Khảo sát ảnh hưởng của sữa gầy đến khả năng sống sót của saccharomyces boulardii trong quá trình đông khô

BỘ Y TẾ
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI







NGUYỄN THỊ MAI HƯƠNG


KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA
SỮA GẦY ĐẾN KHẢ NĂNG SỐNG SÓT
CỦA Saccharomyces boulardii
TRONG QUÁ TRÌNH ĐÔNG KHÔ




KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

HÀ NỘI - 2015

BỘ Y TẾ
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI




NGUYỄN THỊ MAI HƯƠNG





KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA
SỮA GẦY ĐẾN KHẢ NĂNG SỐNG SÓT
CỦA Saccharomyces boulardii
TRONG QUÁ TRÌNH ĐÔNG KHÔ



KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ



Người hướng dẫn:
DS. Lê Ngọc Khánh
Nơi thực hiện:
Bộ môn Công Nghiệp Dược
Trường Đại học Dược Hà Nội

HÀ NỘI - 2015



LỜI CẢM ƠN
Với sự kính trọng và lòng biết ơn sâu sắc, tôi xin gửi lời cảm ơn chân
thành đến DS. Lê Ngọc Khánh, người thầy đã tận tình hướng dẫn tôi trong suốt
quá trình thực hiện khóa luận.
Tôi cũng xin gửi lời cảm sâu sắc đến TS. Đàm Thanh Xuân, cùng các thầy
cô giáo trong bộ môn Công nghiệp Dược, những người đã giúp đỡ, cho tôi những ý
kiến quý báu và tạo mọi điều kiện thuận lợi giúp tôi hoàn thành khóa luận này.
Tôi cũng xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ hết sức nhiệt tình của các anh
chị kỹ thuật viên trong bộ môn Công nghiệp Dược.
Tôi cũng xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu nhà trường và các thầy cô
giáo trong trường đã tận tình dạy dỗ và dìu dắt tôi trong năm năm học tại trường.
Cuối cùng tôi xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, bạn bè đã ủng hộ, khích lệ và
hết lòng giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập và nghiên cứu.
Do thời gian làm thực nghiệm cũng như kiến thức của bản thân có hạn, khóa
luận còn nhiều thiếu sót. Tôi rất mong nhận được sự góp ý của thầy cô, bạn bè để
khóa luận được hoàn thiện hơn.
Tôi xin chân thành cảm ơn!
Hà Nội, tháng 5 năm 2015
Sinh viên

Nguyễn Thị Mai Hương





MỤC LỤC
Danh mục các ký hiệu, các chữ viết tắt
Danh mục các bảng
Danh mục các hình vẽ và đồ thị
ĐẶT VẤN ĐỀ 1
CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 2
1.1. Đại cương về probiotic 2
1.1.1. Khái nim 2
1.1.2. m ca vi sinh v phân loi thành probiotic 3
1.1.3. Các vi sinh vt s dng trong ch phm probiotic 3
1.2. Nấm men Saccharomyces boulardii 4
1.2.1. V trí phân loi 4
1.2.2. m hình thái, cu to 5
1.2.3. m sinh lý 5
1.2.4. ng dng trong ngành Y- c 7
1.2.5.  tác dng 7
1.2.6. Các nghiên cu v Saccharomyces boulardii 8
1.3. Kỹ thuật đông khô sản xuất probiotic 9
1.3.1. Khái nim 9
1.3.2. Cn c 9
1.3.3. m và hn ch 10

1.3.4. Các yu t n chng sn ph 11
CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14
2.1. Nguyên vật liệu, thiết bị 14
2.1.1. Nguyên vt liu 14
2.1.2. Mt s ng s dng 14
2.1.3. Thit b 15
2.2. Nội dung nghiên cứu 15
2.2.1. Kho sát mt s thông s lên quá trình nuôi cy Saccharomyces boulardii
15
2.2.2. Kho sát kh ng sót ca Saccharomyces boulardii trong quá trình
i sa gy 15
2.3. Phương pháp nghiên cứu 16
2.3.1. ng 16
2.3.2.  cy to dch t bào 16
2.3.3.  16
2.3.4.  nh s ng vi sinh vt 17
2.3.5. nh t l sng sót c 19
2.3.6. nh hàm m 19
2.3.7.  lý kt qu 19
CHƯƠNG III: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 21
3.1. Khảo sát một số thông số lên quá trình nuôi cấy Saccharomyces boulardii
21
3.1.1. ng cu kin hô hp 21



3.1.2. ng cu kin nhi 23
3.1.3. ng ca thi gian nuôi cy 25

3.1.4. ng cu king 27
3.2. Khảo sát khả năng sống sót của Saccharomyces boulardii trong quá trình
đông khô với sữa gầy. 29
3.2.1. So sánh kh ng sót ca Saccharomyces boulardii trong quá trình
i sa gc ct 30
3.2.2. Kho sát kh ng sót ca Saccharomyces boulardii trong quá trình
i sa gy  mt s n 32
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 36
TÀI LIỆU THAM KHẢO




DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT

AIDS
(acquired immunodeficiency syndrome)


AMP
Adenosin monophosphat
C. difficile
Clostridium difficile
E. coli
Escherichia coli
EPEC
(Enteropathogenic Escherichia coli )
Nhóm Escherichia coli 

FAO (Food and Agriculture Organization)


IL-8
Interleukin 8
MRS (de Man, Rogosa, Sharpe)

MTNM
n
S. boulardii
Saccharomyces boulardii
SCFA (Short - chain fatty acid)

TLSS

VSV

WHO (World Health Organization)





DANH MỤC CÁC BẢNG

STT
Tên bảng
Trang
2.1

14
2.2


15
3.1
S. boulardii 

22
3.2
S. boulardii 

24
3.3
S. boulardii 

26
3.4
S. boulardii 

28
3.5
S. boulardii 

31
3.6
S. boulardii
S. boulardii 
nhau
33

DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ

STT
Tên các hình vẽ, đồ thị
Trang
1.1
Saccharomyces boulardii 
5
1.2

9
3.1
S. boulardii 

22
3.2
S.boulardii sau quá

33

1


ĐẶT VẤN ĐỀ
 

Saccharomyces boulardii 



       Clostridium
difficile

       

       Saccharomyces boulardii   

S. boulardii
          


“Khảo sát ảnh hưởng của sữa
gầy đến khả năng sống sót của Saccharomyces boulardii trong quá trình đông
khô” 
1. Khảo sát một số thông số lên quá trình nuôi cấy Saccharomyces boulardii.
2. Khảo sát khả năng sống sót của Saccharomyces boulardii trong quá trình
đông khô với sữa gầy.
2


CHƯƠNG I: TỔNG QUAN
1.1. Đại cương về probiotic
1.1.1. Khái niệm




lactic có

              

[18], [25].

 









 


 

3


1.1.2. Đặc điểm của vi sinh vật để phân loại thành probiotic



- 

-  

-       



- 

- mà

- 


- 
- 

- 


in vitro
1.1.3. Các vi sinh vật sử dụng trong chế phẩm probiotic

4


-            Lactobacillus và
Bifidobacterium.
- 
+ Chi Propionibacterium
+ Chi Bacillus
+ Chi Brevibacillus
+ Chi Sporolactobacillus
+ Chi Escherichia
-        Saccharomyces    
Saccharomyces boulardii [33].

1.2. Nấm men Saccharomyces boulardii





Saccharomyces boulardii" [37].
1.2.1. Vị trí phân loại

Fungi
Ngành
Ascomycota
Phân ngành
Saccharomycotina

Saccharomycetes

Saccharomycetales

Saccharomycetaceae
Chi
Saccharomyces
Loài
Saccharomyces boulardii [1].
5


1.2.2. Đặc điểm hình thái, cấu tạo
Saccharomyces boulardii 
- 6 × 6 - Saccharomyces boulardii 





Hình 1.1: Hình ảnh Saccharomyces boulardii dưới kính hiển vi
1.2.3. Đặc điểm sinh lý



- 
        Saccharomyces    
           

- Ngu

           
nhiên (L-          

6


- 


-

2+
, K
+
, Mg

2+
c

+


2+
và Mg
2+


- m vitamin, base purin và pyrimidin. Trong công
       

- Saccharomyces 
 
Saccharomyces 


  
Saccharomyces 

- - 



- 
- 
2



               
 
7


1.2.4. Ứng dụng trong ngành Y- Dược
Saccharomyces boulardii 
- 
Saccharomyces boulardii 

S. boulardii 


   Saccharomyces boulardii có

do Clostridium difficile 
- 

1.2.5. Cơ chế tác dụng
 
Saccharomyces boulardii 
 
Saccharomyces boulardii 

Saccharomyces boulardii ti
C. difficile [13], [15]. Saccharomyces
boulardii 
], [23], [42].
 

Saccharomyces boulardii  
Saccharomyces boulardii 
     Candida albicans, Salmonella typhimurum, Yersinia
8


enterocolitium. Saccharomyces boulardii  
 S. boulardii
 



 S. boulardii          có nguyên
S. boulardii 

 
S. boulardii         
-
+
thông qua kênh
- Na
+
. Saccharomyces boulardii 
rong
], [43]. Ngoài ra, S. boulardii 
sau khi EPEC bám dính [19].
 
Saccharomyces boulardii 
            
Saccharomyces boulardii        

-8 [22], [44].
1.2.6. Các nghiên cứu về Saccharomyces boulardii
   Saccharomyces boulardii      

         S.
boulardii 
9


S. boulardii 
S. boulardii 
Saccharomyces boulardii 

Saccharomyces sp


men Saccharomyces boulardii           

1.3. Kỹ thuật đông khô sản xuất probiotic
1.3.1. Khái niệm




1.3.2. Cấu trúc máy đông khô và các giai đoạn
của quá trình đông khô
 C

-        


--
-



 n c




Hình 1.2: Máy đông khô


10






   



  




            






 -0,2
-0,0275 

-

-
- 
1.3.3. Ưu điểm và hạn chế
 m:
- 
11


- 

[11].

Saccharomyces boulardii 
tr
 Hn ch:
- 

- 

- 


- 

1.3.4. Các yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng sản phẩm đông khô
 Yu t thuc v vi sinh vt
- 
- 
- 
 Yu t thuc v 







12


-  maltodextrin, dextran

- 

- 
làm khô.
- 


- butter m




- 
- 35,7% protein, 48,4 - 54,1%

               -




          





- 

13


- 


 Yu t thuc v u kin bo qun:
- 

 

-  

[38].
- 
[38].
14


2. CHƯƠNG II: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Nguyên vật liệu, thiết bị
2.1.1. Nguyên vật liệu
 Saccharomyces boulardii
 
Bảng 2.1: Các hóa chất dùng trong nghiên cứu
Tên hóa chất
Nguồn gốc
Tên hóa chất
Nguồn gốc

Merck- 
(NH
4
)
2
SO
4



Merck- 
Triamoni citrat


Pepton
Merck- 
Tween 80

Glucose

MgSO
4
.7H
2
0

MnSO
4
.4H
2
O

NaCl





KH
2
PO
4

Natri acetat


2.1.2. Một số môi trường sử dụng
Môi trường MRS lỏng (MT1):
Glucose
20,0g

MgSO
4
.7H
2
0
0,2g
Pepton
10,0g

MnSO
4
.4H
2
O
0,05g

10,0g

KH
2
PO
4

2,0g


5,0g

Tween 80
1,0g
Natri acetat
5,0g



Triamoni citrat
2,0g

pH
6,8-7,0

Môi trường nuôi cấy nấm men lỏng (MT2):

Glucose
80,0g

KH
2
PO
4

2,0g


5,0g



15



(NH
4
)
2
SO
4

5,0g

pH
6,5-7,0

MgSO
4
.7H
2
O
1,0g



Môi trường nuôi cấy nấm men đặc (MT3):
MT3 = MT2 

2.1.3. Thiết bị
Bảng 2.2: Thiết bị, dụng cụ
Tên thiết bị
Nguồn gốc

Sanyo - 
Cân phân tích
Satorious - 

Satorious - 

ALP - 




T
2

Máy ly tâm






Ohaus- 


2.2. Nội dung nghiên cứu

2.2.1. Khảo sát một số thông số lên quá trình nuôi cấy Saccharomyces boulardii
 
 
 
 
2.2.2. Khảo sát khả năng sống sót của Saccharomyces boulardii trong quá trình
đông khô với sữa gầy
        Saccharomyces boulardii trong quá trình

16


        Saccharomyces boulardii trong quá trình

2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.1. Phương pháp nhân giống
             

              



2.3.2. Phương pháp nuôi cấy tạo dịch tế bào



nón trong 

2.3.3. Phương pháp đông khô
 Chuẩn bị mẫu:







-
