Bài giảng miễn dịch kháng thể

CHÆÏC NÀNG KHAÏN G THÃØ.


Mở đầu
Sỉû kãút håüp âàûc hiãûu våïi khạng ngun l mäüt trong nhỉỵng chỉïc
nàng ca khạng thãø .
Chỉïc nàng ca khạng thãø (Ig) cọ liãn quan chàût ch våïi cáúu trục,
do cáúu trục khạng thãø quy âënh:

Âoản Fab: ( Fragment antigen binding)
Cọ chỉïc nàng kãút håüp âàûc hiãûu våïi khạng ngun (KN),
lm báút hoảt nọ, m cạc kãút qu l-họa â âỉåüc nghiãn cỉïu v
ỉïng dủng trong nhiãưu k thût miãùn dëch.
Âoản Fc: ( Fragment crystallizable)
Näúi 2 âoản Fab våïi nhau, cọ chỉïc nàng kãút håüp våïi cạc thủ thãø trãn
bãư màût tãú bo (hồûc phán tỉí), khåíi âäüng cạc cå chãú hoảt họa: Bảch
cáưu, bäø thãø...


Nhổ vỏỷy, khaùng thóứ coù chổùc nng hoaỷt hoùa hóỷ mióựn dởch khọng
õỷc hióỷu.
I.CHặẽC NNG NHN BIT VAè KT HĩP KN ( cuớa Fab).

1.1aỷi cổồng: Nhổợng khaùi nióỷm.
1.1.1.Ba õỷc tờnh cuớa phaớn ổùn g kóỳt hồỹp KNKT.
+Sổỷ kóỳt hồỹp laỡ thuỏỷn
nghởch.
Khọng phaới laỡ phaớn ổùng hoùa hoỹc, do vỏỷy sau khi kóỳt hồỹp vaỡ phỏn ly
cỏỳu truùc hoùa hoỹc cuớa KN hoỷc KT hỏửu nhổ khọng thay õọứi.

+Sổỷ kóỳt hồỹp laỡ õỷc hióỷu .
KT do KN naỡo taỷo ra chố kóỳt hồỹp õỷc hióỷu vồùi khaùn g nguyón ỏỳy .
Tờnh chỏỳt naỡy õổồỹc ổùn g duỷn g rọỹn g raợi õóứ phaùt hióỷn vaỡ õởnh lổồỹn g nhióửu chỏỳt nóỳu ngổồỡi ta taỷo õổồỹc KT
chọỳn g chỏỳt õoù.

+Phaớn ổùn g taỷo
nhióỷt :

Nhióỷt giaới phoùng ra tổỡ 2,0-4,0 Kcal/mol.
Caùc KT goỹi laỡ "laỷnh" coù thóứ giaới phoùng ra 30-40 Kcal/mol, kóỳt hồỹp
rỏỳt yóỳu vồùi KN ồớ 37oC
KT noùng (nhổ KT chọỳng Rh) thỗ toớa nhióỷt keùm (2-10 Kcal/mol)
nhổng laỷi phaớn ổùng vồùi KN ồớ nhióỷt õọỹ 37.


1.1.2.Paratop v epitop.
-Paratop: L vë trê trãn bãư màût KT s trỉûc tiãúp kãút håüp våïi
mäüt vëtrê nháút âënh trãn bãư màût KN (gi l epitop). Paratop
nàòm åí âáưu tỉû do ca Fab (âáưu kia ca Fab näúi våïi Fc), thüc
vn g thay âäøi ca chùi nàûn g v chùi nhẻ (VH v VL).

Cáúu trục Paratop:
Paratop khäng phi l mäüt âoản peptit liãn tủc, di,m chè l mäüt
(hồûc mäüt säú) axit amin nàòm cạch qung.
Âọ l nhỉỵng" âiãøm" m paratop tiãúp xục våïi epitop Thäng thỉåìng
cọ tỉì 3-6" âiãøm" nhỉ váûy.


1.1.3.Caùc lổỷc lión kóỳt giổợa KN-KT (epitop vaỡ
paratop).

. Lổỷc huùt tộnh õióỷn :
ổồỹc thổỷc hióỷn giổợa mọỹt nhoùm chổùa chổùc mang õióỷn cuớa paratop vồùi
mọỹt nhoùm mang õióỷn khaùc dỏỳu cuớa epitop.
Vờ duỷ: Giổợa - COO- vaỡ - NH3+... lổỷc naỡy cn mọỹt khoaớng caùch
thờch hồỹp giổợa 2 nhoùm õóứ õaỷt trở sọỳ tọỳi õa.
Noù tyớ lóỷ nghởch vồùi bỗnh phổồng khoaớng caùch (d), vỗ vỏỷy nóỳu khoaớng
caùch tng lón thỗ lổỷc giaớm õi rỏỳt nhanh.
Noù tyớ lóỷ nghởch vồùi bỗnh phổồng khoaớng caùch (d), vỗ vỏỷy nóỳu khoaớng
caùch tng lón thỗ lổỷc giaớm õi rỏỳt nhanh.


. Lỉûc ca cáưu näúi hydro:
Tảo ra giỉỵa ngun tỉí H+ (trãn phán tỉí KN hồûc KT ) thỉûc cháút
âáy cn g l lỉûc hụt ténh âiãûn , nãn cn g phủ thüc vo khon g cạc h.

. Lỉûc liãn kãút k
Mäüt khi 2 nhọm k nỉåïnỉåï
c nàòcm: â gáưn, thç chụng s liãn kãút nhau sau
khi lai trỉì cạc phán tỉí nỉåïc åí giỉỵa chụng. ngỉåìi ta cho ràòng lỉûc ny
chi phäúi 50% lỉûc liãn kãút KN-KT näúi chung.
. Lỉûc Van der
Walls:
Do sỉû chuøn âäüng ca cạ
c âiãûn tỉí lm cho phán tỉí tråí thnh cọ
cỉûc,v hụt phán tỉí bãn cảnh nãúu tiãúp cáûn våïi lỉûc khạc dáúu ca phán
tỉí ny.
Khong cạch cọ vai tr hãút sỉïc to låïn, vç lỉûc ny tè lãû nghëch våïi d.

- Caùc lổỷc noùi trón nóỳu rióng reợ thỗ hoaỡn toaỡn khọng õuớ maỷnh õóứ
chọỳng laỷi va chaỷm do chuyóứn õọỹng nhióỷt (Brown). óứ lión kóỳt
õổồỹc KN-KT, caùc lổỷc phaới phọỳi hồỹp nhau.

- Cỏỳu hỗnh cuớa paratop phaới phuỡ hồỹp cao õọỹ vồùi epitop
sao cho caùc lổỷc õoù õọửn g thồỡi xuỏỳt hióỷn
Koaớn g caùc h 2 bón phaới thờch hồỹp õóứ caùc lổỷc õoù cuỡn g
õaỷt giaù trở cao. où laỡ baớn chỏỳt cuớa khaùi nióỷm vóử tờnh
õỷc hióỷu KN-KT vaỡ aùi tờnh giổợa chuùn g.


1.1.4. Tênh tảp loải ca KT trong mäüt khạn g huút
thanh.
Máùn cm cho con váût bàòn g mäüt protein tinh khiãút (vê dủ:
ovalbumin cọ 10 epitop, hồûc thyroglobulin cọ 40 epitop) ta
thu âỉåüc khạn g huút thanh chỉïa cạc KT "cn g chäún g lải
mäüt KN'' Do váûy gi l khạn g huút thanh âån âàûc hiãûu .
Tuy nhiãn häùn håüp KT trong khạn g huút thanh ny váùn tảp
vãư tênh âàûc hiãûu .

vç:
- Chụng cọ cạc paratop khạc nhau, chè ph håüp våïi mäüt epitop nháút
âënh ca khạng ngun.
Khi cạc epitop âỉåüc giåïi thiãûu trãn bãư màût âải thỉûc bo, thç cạc clon
khạc nhau ca hãû lympho s sn xút cạc KT chäúng lải cạc epitop
tỉång ỉïng.
Do váûy, tênh âån âàûc hiãûu nọi trãn cọ tênh tảp loải âa clon.


-Ngay mäüt táûp håüp cạc KT cng chäúng mäüt epitop váùn cọ sỉû tảp

loải
Khi gáy máùn cm liãn tủc bàòng mäüt KN duy nháút chè mang mäüt
epitop duy nháút (hapten) thç cng vãư sau, ta cng thu âỉåüc KT cọ
tênh âàûc hiãûu (ại tênh) cao hån trỉåïc.
Tuy váûy häùn håüp KT ny váùn cn tảp loải vãư mỉïc âäü âàûc hiãûu, vç
váùn do cạc clon limpho bo khạc nhau sn xút ra.
-Nãúu tạc h ra mäüt tãú bo tảo KT riãng r (thüc mäüt clon) räưi cho nhán
lãn, sau khi lai ghẹp våïi tãú bo u, thç clon ny s sn xút cạc phán tỉí
KT giäún g nhau hon ton vãư cáúu trục phán tỉí, paratop, v cọ cn g
mỉïc âäü âàûc hiãûu .
Âọ l KT âån âàûc hiãûu âån clon, khäng cọ trong âiãưu kiãûn tỉû nhiãn.


1.1.5.Aẽi tờnh cuớa KT vồùi KN (affinity).
Aẽi tờnh õổồỹc bióứu thở õỷc trổng bũn g tọứn g hồỹp tỏỳt caớ caùc lổỷc
lión kóỳt giổợa mọỹt paratop vồùi mọỹt epitop. Muọỳn nghión cổùu vóử
mỷt õởnh lổồỹn g aùi tờnh cuớa KT, ngổồỡi ta phaới duỡn g nhổợn g KN
chố mang mọỹt epitop (tổùc hapten). Vỗ phaớn ổùn g kóỳt hồỹp KNKT laỡ thuỏỷn nghởch nón khi trọỹn KN vồùi KT duỡ ồớ tố lóỷ rỏỳt thờch
hồỹp , ta vỏựn thỏỳy KN vaỡ KT ồớ daỷn g tổỷ do, do bở phỏn ly.

KN + KT KN - KT.
[KN-KT]
K
[KN][KT]


K: Hũng sọỳ kóỳt hồỹp, bióứu thở bũng lờt/mol.
K Cuợng laỡ aùi tờnh cuớa KT õọỳi vồùi mọỹt epitop nhỏỳt õởnh cuớa KN.
Ta dóự thỏỳy rũng, nóỳu aùi tờnh cao thỗ õa sọỳ KT nũm trong phổùc hồỹp
(khióỳn tổớ sọỳ tng lón vaỡ mỏựu sọỳ giaớm õi, laỡm cho K tng theo).

1.1.6.Haùo tờnh cuớa khaùn g thóứ.

Trón thổỷc tóỳ mọỹt KN coù nhióửu epitop cuỡng mọỹt luùc bở nhióửu KT kóỳt
hồỹp.
Trổồỡng hồỹp õoù, ngổồỡi ta khọng thóứ õo õổồỹc aùi tờnh, maỡ chố õo õổồỹc
haùo tờnh (coù yù nghộa thổỷc tióựn hồn). Haùo tờnh cho bióỳt tọỳc õọỹ kóỳt hồỹp
KT vaỡ KN.


1.2. Kóỳt quaớ sinh hoỹc cuớa kóỳt hồỹp KN-KT.
Khi bở KT kóỳt hồỹp , KN khọng bở bióỳn õọứi vóử mỷt cỏỳu
truùc hoùa hoỹc , nhổng bở thay õọứi vóử tờnh chỏỳt sinh
hoỹc .
Vi khuỏứn hoỷc vi ruùt mang KN khi bở KT õỷc hióỷu
kóỳt hồỹp seợ mỏỳt khaớ nng nhỏn lón laỡm rọỳi loaỷn
chuyóứn hoùa nọỹi baỡo , thoaùi bióỳn , vaỡ dóự bở thổỷc baỡo vaỡ
bọứ thóứ tióu dióỷt .
Caùc phỏn
coù sinh
hoaỷt hoỹ
tờnh
nóỳu yóỳ
bởukóỳ
p t vồù
Kóỳttổớquaớ
c chuớ
cuớt ahồỹ
kóỳ
hồỹi pKT seợ
mỏỳt hoaỷKN-KT:

t tờnh...vv.
1-Sổỷ laỡm bỏỳt hoaỷt caùc phỏn tổớ coù hoaỷt tờnh.


Caùc phỏn tổớ KN coù hoaỷt tờnh khi bở KT õỷc hióỷu kóỳt hồỹp seợ mỏỳt
hoaỷt tờnh.
Tổỡ lỏu, ngổồỡi ta õaợ bióỳt saớn xuỏỳt KT chọỳng õọỹc tọỳ (uọỳn vaùn,
baỷch hỏửu) duỡng trong phoỡng bóỷnh vaỡ õióửu trở.
Trong bóỷnh lyù, khaùng thóứ chọỳng insulin, thyroglobulin gỏy suy
giaớm chổùc nng tuyóỳn tuỷy, tuyóỳn giaùp.
Khaùng thóứ chọỳng enzym coù taùc duỷng khổớ hoaỷt enzym.
Cồ chóỳ khổớ hoaỷt coù thóứ laỡ:


a. Vở trờ hoaỷt õọỹn g cuớa phỏn tổớ KN (coù hoaỷt tờnh):
Bở KT che phuớ bũng sổỷ kóỳt hồỹp khióỳn noù khọng tióỳp xuùc õổồỹc õọỳi
tổồỹng taùc õọỹng nổợa (vờ duỷ: thuỷ thóứ tóỳ baỡo õờch).
b. Cỏỳu hỗnh cuớa vở trờ coù hoaỷt tờnh:
Bở bióỳn daỷn g, khọng coỡn õỷc hióỷu vồùi õờch nổợa .
c.Phỏn tổớ coù hoaỷt tờnh:
Thay õọứi vóử hỗnh thóứ khọng gian.


2- Báút hoảt vi rụt .
Khạn g thãø lm cho vi rụt máút kh nàng kãút håüp våïi thủ
thãø ca tãú bo âêch, do váûy vi rụt khäng thám nháûp
âỉåüc vo näüi bo s nhanh chọn g chãút åí ngoải bo .
Trỉåìng håüp vi rụt â lt vo näüi bo, KT váùn cọ kh nàng gáy báút
hoảt theo mäüt cå chãú khạc.
Vi rụt täưn tải v phạt triãøn trong tãú bo s hçnh thnh mäüt säú KN

(epitop) âỉa lãn bãư màût tãú bo, v bë KT kãút håüp.
KT khäng trỉûc tiãúp diãût vi rụt m cọ tạc dủng háúp dáùn âải thỉûc bo
v NK (tãú bo diãût tỉû nhiãn) âãún tiãu diãût c tãú bo nhiãùm lẫn vi rụt
bãn trong.
Âọ l cå chãú "gáy âäüc tãú bo thäng qua khạng
thãø"


3. Báút hoảt vi khøn , k sinh váût v áúu trn g ca chụn g:
-Täúc âäü nhán lãn ca vi khøn gim âi r rãût hồûc máút hàón
(khäng tảo âỉåüc khøn lảc trong ni cáúy åí gen thảc h).
Cạc quạ trçnh trao âäøi cháút qua mn g v chuøn họa näüi
bo bë räúi loản , giạn âoản hồûc ngỉìn g. Vi khøn chãút .

-Xồõn khøn máút kh nàng hoạt âäüng khi bë KT kãút håüp.
-Cạc k sinh váût âån bo v mäüt säú âa bo (säút rẹt, trypanosom,
amip, giun chè...) bë KT diãût trỉûc tiãúp nhỉ cå chãú diãût vi khøn. Nhiãưu
loải áúu trng (giun, sạn) bë IgG ,IgA åí rüt lm cháûm hay ngỉìng phạt
triãøn, tè lãû nåí v trỉåíng thnh gim r rãût, hồûc khäng thám nháûp
âỉåüc qua niãm mảc rüt âãø vo mạu. IgE trong cạc mä cọ vai tr ráút
quan trng báút hoảt v diãût k sinh váût v áúu trng ca chụng, sỉû kãút
håüp ca KT våïi k sinh váût tảo âiãưu kiãûn cho bảch cáưu ỉa axêt v âải
thỉûc bo tiãu diãût chụng.


4. Chổùc nng tỏỷp trung khaùn g nguyón:
Bũn g caùc h gỏy tuớa , gỏy ngổng kóỳt
khaùn g thóứ coù vai troỡ laỡm cho KN tổỡ daỷn g phỏn taùn
trồớ thaỡn h tỏỷp trung laỷi , do vỏỷy haỷn chóỳ khaớ nng lan
rọỹn g cuớa KN, õọửn g thồỡi taỷo õióửu kióỷn quy tuỷ caùc bióỷn

phaùp baớo vóỷ khọng õỷc hióỷu vaỡo nồi KN bở tỏỷp trung
(vióm, thổỷc baỡo , õọỹc tóỳ baỡo , bọứ thóứ. ..).


5.Kóỳt quaớ hoùa lyù cuớa kóỳt hồỹp KN-KT:
1. Phaớn ổùn g tuớa :
Nóỳu phỏn tổớ KN chố coù mọỹt epitop thỗ kóỳt hồỹp vồùi KT
(hoùa trở 2) seợ taỷo ra caùc tỏỷp hồỹp KN-KT-KN rióng reợ
khọng thóứ thỏỳy bũn g mừt thổồỡn g.
Trón thổỷc tóỳ, phọứ bióỳn laỡ trổồỡng hồỹp KN coù nhióửu epitop seợ bở 1 Fab
cuớa KT kóỳt hồỹp, coỡn Fab thổù 2 seợ kóỳt hồỹp vồùi 1 epitop cuỡng loaỷi ồớ 1
phỏn tổớ KN khaùc. Ta coù tỏỷp hồỹp: - KN - KT - KN - KT -. Do vỏỷy, tỏỷp
hồỹp naỡy coù õióửu kióỷn õóứ mồớ rọỹng theo 3 chióửu khọng gian, hỗnh thaỡnh
mọỹt cỏỳu truùc maỷng, õuớ lồùn õóứ coù thóứ thỏỳy õổồỹc bũng mừt thổồỡng (mồỡ,
õuỷc): õoù laỡ tuớa.


Khi träün dung dëch KN våïi dung dëch KT, nãúu xút hiãûn ta, ta
cọ
thãø
KN bëmKTcho
kãút tháú
håüpy, :hồû
c KT
âàûcph
hiãûiu träü
våïinKN.
Thỉûnọ
c inghiãû
KN

v lKT
våïi nhau
Nãútheo
u khäng
a, ta
chỉahåü
thãøp nọ
i chụ
khäng
kãúct håü
mäücọ
t tètlãû
thêch
thç
tangmåï
i âỉåü
tảpo våï
ra.i
nhauNãú
. u mäüt thỉï chiãúm tè lãû quạ cao ( tỉïc quạ thỉìa ),
hồûc quạ tháúp ( tỉïc quạ thiãúu ) thç ta khäng xút
hiãûn , màûc d phn ỉïn g kãút håüp váùn xáøy ra.

Vê dủ: Khi quạ thỉìa KN thç táûp håüp s l KN -KT-KN, nhỉng lải
thiãúu khạng thãø âãø liãn kãút chụng lải thnh cáúu trục mảng.
Ngỉåüc lải khi quạ thỉìa KT ta cọ cạc táûp håüp: KT-KN-KT, nhỉng
thiãúu KN, âãø liãn kãút cạc táûp håüp âọ lải, nãn chụng khäng kãút ta


a.Phaớn ổùn g tuớa trong mọi trổồỡn g loớn g:

Khi trọỹn dung dởch KN vồùi dung dởch KT seợ xỏứy ra sổỷ
xuỏỳt hióỷn tuớa laỡm cho dung dởch tổỡ trong suọỳt trồớ
thaỡn h mồỡ, õuỷc , vỏứn .
Tổỡ rỏỳt lỏu noù õaợ õổồỹc sổớ duỷn g õóứ phaùt hióỷn KN
( hoỷc KT) nóỳu coù sụn thổù kia, vờ duỷ: trong chỏứn
õoaùn , trong õaùn h giaù kóỳt quaớ gỏy mỏựn caớm ...


b. Phn ỉïn g ta trong gien.

Trong mäüt cáúu trục gel, chàón g hản gel tinh bäüt hồûc
gel thảc h, thç pháưn âàûc chè chiãúm 1-2% khäúi lỉåün g,
nhỉng nhåì cạc phán tỉí cháút ràõn cọ cáúu trục dản g såüi
nãn â tảo âỉåüc mäüt cáúu trục lỉåïi trong khäng gian,
ch ứa âỉåüc ráút nhiãưu cháút ln g (chiãúm 98-99% khäúi
lỉåün g).
Trong k thût miãùn dëch, gien thảc h hay âỉåüc sỉí dủn g
hån c: Âun säi (cạc h thy cn g täút ) 1-2 gram thảc h
agar våïi 98-99 ml NaCl 9%0 (hồûc âãûm âàón g trỉång,
pH 7,2-7,4), räưi âãø ngüi cho âäng lải .


.Phaớn ổùn g ngổng kóỳt .

Laỡ phaớn ổùn g lión kóỳt caùc tióứu thóứ thaỡn h mọỹt cỏỳu truùc
lồùn , quan saùt õổồỹc bũn g mừt thổồỡn g.
Nhổ( họửn g cỏửu , baỷc h cỏửu ), haỷt trồ nhỏn taỷo , coù mang
KN mọỹt caùc h tổỷ nhión hoỷc KN õổồỹc gừn vaỡo do bóỷn h
lyù hoỷc do nhỏn taỷo .

Vỗ kờch thổồùc tióứu thóứ gỏỳp bọỹi kờch thổồùc phỏn tổớ, nón
phaớn ổùn g ngổng kóỳt trong mióựn dởch nhaỷy gỏỳp nhióửu
lỏửn phaớn ổùn g tuớa .


a.Ngỉng kãút ch âäün g ( hay trỉûc tiãúp ).
Khi KN l mäüt cáúu pháưn ca tiãøu thãø ( thỉåìn g l tãú bo )
- Phn ỉïn g âënh nhọm häưn g cáưu ( AB): Khạn g thãø chäún g A
( hồûc chäún g B) âỉåüc láúy tỉì nhỉỵn g ngỉåìi cọ häưn g cáưu
thüc nhọm B ( hồûc A).
Git mạu trãn kênh cọ mu â mën, khi thãm khạn g thãø
vo , träün âãưu , nãúu cọ phn ỉïn g ( +) thç cạc häưn g cáưu s
ngỉng kãút thn h củm , màõt thỉåìn g tháúy âỉåüc dỉåïi dản g cạc
hảt â sáùm , läøn nhäøn .
- Trong phn ỉïn g cäø âiãøn ( widal) âể cháøn âoạn
thỉång hn thç KN l các tiãøu thãø Salmonella ( ni cáúy ),
âỉåüc träün våïi huút thanh ngỉåìi bãûn h. ( Cọ thãø ha lon g
huút thanh theo hãû säú 2) âãø xạc âënh hiãûu giạ KT, tỉïc l
xem åí âäü ha lon g no ca KT váùn gáy âỉåüc ngỉng kãút
KN.


b.Ngổng kóỳt thuỷ õọỹn g ( hay giaùn tióỳp )
Khi KN õổồỹc gừn nhỏn taỷo lón tióứu thóứ, tổùc laỡ lón "giaù õồợ " ( coù
thóứ duỡn g họửn g cỏửu nhoùm O, họửn g cỏửu cổỡu , haỷt latex...).
Cuợn g coù thóứ gừn KT lón giaù õồợ, khi õoù goỹi laỡ phaớn ổùn g " ngổng
kóỳt thuỷ õọỹn g ngổồỹc ".
Hióỷn nay õaợ tỗm ra nhióửu caùc h gừn KN ( hoỷc KT) lón giaù õồợ, gọửm
caớ vióỷc chóỳ taỷo caùc haỷt trồ coù khaớ nng tổỷ gừn mọỹt sọỳ KN.
Vờ duỷ:

- Phaớn ổùn g chỏứn õoaùn giang mai:KN lỏỳy tổỡ tim bó, giaù õồợ laỡ
tinh thóứ cholesterol, hoỷc KN laỡ xoừn khuỏứn , giaù õồợ laỡ họửn g cỏửu xổớ
lyù bũn g formol.
- óứ phaùt hióỷn caùi goỹi laỡ " yóỳu tọỳ daỷn g thỏỳp "-mọỹt tổỷ KT
thổồỡn g xuỏỳt hióỷn trong bóỷn h thỏỳp ngổồỡi ta laỡm nhổ sau: Thoaỷt tión
saớn xuỏỳt IgG chọỳn g họửn g cỏửu cổỡu , IgG seợ tổỷ õọỹn g gừn vaỡo họửn g
cỏửu cổỡu : Họửn g cỏửu cổỡu naỡy seợ bở ngổng kóỳt khi gỷp " yóỳu tọỳ daỷn g
thỏỳp )"