TRNG I HC CN TH
KHOA NÔNG NGHIP & SINH HC NG DNG
-oOo-
VÕ MINH THÔNG
Lun vn tt nghip
Ngành: THÚ Y
n Th, 2013
KHO SÁT S VY NHIM VI SINH VT TRÊN
THT HEO TI C S GIT M GIA SÚC TP
TRUNG HUYN TRÀ CÚ TNH TRÀ VINH
i
TRNG I HC CN TH
KHOA NÔNG NGHIP & SINH HC NG DNG
-oOo-
Lun vn tt nghip
Ngành: THÚ Y
Tên tài:
n Th, 2013
Giáo viên hng dn:
PGS.TS Lu Hu Mãnh
Sinh viên thc hin:
Võ Minh Thông
MSSV: 3092641
p: Thú Y - K35
KHO SÁT S VY NHIM VI SINH VT TRÊN
THT HEO TI C S GIT M GIA SÚC TP
TRUNG HUYN TRÀ CÚ TNH TRÀ VINH
ii
TRNG I HC CN TH
KHOA NÔNG NGHIP VÀ SINH HC NG DNG
MÔN THÚ Y
tài: “Kho sát s vy nhim vi sinh vt trên tht heo ti c s git m
gia súc tp trung huyn Trà Cú tnh Trà Vinh”, do sinh viên Võ Minh
Thông thc hin ti phòng thí nghim Vi sinh – Min dch ca B môn Thú
Y, khoa Nông Nghip và Sinh Hc ng Dng, trng i Hc Cn Th t
tháng 8/2013 n tháng 12/2013.
n Th, ngày….tháng….nm 2013
Duyt B Môn
n Th, ngày…tháng…nm 2013
Duyt Giáo Viên Hng Dn
u Hu Mãnh
n Th, ngày… tháng… nm 2013
Duyt Khoa NN&SHD
iii
I CM T
Trong thi gian hc tp và rèn luyn di mái trng i hc Cn Th, Thy Cô là
nhng ngi ã dành bit bao tâm quyt cho s nghip trng ngi, ã truyn t
cho chúng tôi bit bao u quý báu chúng tôi làm hành trang vng bc vào
i. Hôm nay, c m ca tôi ã thành s tht, vi s phn u ca bn thân, tôi ã
hoàn thành lun vn tt nghip. Trong sut quá trình hc tp cng nh thi gian làm
lun vn, tôi ã nhn c s giúp ca rt nhiu ngi. Tôi không bit nói gì
n ngoài li cm n chân thành nht gi n nhng ngi ã quan tâm, lo lng và
giúp tôi trong sut thi gian qua.
Xin chân thành cm n: s dy d, ng viên ca cha m và nhng ngi thân
trong gia ình ã to u kin và ng h tôi trong sut quá trình hc tp và làm
lun vn tt nghip; Ban ch nhim Khoa Nông Nghip và Sinh Hc ng Dng
Trng i hc Cn Th; Quý thy cô B môn Thú y và B môn Chn nuôi, Khoa
Nông Nghip và Sinh Hc ng Dng, trng i hc Cn Thã truyn t cho
tôi nhng kin thc quý báu nhm trang b cho tôi bc vào i; Thy Lu Hu
Mãnh – ngi ã ht lòng ch bo, khuyên rn, giúp và ng viên tôi hoàn thành
lun vn tt nghip; Xin chân thành cm n cô Nguyn Thu Tâm ngi ã hng
n, quan tâm và giúp tôi hoàn thành lun vn; Các anh ch cao hc khóa 18 ã
giúp tôi trong quá trình thc hin và hoàn thành lun vn này; Ban giám hiu
trng i hc Cn Th; Ban lãnh o chi cc Thú Y tnh Trà Vinh ã ht lòng h
tr, to mi u kin cho tôi trong sut quá trình ly mu.
Võ Minh Thông
iv
C LC
Trang
Trang t a i
Trang duyt ii
i cm t iii
c lc iv
Danh sách ký hiu, ch vit tt vii
iv
Danh sách bng viii
Danh sách s ix
Danh sách hình x
Tóm l c xi
Chng 1 T VN 1
Chng 2 - LC KHO TÀI LIU 3
2.1 Tình hình nghiên cu ngoài nc và trong nc 3
2.1.1 Tình hình nghiên cu ngoài nc 3
2.1.2 Tình hình nghiên cu trong nc 4
2.2 c m mt s vi sinh vt thc phm 4
2.2.1 Salmonella 5
2.2.2 Escherichia coli 9
2.2.3 Staphylococcus aureus 13
2.2.4 ng vi s khun hiu khí 16
2.3 NGUN LÂY NHIM VI SINH VT VÀO THC PHM 17
2.3.1 Lây nhim t t nhiên 17
2.3.2 Nhim vi sinh vt trong quá trình git m và ch bin 18
2.3.3 Lây nhim vi sinh vt do vt môi gii lây truyn 18
2.4 Các phng pháp loi tr hoc làm gim s vy nhim ti lò m 19
v
2.5 Tiêu chun v kim nghim tht ti 19
Chng 3 PHNG TIN VÀ PHNG PHÁP NGHIÊN CU 20
3.1 Ni dung nghiên cu 20
3.2 Phng tin nghiên cu 20
3.2.1 Thi gian và a m thc hin 20
3.2.2 Vt liu thí nghim 20
3.3 Phng pháp nghiên cu 20
3.3.1 Phng pháp thu thp và bo qun mu 20
3.3.1.1 Ly mu 20
3.3.1.2 Bo qun và lu mu 22
3.3.2 Phng pháp phân tích mu 23
3.3.2.1 Chun b mu phân tích vi sinh vt 23
3.3.2.2 Phng pháp nh lng tng s vi khun hiu khí 24
3.3.2.3 Phng pháp nh lng Coliforms 25
3.3.2.4 Phng pháp nh lng E. coli 28
3.3.2.5 Phng pháp nh lng Staphylococus aureus 30
3.3.2.6 Phng pháp nh lng Clostridium perfringens 32
3.3.2.7 Phng pháp nh tính Salmonella spp 34
3.3.3 Các ch tiêu theo dõi 36
3.3.4 Phng pháp x lý s liu 36
Chng 4 KT QU VÀ THO LUN 37
4.1 Kt qu kho sát tình hình git m heo và v sinh thú y ti lò m 37
4.2 Kt qu kho sát các ch tiêu vi sinh vt ca các yu t môi trng và tht
heo ti lò m 42
4.2.1 V nc s dng 43
vi
4.2.2 V sàn git m và k pha lóc tht 43
4.2.3 V tht heo ti lò m 44
4.3 So sánh các ch tiêu vi sinh vt trên tht ti vi TCVN 7046:2009 46
Chng 5 KT LUN VÀ NGH 48
5.1 Kt lun 48
5.2 ngh 48
TÀ I L IU THAM K HO 49
PH CHNG 52
vii
DANH SÁCH CH VIT TT
Ch vit tt Ch vit y Ý ngha
BGA Brilliant Green Agar
BGBL Brilliant Green Bile Lactose Broth
BPA Baird Parker Agar
BPW Buffered Peptone Water
CFU Colony Forming Unit n v khun lc
C. perfringens Clostridium perfringens
E. coli Escherichia coli
MPN Most Probable Number
MR Methyl Red
MR-VP MR-VP Broth
ml Mililiter n vo lng
m Meter n vo lng
g Gam n vo lng
NA Nutrient Agar
NB Nutrient Broth
OIE Office Internation des Epizooties
QCVN Quy chun Vit nam
RV Rappaport and Vassiliadis
S. aureus Staphylococcus aureus
SC Simmons Citrate Agar
TBX Tryptone Bile X – Glucuronide Agar
TCVN Tiêu chun Vit Nam
TSVKHK ng s vi khun hiu khí
TSI Tripple Sugar Irron Agar
VP Voges- Proskauer
XLD Xylose Lysine Deoxycholate Agar
viii
DANH SÁCH BNG
ng a bng Trang
1 Các ch tiêu vi sinh vt ca tht ti 19
2 Ký hiu mu và thi gian ly mu 22
3 u kin bo qun và thi gian lu mu 23
4 Kt qu kho sát t l nhim các ch tiêu vi sinh vt ca các yu t môi
trng và tht heo ti ti lò m
42
5 T l nhim các loi vi sinh vt trên tht heo ti ti c s git m 44
6 Kt qu so sánh các ch tiêu vi sinh vt trên tht heo vi TCVN
7046:2009 ti c s git m gia súc tp trung huyn Trà Cú tnh Trà
Vinh
46
ix
DANH SÁCH S
Tên s Trang
1 S lây nhim Salmonella trong t nhiên 8
2 Pha loãng mu thành 3 nng pha loãng 10
-1
, 10
-2
, 10
-3
24
3 Quy trình nh lng tng s vi khun hiu khí (TCVN 7928:2008) 25
4 Quy trình nh lng Coliforms (TCVN 6848:2007) 27
5 Quy trình nh lng E. coli (TCVN 7924-1:2008) 28
6 Quy trình nh lng vi khun S. aureus (TCVN 4830-1:2005) 30
7 Quy trình nh lng C. Perfringens (TCVN 4991: 2005) 32
8 Quy trình phân lp Salmonella spp. (TCVN 4829:2005) 35
x
DANH SÁCH HÌNH
Hình Tên hình Trang
1 V trí ly mu trên thân tht heo (QCVN 01-04:2009/BNNPTNT) 21
2 Khun lc TSVKHK trên môi trng NA 24
3 Khun lc Coliforms trên môi trng VRBL 26
4 Phn ng sinh hóa khng nh Coliforms 26
5 Khun lc E. coli trên môi trng TBX 29
6 Khun lc S. aureus trên môi trng Baird Parker 31
7 Phn ng sinh hóa khng nh S. aureus 31
8 Khun lc C. perfringers trên môi trng SC 33
9 Phn ng sinh hóa khng nh C. perfringers 33
10 Khun lc Salmonella spp. trên môi trng BGA 35
11 Phn ng sinh hóa khng nh Salmonella spp. 36
12 Toàn cnh mt tin c s git m 37
13 Nn sàn tích t lông, huyt, cht thi 38
14 Khu nuôi nht không có ô cách ly thú bnh 39
15 S dng nc ngm ra thân tht 39
16 Làm lòng ngay ti khu vc ra thân tht 39
17 Công nhân không mc bo h lao ng 41
18 Thân tht xôi ch nhân viên thú y kim dch óng du 41
19 K pha lóc loang l 41
xi
TÓM LC
tài c tin hành t tháng 8 nm 2013 n tháng 12 nm 2013 ti c s git
gia súc tp trung huyn Trà Cú, tnh Trà Vinh. Mc tiêu ca tài nhm
ánh giá mc nhim vi sinh vt trên quy tht heo, ngun nc s dng, sàn
git m và k pha lóc ti lò m theo TCVN 7046:2009 thông qua vic phân lp
các vi khun nh TSVKHK, Coliforms, E. coli, S. aureus, C. perfringens,
Salmonella spp.
t quc ghi nhn nh sau:
- Qua kho sát 24 mu tht heo thì t l nhim TSVKHK và Coliforms là 100%,
E. coli và S. aureus là 87,5%, C. perfringens 54,16%, Salmonella spp. là 4,16%.
- Kt qu kim tra vi sinh vt trên 8 mu nc s dng: t l nhim TSVKHK là
100%, Coliforms 87,5% và E. coli là 14,28%, không phát hin S. aureus, C.
perfringens và Salmonella spp.
- Kim tra 8 mu sàn git m: t l nhim TSVKHK, Coliforms, S. aureus là
100%, E. coli 87,50%, C. perfringens 37,50% và Salmonella spp. là 12,50%.
- Kim tra 8 mu k pha lóc tht: t l nhim TSVKHK, Coliforms, E. coli là
100%, S. aureus 87,50%, C. perfringens 50% và Salmonella spp. 25%.
- So sánh các ch tiêu vi sinh vt trên tht heo vi TCVN 7046:2009: Không có
u tht heo nào t cht lng dùng làm thc phm.
khóa: Tht heo, lò m heo, TSVKHK, Coliforms, E. coli, S. aureus, C.
perfringens, Salmonella spp.
1
Chng 1 T VN
Ngày nay, khi mt dân s ngày càng gia tng, xã hi ngày càng phát trin thì
nhu cu s dng thc phm cng tng cao c v s lng ln cht lng. Quan
trng hn là ngun thc phm c ch bin t tht ã tr thành loi thc phm
n thit trong mi ba n hàng ngày ca mi gia ình, bi tht là sn phm cung
p cht m vi y các acid amin và cân i các dng cht khác. Chính vì
th, tht cng là môi trng thun li cho vi sinh vt có hi phát trin gây h
ng tht và gây bnh cho con ngi. Vì vy, v sinh tht và các sn phm ng
t là mt vn cp thit góp phn bo v và nâng cao sc khe cho con ngi.
Theo Phm Vn ông (2011), mt thc t cho thy rt nhiu lò m gia súc, gia
m không tuân th v v sinh an toàn thc phm, nhiu ni không qua kim soát
thú y. Nêu thc trng áng báo ng là qua kim tra, giám sát tng cng 735 mu
tht trâu, bò, heo và gia cm ã phát hin ti 453 mu, tng ng 61,6% không
t tiêu chun v sinh thú y và v sinh an toàn thc phm. c bit, tht nhim vi
sinh vt có th gây hi nu ngi tiêu dùng không n chín, ung chín.
Theo thng kê ca Cc An toàn v sinh thc phm, trong nhng nm gn ây
toàn quc ã ghi nhn 927 v ngc thc phm vi 30.733 ngi b ngc,
trong ó có 229 ngi cht. Trung bình mi nm xy ra 185 v vi 6.147 ngi
c và 46 ngi cht/nm. Trong só có khong 33 – 49% s v là do vi sinh
t gây ra (Bùi Mnh Hà, 2006). Trong nm 2011, c nc ghi nhn 148 v thc
phm vi 4.700 ngi mc, 1.950 ngi nhp vin vi 18 ngi t vong. Nguyên
nhân gây ngc do vi sinh vt chim t l khá cao, u này nói lên công tác
qun lý v sinh an toàn thc phm ca chúng ta cha tt, nht là thc phm có
ngun gc ng vt.
Hin nay trên a bàn tnh Trà Vinh có trên 40 lò git m gia súc, phân tán
nhiu m khác nhau, nhng quan trng và qui mô ln nht là lò m thuc
huyn Trà Cú tnh Trà Vinh. Tính n thi m này cha có mt công trình
nghiên cu khoa hc nào c thc hin ti Trà Vinh v lnh vc nhim vi sinh
t và an toàn v sinh thc phm có ngun gc tng vt.
2
Xut phát t nhng vn trên, vi ý tng kho sát thc a có thông tin
chung v an toàn v sinh thc phm có ngun gc ng vt, chúng tôi tin hành
thc hin tài: “Kho sát s vy nhim vi sinh vt trên tht heo ti c s
git m gia súc tp trung huyn Trà Cú tnh Trà Vinh”.
c tiêu tài
- Kho sát mc nhim vi sinh vt trên quy tht heo, ngun nc s dng, b
t sàn git m và k pha lóc ti lò m.
- So sánh các ch tiêu vi sinh vt trên tht vi tiêu chun Vit Nam TCVN
7046:2009, Tht ti - Yêu cu k thut do B Khoa hc và Công ngh công b.
3
Chng 2 LC KHO TÀI LIU
2.1 Tình hình nghiên cu ngoài nc và trong nc
2.1.1 Tình hình nghiên cu ngoài nc
Theo Walton (1972), con vt b bnh do vi khun Salmonella thì mc hin
din ca vi khun trong 1 gam phân là 10
8
vi khun/1gam phân, khi con vt
mang trùng s thi 10
4
vi khun/1 gam phân.
Bonardi et al. (2002), ã kho sát 150 heo ti hai c s git m min Bc nc
Ý cho thy s nhim khun Salmonella cht cha trong rut là 36,7%, cung
ng 5,3%, trên thân tht 6,0%. Có 10 serotype c phân lp nhng ph bin là
Salmonella derby 37,8%, Salmonella bredeny 21,6%, Salmonella typhimurium
14,8%. Vi E. coli n sinh verocytotoxcin (VTEC) O
157
c phân lp t cht
cha trong rut là 0,7%, thân tht heo 0,7% và phân là 2,7% nhng không phi
chng E. coli O
157
. u ó cho thy các chng vi khun gây ngc thc phm
u có mt ây.
Theo Lo Fo Wong et al. (2002), có chui liên quan gia heo nhimm Salmonella
truyn lây cho nhng con heo khác khi nht chung. c bit trong quá trình vn
chuyn chúng n ni git m, b stress làm tng thi mm bnh. Các ng lây
nhim là bài tit qua phân, ming và da.
Emilia Do Socrro et al. (2004), ã thí nghim kim tra 120 mu swab trên thân
tht heo qua các công n; sau khi trng co lông; trc khi ly ni tng; sau khi
y ni tng x tht và sau tr 24 giã tr lnh thì t l Salmonella là 10%,
6,7%, 16,7% và 13,33% còn S. aureus là 10%, 16,7%, 13,33% và 6,7%. u
này cho thy s khác bit không có ý ngha các công n này.
Spescha et al. (2006), thông qua mt nghiên cu vi 200 thân tht heo t 2 lò git
gia súc kim tra tng s vi sinh vt sng (TVC: Total Viable bacteria
Count) và s hin din ca Enterobacteriaceae và S. aureus ng tính vi
coagulase (CPS: Coagulase – Positive S. aureus) bng k thut swab kép khô -
t c, bng, lng và ùi, cho thy: trc khi các thân tht cho vào h nc
trng thì TVC trung bình t 5,0 n 6,0 log CFU/cm
2
và Enterobacteriaceae và
CPS c tìm thy trên tt c các thân tht. c s git m A. TVC trung bình
và t l thân tht dng tính vi Enterobacteriaceae gim sau khi trng ln lt
là 1,9 log CFU/cm
2
và 12%, sau khi thui lông là 1,9 log CFU/cm
2
và 66%, sau
khi thi hi lnh là 2,3 log CFU/cm
2
và 17% và sau co lông là 3,4 log CFU/cm
2
và 100%. c s git m B, TVC trung bình và t l thân tht dng tính vi
Enterobacteriaceae và CPS gim sau khi trng ln lt là 2,4 log CFU/cm
2
, 29%
và 20%, sau khi thi hi lnh là 2,6 log CFU/cm
2
, 55% và 77%, và sau co - thui
4
lông là 4,7 log CFU/cm
2
, 97% và 100%. Trong s các v trí trên thân tht thì c là
i có t l vy nhim cao hn t giai n chc huyt cho n giai n làm
nh c hai c s git m.
Theo Hassan Ali et al. (2010) tin hành kim tra tn s ô nhim trong tht bán
. Vi mu tht nguyên (250) và bnh phm b mt (90) t các thit b ch bin
tht và môi trng xung quanh c phân tích ô nhim vi sinh. Kt qu 84%
c tìm thy b ô nhim vi các loài vi khun nh Klebsiella, Enterobacter,
Staphylococcus aureus và Bacillus subtilis. ng s vi khun hiu khí dao ng
10
8
- 10
10
CFU/g hoc cm
2
.
Theo McDowel et al. (2007), nghiên cu v t l nhim Salmonella trên heo lò
bc Ireland cho thy trong tng s 513 mu thu thp t 4 lò m thì
Salmonella c phân lp là 31,4% t cht cha manh tràng và 40,0% mu swab
b mt thân tht sau khi tách lòng.
2.1.2 Tình hình nghiên cu trong nc
Theo Lê Vn m (2010), nghiên cu lò m tp trung th xã V Thanh tnh Hu
Giang thì môi trng git m b nhim vi sinh vt khá cao. Trên sàn git m và
ngun nc s dng t l nhim TSVKHK, E.coli là 100%, Salmonella spp. là
12%. Không phát hin s hin din ca vi khun Staphylococcus aureus và
Bacillus cereus. T l nhim vi sinh vt trên tht heo ti ti lò m: TSVKHK, E.
coli là 100%, Salmonella spp. 18,75%, Staphylococcus aureus 12,5%, không
phát hin s hin din ca vi khun Bacillus cereus.ánh giá cht lng quy
tht so vi tiêu chun Vit Nam TCVN 7046:2002 không có mu tht nào t tiêu
chun cho phép làm thc phm. T l mu không t trên tng ch tiêu:
TSVKHK 12,5%, E. coli 100%, S. aureus 12,5% và Salmonella spp. 18,75%.
Theo oàn Trí Dng (2011), kho sát mu tht heo ti hai lò git m th công và
bán th công thuc tnh An Giang thì có t l nhim ca TSVKHK, E. coli, S.
aureus và Salmonella spp. n lt là 100%, 87,50%, 29,17%, 16,67% và 100%,
62,50%, 12,50%, 5,56%. Cht lng ca tht lò m bán th công theo tiêu
chun tht ti TCVN 7046:2009 ch tiêu cm quan, lý hóa và vi sinh vt t t
16,67%, lò m th công không có mu tht t theo tiêu chun cht lng
tht ti.
2.2 c m mt s vi sinh vt thc phm
Trong các ch tiêu vi sinh vt gây ngc i vi thc phm, ngi ta thng
quan tâm nhiu nht n các vi khun gây bnh nh Salmonella spp., S. aureus,
E. coli, Coliforms. Khi gia súc khe mnh trong ng tiêu hóa có nhiu loi vi
khun, phân gia súc có th cha khong 10
2
vi khun/g bao gm nhiu loi vi
khun hiu khí và ym khí khác nhau. Theo H Vn Nam (1996), phân heo khe
5
phân lp có t l mt s vi khun rt cao nh E. coli 100%, Salmonella spp. 40 -
80% ngoài ra còn có Staphylococcus, Streptococcus, Bacillus Vi khun tn ti
trên da ca ng vt, nu không c v sinh tm ra trc khi git m s không
th loi b phn ln vi sinh vt trên b mt.
2.2.1 Salmonella
Nhng thc n gây ngc phn ln có ngun gc là ng vt nh tht gia súc,
gia cm, trng, sa b nhim khun. Khi un nóng s làm gim hiu lc hot
ng ca Salmonella, nên thc n ch bin ngui, hoc ch bin nóng, ngui
b nhim khun và ngc hn ( Quang Huy, 2007).
Ngc do Salmonellaã c bit t rt lâu, trong ó các v ngc thng
hay gp ch yu là do Salmonela typhimurium, Salmonella cholera suis và
Salmonella enteritidis; ngoài ra còn có các loi S. thompson, S. derby, S.
newport, S. anatumNgc do Salmonella là trng hp ngc thc phm
thng gp nht (Nguyn Ngc Tuân, 2002).
Theo Nguyn Vnh Phc (1977) thì phn ln các loài vi khun Salmonella u
có th gây bnh cho mt s gia súc gia cm, là mt trong nhng nguyên nhân
chính gây ng c thc phm cho ngi, c bit là Salmonella enteritidis và
Salmonella typhimurium khi ngi n hoc ung phi thc n b nhim chúng.
Do ó, vic chn oán chính xác các loi trc khun thng hàn ng vt có ý
ngha rt quan trng v mt bo v sc khe cng ng, v sinh công cng, s
phòng bnh truyn nhim.
Vi khun Salmonella có mt trong ng vt khe mnh, khi gia súc mt hay kit
c trc khi h tht các vi sinh vt s vào rut, n tht và các c quan khác, khi
tht do tht tip xúc vi cht cha rut, d dày, da lông, phân gia súc nhim
Salmonella là nguyên nhân vy nhim vi khun vào thân tht (Hoàng Tích Mnh
và Hà Huy Khôi, 1997).
Trong u kin git m gia súc Vit Nam hin nay, s vy nhim không th
nào tránh khi khi mà a phn các công n ca qui trình git mu din ra
trên sàn nhà trong mt không gian cht hp (Nguyn Ngc Tuân, 1997).
c tính vi khun
Salmonella là vi khun thuc h Enterobacteriaceae m hn 2.000 loi vi trên
600 type huyt thanh. a s chúng sng hoi sinh trong ng tiêu hóa, s khác
ng ngoài t nhiên, ch có mt s loi gây bnh cho ngi và ng vt.
c m hình thái
Salmonella là mt loi vi khun, hình gy, ngn, hai u tròn, kích thc 0,4 -
0,6 x 1,0 - 3,0 µm không hình thành giáp mô và nha bào. a s các loài
6
Salmonella u có kh nng di ng mnh do có t 7 - 12 lông xung quanh thân,
vi khun d bt màu vi các thuc nhum thông thng, gram âm, khi nhum vi
khun bt màu u toàn thân hoc hi m hai u (Nguyn Nh Thanh et al.,
1997).
c tính nuôi cy
Salmonella a hiu khí va k khí không bt buc, chúng d nuôi cy trên các
môi trng thông thng. Nhit thích hp ca chúng là 37
o
C, nhng có th
phát trin c t 6 - 42
o
C, pH thích hp là 7,6, phát trin c pH 6 - 9. Trên
môi trng BGA khun lc có màu hng. Salmonella gây bnh cho gia súc, sinh
trng u kin hiu khí kém hn u kin k khí (Nguyn Nh Thanh et al.,
1997).
c kháng
Vi khun Salmonella có sc chu ng khá tt vi các tác ng ca môi trng
bên ngoài. Theo bi bm chúng sng c 80 ngày, trong phân rác chúng sng
trong vòng 4 nm. Chúng cht trong canh trùng nhit 60
o
C trong 30 phút,
nhit 70
o
C trong 25 phút, nhit 75
o
C trong 5 phút; vô hot chúng trong
vòng 10 phút 80
o
C và 1 - 2 gi 60 - 65
o
C. c bit vi khun Salmonella chu
c nhit thp, 10
o
C chúng sng c trong vòng 115 ngày, nhit lnh
ng c 7 tháng.
i vi hóa cht, Salmonella ra có sc chu ng cao. Dung dch xút (NaOH)
tiêu c chung tri phi pha trong nc là 10% hoc trong nc m 4%
60
o
C thì mi có tác dng dit c Salmonella. Trong thc phm Salmonella
ng khá lâu. Nu cho tht vào nc ang sôi phi ct nh khong 200g dày 5 - 6
cm thì mi git cht c Salmonella. Salmonella mt kh nng sinh sng trong
tht b ô nhim x lý bng dung dch 6 - 10% acid acetic trong vòng 14 - 16 ngày
(Nguyn Nh Thanh et al., 1997).
Salmonella có th sng trong tht p mui (29% nng mui) c 4 - 8
tháng 6 - 12
o
C. Kh khun bng phng pháp Pasteur cng tiêu dit c
Salmonella.
Nhit óng bng có th làm gim s lng vi khun Salmonella vn có th tn
i trong thi gian khá dài các thc phm óng bng nh tht gia súc, gia cm.
c tính sinh hóa
c tính sinh hóa ca Salmonella là không sinh Indole, lên men sinh hi ng
glucose và mannitol nhng không lên men saccharose và lactose, hu ht các
chng u sinh H
2
S và di ng (tr Salmonella pullorum và Salmonella
gallinarum). Salmonella có phn ng VP âm tính, phn ng MR dng tính (tr
7
Salmonella pullorum, Salmonella enteritidis và Salmonella cholera suis) (Trn
Linh Thc, 2006).
Nuôi cy: vi khun mc d dàng trên các môi trng dùng cho
Enterobacteriaceae. Ngi ta thng s dng các loi môi trng nh Mac
Conkey, EMB, SS, BGA,…
ch gây c
Theo Koupal (1997) và Nguyn Nh Thanh et al., (1997) Salmonella có hai loi
c t là ni c t và ngoi c t.
i c t ca Salmonella rt mnh, c t rut gây c thn kinh, hôn mê, co
git. Ni c t có hai loi gây xung huyt và mn loét. Ngoi c t ch hình
thành trong u kin in vivo và nuôi cy k khí. Ni c t b phá hy 100
o
C.
Ngoi c t ch phát hin c khi ly vi khun có c tính cao cho vào túi
colodion ri t vào bng chut lang nuôi. Sau 4 ngày ly ra, ri li cy
truyn nh vy t 5 - 10 ln, sau cùng em lc, nc lc này có kh nng gây
nh cho ng vt thí nghim. Ngoi c t ch hình thành trong u kin in
vivo và trong nuôi cy k khí. Ngoi c t tác ng vào h thn kinh và rut,
ngoi c t có th ch thành gii c t bng cách trn thêm 5% formol
37
o
C trong 20 ngày. Gii c t tiêm cho th s to ra kháng th ngng kt,
kháng th kt ta và th s có kh nng trung hòa vi c t ca vi khun.
Theo Nguyn Ngc Tuân (2002), khi Salmonella xâm nhp vào ng tiêu hóa s
gây viêm rut, phá hng t bào niêm mc rut và tit c t. c t s thm qua
thành rut vào máu, trong h tun hoàn, c t s tác ng lên h thn kinh vn
ng ca huyt qun, làm gim bn ca thành mao qun và gim chc nng
u tit thân thit ca c th.
Tính gây bnh
Theo Loidar và Baldrian (1991), phn ln Salmonella gây bnh cho gia súc u
có th gây bnh cho ngi vi chng ng c thc phm nh Salmonella
typhimurium, S. enteritidis, S. thompson, S. bareilly, S. anatum, S. cholerae suis.
Khi vào c th ngi, gia súc, gia cm gây nên chng nhim trùng huyt, tác
ng lên h thn kinh gây ri lon hot ng ca c th. Vi khun Salmonella có
th xâm nhp vào c th qua ng ming, thc n, nc ung, n rut non vi
khun chui qua niêm mc rut xâm nhp vào các hch bch huyt, dng li và
phát trin ó, ây là thi gian bnh. Khi sn sinh nhiu, mt s loi vi khun
ly gii và phóng thích ni c t, mt s khác theo h bch huyt vào máu gây
nhim trùng huyt. T máu vi khun có thi n các c quan trong c th và
gây nên các áp-xe. Tuy nhiên, vi khun thng khu trú bàng quang, hoc
nhân lên trong túi mt ri tit vào ng tiêu hóa. Salmonella gây bnh ng
8
rut cho ngi, gia súc và gia cm gi là bnh thng hàn và phó thng hàn. Vi
khun Salmonella có th tìm thy trong rut ngi, heo, gà,… và mt sng
t khe mnh. Trong u kin chm sóc, qun lý không tt làm cho sc
kháng ca con vt b gim sút thì Salmonella xâm nhp vào c quan ni tng và
gây bnh (Koupal, 1997).
Ngun lây bnh
Theo Lý Th Liên Khai (1999), các loi thc phm có cha Salmonella nh thc
phm giàu m ngun gc ng vt, tht sa, trng và các sn phm ca chúng.
Các thc phm khác nh da, nm men, ht bông giàu m, cá xông khói, sa
t, ko chocolate.
Theo Trn Th Phn et al., (2004), bò sát, gm nhm cng là tác nhân làm lan
truyn mm bnh. Chut ng ng Bng Sông Cu Long nhim Salmonella
i t l khá cao (19,3%).
m cn lu ý là nhng thc phm b nhim Salmonella thì protein ca thc
phm không b phân gii, tính cht lý hóa không b thay i. Mc dù vi khun
phát trin rt nghiêm trng nhng trng thái cm quan không thay i gì rõ rt
nên khó nhn bit c. Theo Betty và Hobbs (1998) Salmonella lây nhim theo
sau:
1 S lây nhim Salmonella trong t nhiên
(Food poisoning and food hygiene)
Thc n gia súc,
gia cm
Phân hu c
Nông tri
Gia cm
Tht
Ch, lò m
Ngi
n phm
tht
Tht
Heo; Trâu; Bò
n phm
trng
Trng
9
Do ng vt b nhim trc khi git tht: heo b bnh cha vi khun Salmonella
có trong máu, tht và c bit trong các ph tng gan, lách, rut.
Do b nhim trong và sau khi git tht: tht có th b nhim Salmonella do nc,
ng c cha ng, rui, chut trong quá trình git tht, vn chuyn, ch bin và
o qun. Các loi tht c xay, nghin, bm nh là u kin rt thun li cho
vi khun phát trin.
Liu nhim trùng
Liu nhim trùng rt khác nhau và khác nhau v bn cht ca thc phm. i vi
ngi khe mnh liu ti thiu gây c thng là 10
6
- 10
7
vi khun. Nhng
i vi tr em và ngi già d b nhy cm thì liu ngc s thp hn. i vi
nhng thc phm giàu lipid và protein thì ch cn 10
3
vi khun có th gây nhim
trùng.
Bin pháp phòng nga ngc
Loi thi, x lý heo mang trùng và ào thi Salmonella tri chn nuôi.
Trong git m phi tách ph tng trng cn thn tránh vy nhim vào các phn
khác.
Tuân th trit qui trình v sinh thc phm, v sinh git m ti các c s sn
xut, ch bin thc phm, các quán n, lò m nhm tránh vy nhim t ngi,
ng vt bnh, ngun nc và ng vt mang trùng.
Thc hin kim tra v sinh thú y tht ti các ch thng xuyên.
o qun lnh thc n chính và nguyên liu trc khi a vào ch bin. u ó
có tác dng c ch s phát trin ca vi khun.
lý nhit nh nu nng k hoc Pasteur hóa, p mui thc phm nng
mui trên 20%.
Thc hin nghiêm ngt ch kim tra sc khe nh ki vi ngi tham gia
n chuyn, git m, mua bán tht, sa, ch bin thc phm,… Nu có phát hin
ngi bnh hay mang trùng phi cách ly u tr cho khi hn.
2.2.2 Escherichia coli
Nguyn Nh Thanh et al. (1997), E. coli là vi khun ca nhóm
Enterobacteriaceae, chúng thng xut hin rt sm ng rut ngi và ng
t s sinh (sau khi 2 gi), chúng thng sau phn rut, ít khi d dày hay
rut non. Trong nhiu trng hp còn tìm thy niêm mc ca nhiu b phn
khác trong c th. T rut, E. coli theo phân ra t, nc. E. coli là nguyên nhân
gây ra mt s bnh ngi và ng vt.
10
Trc khun E. coli ng trong t nhiên thng không c, nhng u kin nào
ó chúng mi xut hin c tính. Vi khun sn sinh c t trong rut gây ra tiêu
chy. Bnh thng t khi, nhng bin chng có th gây t vong (Lng c
Phm, 2002).
c m hình thái
E. coli là mt trc khun hình gy ngn, kích thc 2 - 3 x 0,6µm. C th có hình
u trc khun; gram âm; ng riêng lôi khi xp thành chui ngn. Có khi
trong môi trng nuôi cy thy có nhng trc khun dài 4 - 8µm, nhng loi này
thng gp trong canh khun già.
Phn ln E. coli di ng do có lông xung quanh thân, mt s không thy di
ng. Vi khun không sinh nha bào, có th có giáp mô.
c tính nuôi cy
E. coli phát trin d dàng trên môi trng nuôi cy thông thng, mt s chng
có th c phát trin trên môi trng tng hp n gin nên ngi ta chn
chúng làm mu nghiên cu v sinh vt hc.
E. coli là vi khun hiu khí và ym khí tùy tin, có th sinh trng nhit t 5
- 40
o
C, nhit thích hp là 37
o
C, pH thích hp t 7,2 - 7,4; phát trin c pH
5,6 - 8,0.
c tính sinh hóa
Chuyn hóa ng: E. coli lên men sinh hi các loi ng fructose, glucose,
galactose, manitone, lactose. Tt c các loi E. coliu lên men ng lactose
nhanh và sinh hi, ó là mt c m quan trng, ngi ta da vào ó phân
bit E. coli và Salmonella. Tuy nhiên, cng có chng E. coli không lên men
lactose.
Các phn ng khác:
- a: ông sau 24 n 72 gi 37
o
C.
- Galatin, huyt thanh ông, lòng trng trng ông: không tan chy
- H
2
S -
- VP -
- MR -
- Indon +
- Kh nitrate thành nitric.
11
c kháng
ng nh các loi vi khun không sinh nha bào khác, E. coli không chu c
nhit , un nóng 55
o
C trong 1 gi, 60
o
C trong 30 phút, un sôi 100
o
C cht
ngay. Các cht sát trùng thông thng: axit phenic, formol, hydroperoxide dit
c vi khun trong vài phút. Tuy nhiên, ngoài môi trng, các chng E. coli
c có th sng n 4 tháng. Vi khun E. coli chu c khô tt và tn ti lâu hn
trong u kin bo qun lnh khô.
Tính gây bnh
E. coli có sn trong rut ca ng vt nhng ch tác ng gây bnh khi sc
kháng ca con vt gim. Bnh do trc khun E. coli có th xy ra nh mt bnh
truyn nhim k phát trên c s thiu vitamin và mc bnh do virus và ký sinh
trùng (Nguyn Nh Thanh et al., 1997).
nh xy ra sau khi có s hin din s lng vi khun E. coli n thit sau khi
chúng di chuyn n d dày và rut non. Chúng bám dính trên b mt niêm mc
và gây viêm thành rut. Phn ng viêm này gây ra bi các c t do vi khun và
c cho là nguyên nhân gây ra viêm i tràng xut huyt.
ch gây ngc
Khi c th b nhim vi khun vi s lng nhiu kèm theo c t ca chúng E.
coli gây tiêu chy thng gp các nhóm sau:
Nhóm EPEC (Enteropathogenic E. coli): gm các type thng gp O
26
:B
6
,
O
44
,O
55
:B
5
, O
112
:B
11
, O
124
, O
125
:B
5
, O
142
là nguyên nhân gây tiêu chy tr em
i 2 tui.
Nhóm ETEC (Enterotoxigenic E. coli): gây bnh cho tr em, ngi ln do tit ra 2
c t rut ST và LT.
LT hot hóa men Adenyl Cyclase trong t bào rut làm gia tng yu t C.AMP
(cyclic adenozin 5
’
monophosphat). Yu t này s kích thích ion Cl
-
và bicarbonat
tách ra khi t bào ng thi c ch Na
+
bên trong t bào. Hu qu là gây tiêu
chy mt mc.
c t ST: hot hóa men Guanyl Cyclase làm tng yu t C.GMC (cyclic
adenozin 5
’
monophosphat) bên trong t bào dn n kích thích bài tit mui và
c gây ra tiêu chy.
Nhng dòng E.coli có c 2 loi ni c t LT và ST s gây ra tiêu chy trm trng
và kéo dài.
Nhóm EIEC (Enteroinvasine E. coli): nhng E. coli này bám lên niêm mc và làm
tróc niêm mc gây loét niêm mc do ó gây tiêu chy có àm ln máu (ging
12
Shigella). Các chng này có th lên men hay không lên men ng lactose và có
phn ng lysin decarboxylaza âm tính. Thng gp các type O
125
, O
157
, O
144
…
Nhóm VETEC (Verocytoxin produccing E. coli): va gây tiêu chy va là nguyên
nhân gây viêm i tràng xut huyt (hermorrhagic colilic) và làm tn thng mao
ch gây hin tng sng phù (ederma) rt nguy him n tính mng (do bin
chng). Nhóm VETEC bao gm các type: O
26
, O
11
, O
113
, O
145
, O
157
; ây là ngoi
c t VETEC gây tiêu chy. Các bin chng trên do vi khun tit ra mt trong 2
loi ngoi c t VT
1
(verocytoxin) và VT
2
gây tác ng thn kinh.
n ây ngi ta phát hin chng E. coli mi ký hiu là E. coli O
157
:H
7
. Chng
này ã gây ra nhng v ngc ln trên th gii trong nhng nm gn ây: nm
1982, ln u tiên ngi ta ghi nhn c ngun bnh do E. coli O
157
:H
7
. Nm
1985, ngi ta nhn thy triu chng hoi huyt có liên quan n chng O
157
:H
7
.
m 1990, xy ra trn dch khá phc tp Nht Bn do ung nc táo cha dit
khun (Center for Disease Control and prevention).
Kháng nguyên và c t
m 4 loi kháng nguyên: O, K, H, F và ni c t gây tiêu chy, ngoi c t
gây tan huyt và phù thng.
c t ca E. coli: loi E. coli có giáp mô (kháng nguyên K) gây ngc mnh
n loi không giáp mô.
i c tng rut: gm 2 loi chu nhit và không chu nhit. C hai loi này
u gây tiêu chy. Loi chu nhit ST (Thermoctable): gm các loi ST
a
, ST
b
.
Loi không chu nhit LT (Thermolabiles): gm các loi LT
1
, LT
2
.
Nhng dòng E. coli n sinh c t (ETEC) gm nhiu type huyt thanh khác
nhau nhng thng gp nht là type O
6
H16, O
8
H
9
, O
78
H
12
, O
157
.
Pili là nhng yu tc lc làm cho vi khun bám vào b mt niêm mc, nó gn
i ng mantose. Các c t rut c mã hóa bi plasmid do mt s chng E.
coli gây tiêu chy to ra (Lê Huy Chính, 2006).
Triu chng ngc
Thi k bnh 2 - 20 gi, bình thng là 4 - 7 gi. Bnh phát t ngt, au bng d
i, i phân lng nhiu ln trong ngày, ít khi nôn ma. Thân nhit bình thng hoc st
nh. Trng hp nng bnh nhân có th st cao, ngi mi mt, chân tay co qup,
hôi. Thi gian khi bnh sau 2 - 3 ngày, bnh nng s kéo dài hn (Lng c
Phm, 2002).
13
2.2.3 Staphylococcus aureus
Staphylococcus bao gm 3 loi S. auerus, S. espidermidis và S. saprophyticus.
S. auerus là loài gây bnh thng hay gp nht, nó có vai trò và ý ngha i vi y
c và thú y hc, khong 30% ngi khe mnh mang S. auerus trên da và
niêm mc. S. auerus có kh nng hình thành c t trong thc phm, do ó nó có
th gây nên chng nhim c.
c m hình thái
cu khun hình cu, ng kính 0,7µm, không di ng, không sinh nha bào,
thng không có v, không có lông và không di ng. Trong bnh phm, t cu
p thành tng ôi, tng ám hình chùm nho. Trong canh khun chúng thng
p thành tng ám hình chùm nho. Khi nhum gram bng phng pháp nhum
gram, vi khun bt màu gram dng.
c tính nuôi cy
cu sng hiu khí hoc k khí tùy tin, nhit thích hp 32 - 37
o
C, pH thích
p 7,2 - 7,6. D mc trên các môi trng nuôi cy thông thng.
Môi trng nc tht: sau khi cy 5 - 6 gi vi khun làm c môi trng, sau 24
gi môi trng c rõ hn, lng cn nhiu, không có màng.
Môi trng thch thng: sau khi cy 24 gi vi khun hình thành khun lc dng
S, mt khun lc hi t, b nhn u, khun lc có màu trng, vàng thm hay
vàng chanh. Màu sc khun lc là do vi khun sinh ra, sc t này không tan trong
c. Khun lc S. aureus có màu vàng thm là có c lc và có kh nng gây
nh cho ng vt, còn khun lc màu vàng chanh, màu trng không có c lc
và không gây c bnh (Nguyn Vnh Phc, 1997).
Trên môi trng thch máu: vi khun mc rt tt, sau khi cy 24 gi vi khun
hình thành nhng khun lc tròn, li, nhn và c m. Xut hin hin tng dung
huyt xung quanh khun lc. Khun lc có th sinh sc t trng, vàng hoc vàng
chanh.
Trên môi trng BPA (Baird Parker Agar): sau khi nuôi cy 24 gi xut hin
khun lc có ng kính khong 0,5 - 1,0 mm tròn li, en bóng, có vòng sáng
ng 1 - 2mm bao quanh khun lc.
c tính sinh hóa
Coagulase có kh nng làm ông huyt tng ngi và ng vt khi ã c s
ng cht chng ông. ây là ch tiêu quan trng nht phân bit S. aureus i
các t cu khác. Coagulase có tt c các chng S. aureus. Hot ng ca
Coagulase nh thrombokianase to thành mt áo fibrinogen trong huyt tng.