Tìm hiểu quá trình phân lập VSV thuần chủng

CHÀO CÔ VÀ CÁC BẠN !!!


ĐH CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM
TP. HỒ CHÍ MINH
KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM

TIỂU LUẬN MÔN
KỸ THUẬT THỰC PHẨM 3
Đề tài: Tìm hiểu quá trình phân lập VSV thuần chủng.
NHÓM 2
GVHD: TRẦN THỊ MINH HÀ


DANH SÁCH NHÓM
1. Giang Thị Huỳnh Tiên
2. Huỳnh Long Dâng
3. Phan Thị Kim Hoa
4. Nguyễn Thị Minh Thúy
5. Đinh Quốc Thi
6. Nguyễn Thị Thanh Hiền


NỘI DUNG
Khái niệm
Quy trình phân lập VSV
Dụng cụ và thiết bị phân lập
Các phương pháp và kỹ thuật
phân lập
Một số ví dụ

Kết luận


Khái niệm
• Phân lập là:
Tách rời

Quần thể
VSV

1 loại
VSV

Gieo
Ủ

QUÁ TRÌNH

Môi
trường
thạch

Phân
chia

Quần thể
mọc riêng


Quy trình phân lập

• Dụng cụ và thiết bị phân lập:


Quy trình phân lập
• Dụng cụ:

Que tráng bằng thủy tinh; Que cấy móc;
Que cấy thẳng; Đĩa petri; Bình erlen


Quy trình phân lập
• Thiết bị:

Cân điện tử; Nồi hấp áp lực hơi nước; Tủ cấy


Phương pháp và kỹ thuật phân lập
 Phương pháp sàn lọc:
• Nguyên tắc
- Tách rời các tế bào vsv
- Nuôi cấy các tế bào vsv trên trong môi trường
dinh dưỡng để tạo khuẩn lạc riêng rẽ.


Phương pháp và kỹ thuật phân lập
• Nguyên lý của phương pháp
- Trước hết người ta kiểm tra sơ bộ hỗn hợp các giống vi sinh
vật từ mẫu tự nhiên như đất hoặc nước, cỏ cây... Làm các
huyền phù pha loãng 1/10 đến 1/100 từ đất rồi gieo trên mặt
hộp petri đựng môi trường thạch dinh dưỡng và đã cấy một

chủng VSV kiểm định có tác dụng đối kháng.
- Chỉ có những chất nào trong đất sinh chất đối kháng với chủng
kiểm định, nghĩa là có tính chất kháng sinh thì sau khi nuôi sẽ
tạo ra vùng ức chế đặc hiệu trên đĩa thạch. Ta tách khuẩn lạc
của chúng và đem nuôi cấy, thử chất sinh ra và xác định tiếp
theo.


Phương pháp và kỹ thuật phân lập
• Cũng có thể đơn giản là đặt các mẫu đất lên các điểm
khác nhau trên mặt thạch dinh dưỡng (nếu muốn tìm
vi khuẩn) hoặc của thạch khoai tây ( nếu muốn tìm
nấm) đã có chủng kiểm định được nuôi cấy từ trước.
Giữ đĩa thạch ở 28-370C trong khoảng 2 ngày, quan
sát vùng bị ức chế và quyết định công việc phân lập
các chủng VSV có tác dụng tiếp theo.
• Tác dụng kháng sinh của mẫu thử sẽ được xác định ở
vùng mặt thạch không bị mờ tại các giao điểm đường
cấy của chủng bị ức chế.


Phương pháp và kỹ thuật phân lập
 Kỹ thuật của phương pháp:
- Lấy một mẫu thử để khảo sát với nhiều chủng
kiểm định.
- Lấy nhiều mẫu thử để khảo sát với một chủng
kiểm định.


Phương pháp và kỹ thuật phân lập

 Chọn lọc theo kỹ thuật Penicilin:
-Mẫu được lựa chọn trong phương pháp này là các
tế bào hoang dại có thể phát triển trong môi trường
dinh dưỡng thiếu một a.a nào đó và bị giết chết bằng
penicilin.
- Penicilin chỉ có tác dụng lên các tế bào đang sinh
trưởng nên các tế bào nào cần a.a không sinh trưởng
được nên sống sót.


Một số ví dụ
 Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis:
• – Cỏ khô cắt nhỏ, cho vào 1 bình tam giác.
– Bổ sung thêm:
+ Một chút phân
+ Nước sạch đổ ngập cỏ.
– Đun sôi 15 phút để diệt các tế bào sinh dưỡng và các tế bào không
sinh bào tử.
– Đậy nút bông, để tủ ấm ở nhiệt độ 25 – 26 0C trong 48 – 72 h.
– Kết quả:
+ Xuất hiện lớp váng xám có nhiều vi khuẩn Bacillus sublitis vì cỏ khô
bao giờ cũng có bào tử của vi khuẩn này.
+ Soi kính hiển vi : Tế bào Bac. sublitis có hình que, dài, bào tử hình
ôvan nằm ở xa tâm hay gắn tâm khuẩn lạc. Tế bào có kích thước (3
– 5 x 0,6) µm.


Một số ví dụ
• Phân lập nấm mốc Aspergillus oryzae, Aspergillus niger và
Mucor:

• – Có thể phân lập các loài nấm mốc này trên cơm nguội, xôi
làm mốc tương, bánh mì để khô ít ngày.
– Thông qua màu sắc của mốc để nhận diện.
+ Mốc có màu trắng: Có thể là Mucor hay Rhizopus.
+ Mốc có màu đen là Aspergillus niger.
+ Mốc có màu xanh lục là Penicillium italicum.
Loại mốc này thường có trên vỏ cam, chanh để lâu ngày
– Dùng que cấy đầu hình thước thợ lấy một ít sợi nấm cấy
vào môi trường thạch nghiêng thích hợp (Czapek).


Một số ví dụ
• Phân lập nấm men:
• – Có thể phân lập nấm men dễ dàng từ các môi trường như:
+ Bề mặt trái cây và dịch ép một số trái cây như táo, lê, nho,
dâu, mơ, dứa, …
+ Trong rượu nếp, trong các bánh men rượu, trong bia,
trong nước mía, trong hạt kêphia.
– Nấm men này khi quan sát trên kính hiển vi thường có
dạng hình cầu hay hình trứng. Tế bào có kích thước lớn, có
khả năng nảy chồi. Khuẩn lạc cho màu trắng sữa
– Chọn các khuẩn lạc nấm men riêng rẽ và cấy vào môi
trường thích hợp ng khoai tây – đường cám hay môi trường
Sabouraud).


Kết luận