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
• Phương pháp hóa học
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
• Phương pháp vật ly
́
- Thường sử dụng khi các phương pháp chuyển gen bằng hóa
học kém hiệu quả
- Không phụ thuộc vào loại tế bào
-
Không có giới hạn về kích cỡ DNA chuyển
-
Không có giới hạn về kích cỡ DNA chuyển
- Yêu cầu có các dụng cụ chuyên biệt (Súng bắn gen, Máy điện
biến nạp, Hệ thống vi thao tác, …)
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
• Phương pháp vật ly
́
- Phương pháp điện biến nạp
 Sử dụng dòng điện tạo một điện trường tác động lên màng tế

bào trong thời gian cực ngắn (us – ms)

Xuất hiện các l
ỗ
(pore) trên màng tế bào
→
vector dễ dàng di

Xuất hiện các l
ỗ
(pore) trên màng tế bào
→
vector dễ dàng di
chuyển xuyên qua màng tế bào
 Thông số điện biến nạp giữa các dòng tế bào rất khác nhau
 Thường gây chết tế bào !!!
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
• Phương pháp vật ly
́
- Phương pháp điện biến nạp
 Vật liệu – Thiết bị
- Dung dịch Hypoosmolar
- DNA
- Tế bào
-Máy điện biến nạp
 Quy trình
- Tách tế bào
- Trộn tế bào với DNA trong cuvette điện biến nạp
- Thực hiện kích điện với các thông số thích hợp

- Nuôi cấy tiếp tục, sau 2 – 3 ngày kiểm tra sự biểu hiện của protein
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
• Phương pháp vật ly
́
- Phương pháp điện biến nạp
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
• Phương pháp vật ly
́
- Phương pháp bắn gen
 Hệ thống bao gồm một xylanh và một “hộp đạn” có chứa
các hạt vàng được phủ DNA

Khi kích hoạt hệ thống, khí nén Helium được giải phóng,

Khi kích hoạt hệ thống, khí nén Helium được giải phóng,
tác động một sóng siêu âm lên các hạt vàng có phủ DNA →
các hạt này di chuyển vào tế bào chất của tế bào
 Thường áp dụng cho tế bào thực vật (Bắp, Lúa mạch, Đậu
nành, …)
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
• Phương pháp vật ly
́
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.6. Các kỹ thuật chuyển gen vào tế bào động vật
• Ứng dụng
- Bệnh ung thư và liệu pháp sử dụng virus oncolytic
o Chuyên biệt receptor

o Chuyên biệt sao chép

Không có sự xuất hiện của protein kháng virus

Không có sự xuất hiện của protein kháng virus
 Sử dụng promoter thích hợp