Nghiên cứu tính an toàn và khả năng gây đáp ứng miễn dịch trên khỉ Macaca Mulatta của 3 chủng virut rota hệ giống gốc để sản xuất vacxin rota

DAI HOC QUOC
GIA
HA
NQl
TRlTOfNG
DAI
HQC
KHOA HOC
TU^
NHIEN
DANG
THI
NGAN HA
NGHIEN
ClTU
TINH
ANTOAN
VA KHA NANG GAY DAP
LTNCi
MIEN
DICH
TREN
KHI
Macaca mulatta
CUA
3
CHUNd
VIRUT
ROTA
HE
GIONG

GOC DE SAN
XUAT
VACXIN ROTA
Chuyen
nganh: Vi sinh vat hoc
Ma so: 62 42 40 01
LUAN
AN TIEN SI SINH HOC
NGLT^I
Hl/^NG
DAN KHOA HOC:
1. PGS.TS
LE
THI LUAN
2.
PGS.TS NGUYEN DANG
HIEN
DAI HOC QUOC GtA HA NOl
TRUNG TAM
TH6NG
TIN THU VIET
V^U/
5U
Ha
Noi-
2010
MUC
LUC
• •
LOICAMON

LOI CAM
DOAN
CAC KI HIEU VA
CHC
VIET
TAT
MUCLUC
DANH MUC CAC BANG
DANH MUC CAC HINH
MCJDAU
1
CHUONG
I: TONG
QUAN
3
1.1 Virut Rota 3
1.1.1
Ljch siJ
phat hien virut Rota 3
1.1.2.
Phan
loai
virut Rota 3
1.1.3. Hinh thai va cau
true
4
1.1.4.
Cac thanh phan hoa hoc cua virut Rota va chuc nang 6
1.1.5.
Phan nhom va typ huyet thanh 10

1.1.6.
Tinh chat hoa
ly 11
1.1.7.
Nuoi cay 13
1.1.8.
Su nhan len
ciia
virut Rota trong te bao 13
1.1.9.
Kha nang gay benh 16
1.1.10.
Cache
gay benh 17
1.1.11.
Cac trieu chung
cua
benh do virut Rota 18
1.1.12.
Di^u
tri 18
1.1.13. Chan doan virut Rota trong phong thi nghiem 18
1.2. Dich te hoc 20
1.2.1. Nguon benh 20
1.2.2.
Lua tuoi mac benh 20
1.2.3.
Mua
benh 20
1.2.4.

Duong lay truyen 21
1.2.5.
Milndich
21
1.3.
Tinh hinh nhiem virut Rota tren
Th^
gioi
22
1.4. Tinh hinh nhiem virut Rota tai Viet Nam 23
1.5.
Tinh hinh nghien cuu va phat trien vacxin Rota tren
Th^
gioi
va trong
nuoc
26
1.5.1. Tinh hinh nghien cuu phat trien vacxin tren
Th^
gioi 26
1.5.2.
Tinh hinh nghien cuu va phat
triln
vacxin tai Viet Nam 32
1.6.
Tieu chuin
ciia T6
chuc
Y
t^

Th^
gioi
ve
chiing
san
xuat vacxin Rota 34
1.6.1.
Cac
thuat
ngu 34
1.6.2.
Ki€m
tra
ngu6n
nguyen lieu
dau 35
1.6.3. Chiing virut
37
1.7.
H6
so he
thdng chiing gidng
ung
vien
de san
xuat vacxin Rota
tai
Viet
Nam
41

1.7.1.
H6
so tom
tk
cac
buoc
cay
truyen chiing giong
goc
G1P[8]
de tao
chiing
ung
vien
cho san
xuat vacxin
42
1.7.2.
H6
so tom tat cac
buoc
cay
truyen chiing giong
goc
G1P[4]
de tao
chiing
ung
vien
cho san

xuat vacxin
43
1.7.3.
H6
so tom tat cac
buoc
cay
truyen chiing giong
goc
G4P[6]
de tao
chiing
ung
vien
cho san
xuat vacxin
44
CHLTONG
II.
DOI
TlJONG,
VAT
LIEU
VA
PHlTONG
PHAP NGHIEN
ClTU
45
2.1.
Doi

tugng
nghien
cuu 45
2.1.1.
Chiing giong
goc
(Master seed)
45
2.1.2. Chiing
san
xuat vacxin (Working seed)
46
2.2.
Nguyen
vat
lieu
va
phuong phap kiem
tra he
thong chiing
46
2.2.1.
Phuang phap
xet
nghiem
vi
khuan
va nam 46
2.2.2. Phuorng phap
thu

Mycoplasma bang phuang phap
PCR 47
2.2.3.
Phuang phap
thu vi
khuan
lao 49
2.2.4. Phuong phap
xac
dinh virut
gay hap phu
hong
cau 50
2.2.5.
Thu
nghiem
tac
nhan ngoai
lai
tren
te bao
than
tho
so
sinh
51
2.2.6.
Thu
nghiem
tac

nhan ngoai
lai
tren
te bao
than
khi
tien phat
52
2.2.7.
Thu
nghiem
tac
nhan ngoai
lai
tren
te bao
Vero
53
2.2.8.
Thu
nghiem
tac
nhan ngoai
lai
tren
te bao
Hep2C
53
2.2.9.
Xac

dinh nhan dang virut Rota
54
2.2.10. Phuang phap
xac
dinh hinh
the
virut Rota bang kinh hien
vi
dien
tu
62
2.2.11.
Phuang phap
xac
dinh
an
toan tren dong
vat thi
nghiem
66
2.2.12. Phuang phap
dap ung
mien dich tren
khi 68
2.2.13.
Xac
dinh trinh
tu gen
4(VP4), 6(VP6),
9(VP7), 10(NSP4)

cua
virut
Rota
71
2.2.14. Phuang phap thong
ke
xii
ly so
lieu
77
CHITONG
III: KET QUA VA BAN
LUAN
78
3.1.
Ket qua
kiem dinh tinh
an
toan
he
thong chiing virut Rota
78
3.1.1.
Kilm
tra vi
khuAn
va nam va vi khuan lao 78
3.1.2.
Kiem tra tac nhan ngoai lai trong hon dich chiing virut Rota bang
phuang phap PCR 79

3.1.3.
Kiem tra tac nhan ngoai lai gay
hiiy
hoai te bao trong hon dich chiing
virut Rota tren nuoi cay te bao va hap phu hong cau 80
3.1.4. Kiem tra an toan tren dong vat thi nghiem 82
3.1.5.
Quan sat hinh anh chiing virut Rota giong goc tren kinh hien vi dien
tu 93
r r
r r
3.1.6. Ket qua nhan dang chiing virut Rota giong goc va chiing san
xuat 94
3.1.7. Ket qua giai trinh tu gen he thong chiing virut Rota 101
3.1.8. Xac dinh
11
doan ARN
ciia
chiing giong goc bang SDS-Page 129
3.2. Ket qua dap ung mien dich he thong chiing tren khi thuc nghiem 130
3.2.1 Ket qua khang the trung hoa tren he thong 3 chiing 130
3.2.2 Ket qua khang the trung hoa tren he thong chiing doi chung 134
KET
LUAN 137
KIENNGHI
138
CAC CONG TRINH DA CONG BO CO LIEN QUAN DEN LUAN AN
139
TAI LIEU THAM KHAO