Phân lập và biểu hiện gen mã hóa protein vỏ p10 của virus gây bệnh lúa lùn sọc đen ở việt nam


M U 1
CHNG 1- TNG QUAN 3
1.1. GII THIU CHUNG V VIRUS H 3
1.2. BDV 5
1.2.1. B 5
ng Nam 11
N GEN P10   15
N SRBSDV 17
1. NG DNG THC TIN 18
1.5.1. Gii thiu chung v   18
1.5.2. Mt s ng dng ch  21
CHNG 2- VT LI 24
2.1. VT LIT 24
2.1.1. Vt lim 24
t 24
2.1.3. Thit b 25
2.2. PHU 25
c hiu bng k thut PCR 25
n gel agarose 26
i DNA bng enzyme DNA ligase 26
2.2.4. Bin np vi khun E. coli 27
t DNA plasmid t t n 27
2.2.6. Tinh sch DNA t gel agarose 28
2.n phm PCR 29
2.2.8. Phn ng ct DNA bng enzyme ct gii hn 29
2.2.9. Gi n DNA 30
a SDS 31
y E. coli n b dch chit t  32
2.2.12. Tinh s hp qua ct Ni
2+

agarose 32
 nh lng protein b    hp th    
ngoi (A
280
) 33
 t bch 33
2.2.15. Phn dch (Western blotting) 33
2.2.16. Tinh s IgG bng ct s-sepharose 34
2.2.17. Ph 35
2.2.18. Ph 36
N GEN P10 T cDNA CN S10 . 37
3.1.1. n gen P10 bng phn ng PCR 37
n gen P10  39
3.1.3. PCR kim tra s t ca pl hp 40
3.1.4. Ki hn gen P10 41
3.1.5. Gi n gen P10 ca chng SRBSDV 44
3.2. BIU HI HP P10 45
3.2.1. Thit k vector biu hin gen P10 45
3.2.2. Biu hi hp P10 52
3.3. G  58
ng min dt bch 58
N VIRUS SRBSDV B TINH SCH 63
 nhy c 63
n SRBSDV bt ELISA 64
KT LUN NGH 66
U THAM KHO 67
PH LC i








i li cc ti PGS.TS. Phi
TS. Phan Tu nhi th bng dn,
 c t 
 , anh ch em trong B nh
hc P Thc vt, Vin Di truyng d
 t nhiu trong thi gian i B 
   i li c       c Khoa Sinh hc,
i hc Khoa hc T nc bi  
c vng kin th
thi gian hc tp tng.
Cu i li cng
u kin tt nh  lun  

 03 
H


 
















Bng 1p oligonucleotide s du
Bng 2n phn 


Bng 3n phn ng ghn phT
4: 



 nhn bi








5: -PAGE 12 %
Bng 6n phn 

P10
Bng 7n phn ng ct gii hn pGEMT/P10

Bng 8n phn ng ct gii hn pGEMT/P10 28a
Bng 9n phn ng ct gii hn pET28a/P10
Bng 10u kin cm ng biu hi hp
Bng 11: Kt qu 
492
th  c hiu c bng phn ng ELISA
Bng 12: Kt qu 
492
ca phn u ry.















Triu chng c nhim b
Rng Sogatella furcifera truyn SRBSDV







=13 Fijivirus
4: Tinh th  virus SRBSDV n bn
t  b bnh  ti Vi
5in di sn ph



P10 
H6  i hn
7: Bin n h

P10  E. coli
8: 








9: PCR kim tra khun lc v

P10
10: in di sn phm ct gii h hp pGEMT/P10
11: 










BamHI/XhoI
2 vector pET28







P10
13: Bin n h

P10 E. coli DH5
14: in di sn phm PCR t n lc vi cp mi T7-Fw/T7-Rv
15: in di sn phm PCR kim tra plasmid pET28a/P10
16: in di sn phm ct gii h hp pET28a/P10
17: Bin np vector pET28a/P10 n E. coli Rossetta
18n di SDS-PAGE kim tra s t ca protein P10  hp trong
u kin chun
: Kim tra s t ca protein P10  hu ki
v nhi i gian
20: in di sn phm sau tinh sch dch chit t 
21: King min dch ct thanh bng thn dch

 22: S  huyt thanh chu    n dch qua ct protein A-
sepharose
23n di SDS- PAGE ki tinh sch c
24: PWestern blotting s d tinh sch (1:2000)
25: Th  nhy c tinh sch
26: Th  c hiu c tinh sch (1:5000)



BNG U  





APS Ammonium persulphate
bp C
CBB Coomassie Brillant Blue
cDNA DNA b sung
dNTPs Deoxy triphosphates nucleotides
dsRNA 


E. coli Escherichia coli
EDTA Ethylenediamine tetraacetic acid
ELISA K thu hp th min dt vi enzyme
(Enzyme- linked immunosorbent assay)
EtBr Ethidium Bromide
IPTG Isopropyl--D-Thiogalactopyranoside
kb Kilobase

kDa Kilodalton
LB ng Luria Bertani
 
ORF c m (open reading frame)
PCR Phn ng chui polymerase (polymerase chain reaction)
SDS-PAGE Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide
SRBSDV 





strike
dwarf virus)
TAE Tris base  Acetic - EDTA
TBE Tris base  Axit Boric  EDTA
TEMED N,N,N'N'-Tetramethyl-Ethylenediamine


1


 (Oryza sativa L.) c i nh
cc quan trng cung cp nguc cho khong  th gii.  c
ta c ch lc n vi p
ca khong 80% s h . Trong nhng
i mt vi nhic, nh
hc bidch bnh x n sn
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2

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3

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[7, 11-13, 16].
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4

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5

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1.2.1.2. Tình hình bệnh ở Việt Nam
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8

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1.2.1.3. Đặc điểm triệu chứng bệnh lúa lùn sọc đen
Biu hin bnh cm SRBSDV rt ging vi biu hin ca bnh
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t d nhn tht nh  bnh
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9


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1.2.1.4. Vector truyền bệnh
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10

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(Laodelphax striatellus). 
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nhim SRBSDV s  
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11

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 bnh tn t rng sng qua
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1.2.2. Virus  
1.2.2.1. Tình hình nghiên cứu virus gây bệnh lúa LSĐ ở Việt Nam
bit ln nht gic vc v
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13

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1.2.2.2. Đặc điểm sinh học của SRBSDV
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14

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 li ph bi c Trung Quc [14, 16, 17].
Mu v c lan truyc ti
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 (N. lugens)  (L. striatellus). 
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15

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16

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17

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