Nghiên cứu chiết xuất phân lập một số flavonoid từ lá cây ô đầu trồng ở tỉnh hà giang

BỘ Y TẾ
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI




NGUYỄN THỊ THỦY

NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT,
PHÂN LẬP MỘT SỐ FLAVONOID TỪ
LÁ CÂY Ô ĐẦU TRỒNG Ở
TỈNH HÀ GIANG

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ



HÀ NỘI-2014


BỘ Y TẾ
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

NGUYỄN THỊ THỦY

NGHIÊN CỨU CHIẾT XUẤT,
PHÂN LẬP MỘT SỐ FLAVONOID TỪ
LÁ CÂY Ô ĐẦU TRỒNG Ở
TỈNH HÀ GIANG

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

Người hướng dẫn :


Nơi thực hiện :



HÀ NỘI - 2014


LỜI CẢM ƠN

, 
 

TS. Nguyễn Quốc Huy,
ThS. Vũ Đức Lợi, 

 
 , 

DS Tạ Khắc Công
,
 


 
Sinh viên








MỤC LỤC



 1
 2
 2
 3
 3
 6
        AVONOID TRONG
CHI ACONITUM 12
        
 15
 15
 16
 16
 17
 17
 17

 17

 18
  21
 21
 21
 21
Á  23
 24
 31
 32
32


DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT
DM : dung môi.
CHCl
3
: chloroform.
EtOAc : ethyl acetat.
EtOH : ethanol.
MeOH : methanol.





DANH MỤC CÁC HÌNH

A.burnatii,
A.variegatum……………………………………………………………………… 4
 A.angustifoliu

 
Hình 2.2.  
Hình 3.1. 
AlCl
3
21
Hình 3.2. 
acid boric/ oxalic (2:1) 22
Hình 3.3.  23
Hình 3.4.  26




DANH MỤC CÁC BẢNG

1. 
Aconitu 6
       kaempferol    
Aconitum 8

Aconitum 11
 

1
H-NMR(500MHz) và
13
C-NMR(125MHz) F3
24


1
H-NMR(500MHz) và
13
C-NMR(125MHz) F6
27


1


ĐẶT VẤN ĐỀ
              
 
 


             
            


*
, ROO
*



-

- 



 

Nghiên cứu chiết xuất, phân lập một số flavonoid từ lá cây Ô đầu trồng
ở tỉnh Hà Giang”.

1. C 
2.  flavonoid .
2


CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN
1.1. Đặc điểm thực vật
Aconitum 
Aconitum 
[8]:



Hoàng liên (Ranunculales)

Chi Aconitum L.
Chi Aconitum là 
Aconitum 
(subgenera) là [10], [5]:
- Phân chi Aconitum L.
- Phân chi Lycotonum (DC.) Petermann
- Phân chi Gymnaconitum (Stapf.) Rapaics.
Aconitum 




- 
- - Lai Châu
[5], [9].
3


-  




 Lào Cai có tên
A. carmichaeli Debx [5].
1.2. Thành phần hóa học

Aconitum L 
Alcaloid diterpenoid: aconitin, lappaconin, ranaconin

và các amin (dopamin, N  methyladrenalin, tyramin, ), ngoài ra còn có

 






M

A.burnatii, A.variegatum 
4





n-hexan

CHCl
3,


CHCl
3
: MeOH (9:1)
MeOH





  

A.burnatii A.variegatum
Hình 1.1. Quy trình chiết xuất, phân lập flavonoid từ loài
A.burnatii, A.variegatum.
(1) Quercetin-3-O--D-glucopyranoside-7-O-(6-E-p-coumaroyl)--D-
glucopyranosyl---L-rhamnopyranoside.
(2) Quercetin-3-O--D-glucopyranoside-7-O--D-glucopyranosyl---

L-rhamnopyranoside.
(3) Quercetin-3-O--D-glucopyrano-side-7-O-(6-E-caffeoyl)--D-
glucopyranosyl---L-rhamnopyranoside.
(4) Kaempferol 3-O--D-galactopyranoside-7-O--L-arabinopyranoside
(5) Quercetin 3-O--D-glucopyranoside.
(6) Kaempferol 3-O--D-glucopyranoside.

5


A.angustifolium [10]



n-hexan

CH
2
Cl
2
, CH
2
Cl
2
: MeOH (9:1)
MeOH




   
Hình 1.2. Quy trình chiết xuất, phân lập flavonoid từ loài
A.angustifolium.

(1) Kaempferol-7-O-(6-E-caffeoyl)-b-D-glucopyranosyl--a-L-
rhamnopyranoside-3-O-b-D-glucopyranoside.
(2) Kaempferol-7-O-(6-E-p-coumaroyl)-b-D-glucopyranosyl-(1→ 3)-a-L-
rhamnopyranoside-3-O-b-D-glucopyranoside.
(3) Quercetin-7-O-b-D-glucopyranosyl-(1 → 3)-a-L-rhamnopyranoside-3-O-
b-D-glucopyranoside.
(4) Quercetin-7-O-(6-E-caffeoyl)-b-D-glucopyranosyl-(1→ 3)-a-L-
rhamnopyranoside-3-O-b-D-glucopyranoside .
6




Aconitum
.
 
* Nhóm dẫn chất Quercetin
Aconitum 

A.vulparia L, A.napellus L
Bảng 1.1. Flavonoid thuộc nhóm dẫn chất quercetin phân lập từ chi
Aconitum
TT
Tên chất

Tên loài
TL
TK
1
3-O--D-glucopyranosyl--(4-O-trans-p-
coumaroyl)--L-rhamnopyranosyl---D-
glucopyranosyl]-7-O--D-glucopyranosyl--
-L-rhamnopyranosyl]- quercetin
A. naviculare
(Brühl) Stapf
[14]
2
Quercetin-7-O-(6-E-caffeoyl)--D-glucopyranosyl-
--L-rhamnopyranoside-3-O--D-
glucopyranosid
A.angustifolium
Bernh. ex Rchb.
[28]
3
Quercetin-7-O--L-arabinopyranoside-3-O--
acetyl)--D-galactopyranosid
A.angustifolium
Bernh. ex Rchb.
[28]
4
Quercetin-7-O--D-glucopyranosyl---L-
rhamnopyranoside-3-O--D-glucopyranosid
A.angustifolium
Bernh. ex Rchb.
[28]

5
Quercetin-3,7-di-O--rhamnopyranosid
A. vulparia L.
[19]
6
Quercetin-3,7-dirhamnosid
A. vulparia L.
[19]
7


7
Quercetin-3-glucoside-7-rhamnosid
A. vulparia L.
[19]
8
Quercetin-3-O--D-glucopyranosyl--(4-O-
(E-p-coumaroyl))--L-rhamnopyranosyl---
D-galac-topyranoside))-7-O--L-rhamnopyranosid
A. anthora L.
[16]
9
Quercetin-3-O-(6-trans-caffeoyl)--glucopyranosyl-
--glucopyranoside-7-O--rhamnopyranosid
A. napellus L.
[18]
10
Quercetin-3-O-(6-trans-caffeoyl)--glucopyranosyl-
--glucopyranosyl-7-O--rhamnopyranosid
A. napellus L.

[18]
12
Quercetin-3-O-(6-trans-p-coumaroyl)--
glucopyranosyl---glucopyranoside-7-O--
rhamnopyranosid
A. napellus L.
[18]
13
Quercetin-3-O-(6-trans-p-coumaroyl)--
glucopyranosyl---glucopyranosyl-7-O--
rhamnopyranosid
A. napellus L.
[18]
14
Quercetin-3-O--L-rhamnopyranosyl ---D-
galactopyranoside-7-O- -L-rhamnopyranosid
A. anthora L.
[16]
16
Quercetin-3-O-glucosid
A. jaluense
Kom.
[15]
17
Quercetin-3-O-glucoside-7-O-rhamnosid
A. jaluense
Kom.
[15]
18
Quercetin-3-O-rhamnosylglucosid

A. jaluense
Kom.
[15]
19
Quercetin-3-O-ß--transcaffeoyl)-ß-
-ß-glucopyranoside-7-O-ß-D-
glucopyranosid
A. hetrophyllum
Wall
[27]
8


20
Quercetin-3-O--l-rhamnopyranosyl-(1  2)--d-
glucopyranosyl-(1  3)--l-(4-O-trans-p-
coumaroylrhamnopyranosyl)-(1  6)]--d-
galactopyranoside-7-O--l-rhamnopyranosid
A. tanguticum
(Maxim.) Stapf
[18]
21
Quercetin-3-O--(2"-acetyl) galactopyranoside-7-O-
-arabinopyranosid
A. paniculatum
Lam.
[24]
22
Quercetin-3-O--D-glucopyranosid
A. variegatum

L.
[29]
23
Quercetin-3-O--D-glucopyranoside-7-O-(6-E-
caffeoyl)--D-glucopyranosyl---L-
rhamnopyranosid
A. burnatii
Gáyer
[29]

* Nhóm dẫn chất Kaempferol
Aconitum khác

Bảng 1.2. Flavonoid thuộc nhóm dẫn chất kaempferol phân lập từ chi
Aconitum
TT
Tên chất
Tên loài
TLTK
1
Kaempferol-3-(p-coumarylrutinoside)-7-
glucosid
A.columbianum Nutt.
[11]
2
Kaempferol-3-gentiobioside-7-
(caffeylarabinosy1rhamnoside)
A.noveboracense
A.Gray ex Coville
[11]

3
Kaempferol-3-glucoside-7-rhamnosid
A. vulparia L.
[19]
4
Kaempferol-3,4-di-hydroxyphenethyl-ß-
glucopyranoside
A. napellus L.
[18]
9


5
3- O-[3-O-(3,4-Di-O-acetyl-ß-
xylopyranosyl)-ß-rhamno-pyranosyl]-7-
O--rhamnopyranosyl)-kaempferol
A. barbatum Patrin ex
Pers.
[25]
6
3-O-((ß-D-glucopyranosyl --(4-O-
(E-p-coumaroyl))--L-rhamnopyranosyl-
-ß-D-galactopyranoside))-7-O--
L-rhamnopyranosid
A. anthora L.
[16]
7
3-O--D-glucopyranosyl--(4-O-
trans-p-coumaroyl)--L-
rhamnopyranosyl---D-

glucopyranosyl]-7-O--D-
glucopyranosyl---L-
rhamnopyranosyl]-kaempferol
A. naviculare (Brühl)
Stapf
[14]




9
delphinidin 3-rutinoside-7-(di-p-
coumaryldiglucoside)
A. chinense
[22]
10
Kaempferol-3-(caffeylglucoside)-7-
glucosid
A.noveboracense A.Gray
ex Coville
[11]
11
Kaempferol-3-glucoside-7-(p-
coumarylglucosid
A.noveboracense A.Gray
ex Coville
[11]
12
Kaempferol-3-O--L-rhamnopyranosyl-
- -D-galactopyranoside-7-O--L-

rhamnopyranosid
A. anthora L.
[16]
13
Kaempferol-3-O--Lrhamnopyranosyl-
- -D-galactopyranoside-7-O--
Lrhamnopyranosid
A. anthora L.
[16]
10


14
Kaempferol-7-O-(6-E-caffeoyl)--D-
glucopyranosyl---L-
rhamnopyranoside-3-O--D-
glucopyranosid
A. angustifolium Bernh.
ex Rchb.
[28]
15
Kaempferol-7-O-(6-E-p-coumaroyl)--
D-glucopyranosyl---L-
rhamnopyranoside 3-O--D-
galactopyranosid
A. angustifolium Bernh.
ex Rchb.
[28]
16
Kaempferol-7-O-(6-E-p-coumaroyl)--

D-glucopyranosyl---L-
rhamnopyranoside-3-O--D-
glucopyranosid
A. angustifolium Bernh.
ex Rchb.
[28]
17
Kaempferol-3,7-di-O--
rhamnopyranosid
A. vulparia L.
[19]
18
Kaempferol-3,7-dirhamnosid
A. vulparia L.
[19]
19
Kaempferol-3,7-di-rhamnosid
A. vulparia L.
[19]
20
Kaempferol-3-O--D-
-(4-O-(E-p-
coumaroyl))--L-rhamnopyranosyl-
- -D-galactopyranoside))-7-O--
L-rhamnopyranosid
A. barbatum Patrin ex
Pers.
[25]
21
Kaempferol-3-O--D-glucopyranosyl-

-(4-O-(E-p-coumaroyl))--L-
rhamnopyranosyl---D-
galactopyranoside))-7-O--L-
rhamnopyranosid
A. anthora L.
[16]
11


22
Kaempferol-3-O-(6-trans-caffeoyl)--
glucopyranosyl---
glucopyranoside-7-O--
rhamnopyranosid
A. napellus L.
[18]
23
Kaempferol-3-O-(6-trans-p-coumaroyl)-
-glucopyranosyl---
glucopyranoside-7-O--
rhamnopyranosid
A. napellus L.
[18]
24
Kaempferol-3-O-arabinosylglucosid
A. jaluense Kom
[15]


12

1.3. Tác dụng sinh học của thành phần flavonoid trong chi Aconitum
        
Aconitum
Bảng 1.3. Tác dụng sinh học của một số flavonoid phân lập được từ chi
Aconitum
Tác


Loài


Tltk

oxy hóa









Aconitum
anthora L
2008
Gelsomia
Fico và


[16]







ascorbic.
Aconitum
napellus sp.
Lusitanicum
2006
J.C.Luis

[21]
13


- 

   
   
  -
carotene và linoleic

-

1h(58,9%).

Aconitum
napellus subsp.
Tauricum,
Aconitum
napellus subsp.
Neomontanum,
Aconitum
paniculatum,
Aconitum
vulparia.
2003
A.Braca

[11]
Các flavonol





acid ascorbic, trolox.


Aconitum
burnatii Gayer,
Aconitum
varigatum L
2010

Alessandra
Braca và

[15]
Tác

kháng



Pseudomonas
aeruginosa,
Staphylococcus
aureus, Escherichia
Aconitum
napellus
2012
Ekta
menghani

[18]
14


coli, Proteus
vulgaris, Klebsiella
pneumoniae, Shigella
sonnei, Trichophton
rubrum, Candida
albicans, Aspergillus

niger, Aspergillus
flavus.
Tác

khác





Aconitum
naviculare
2006
Gabbriella
Innocenti

[14]

Ghi chú:
 quercetin-3-O-(6-trans-caffeoyl)--glucopyranosyl---
glucopyranoside-7-O--rhamnopyranoside.
 quercetin-7-O-(6-trans-caffeoyl)--glucopyranosyl---
rhamnopyranoside-3-O--glucopyranoside.
 kaempferol3-O--D-galactopyranoside-7-O--L-
arabinopyranoside.
15


CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG, NGUYÊN VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP
NGHIÊN CỨU

2.1. Đối tượng nghiên cứu


         Aconitum carmichaeli
- 





khô 
0

















16

Hình 2.1. Mẫu tiêu bản giám định tên khoa học.
2.2. Nguyên liệu, hóa chất và thiết bị nghiên cứu

- Cân phân tích (Shimadzu AY220)
-  Sartorius)
- 
-  45).
- 
- 
- 
- -IR-8201 PC (Shimadzu)
- Máy LC-MS HP5989B (Hewlet-Parkard)
-
-.
--
-.
- 

254

17


- 
-.

- 

- 

3
), methanol (MeOH),
 
2
CO
3
10% (pH=8), acid HCl 10% (pH= 6),  
hòa, n-Hexan, EtOAc , CHCl
3,
MeOH.
- 
2.3. Phương pháp nghiên cứu
2.3.1. Nghiên cứu định tính flavonoid trong lá cây Ô đầu
2.3.1.1. Định tính flavonoid bằng các phản ứng hoá học đặc trưng [3]


Giang.


- 
 


- 
 

- 


18


 
3
 

3
5%.
2.3.1.2. Định tính bằng sắc ký lớp mỏng [3], [1]

-.
-    
254
       110
o

.
- 
+ Ethylacetat-acid acetic-acid formic-

+ Toluen-ethylacetat-aceton-acid formic (5:5:2:1).
- 
-
3

-  




3
110
0

.
2.3.2. Chit xut, phân lp hp chu

- 
0.040-0.063mm, 0.063-0.200mm        -
50m, FuJisilisa Chemical Ltd).
- 

- 
