SO SÁNH QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT DNA TỪ VIRUT WSSV GÂY BỆNH ĐỐM TRẮNG TRÊN TÔM VÀ RNA TỪ VIRUT VNN GÂY BỆNH HOẠI TỬ THẦN KINH TRÊN CÁ BIỂN

BÀI THUYẾT TRÌNH NHÓM 1
Môn: Sinh Học Phân Tử
CHỦ ĐỀ:
SO SÁNH QUY TRÌNH TÁCH CHIẾT DNA
TỪ VIRUT WSSV GÂY BỆNH ĐỐM TRẮNG
TRÊN TÔM VÀ RNA TỪ VIRUT VNN GÂY
BỆNH HOẠI TỬ THẦN KINH TRÊN CÁ BIỂN
GVHD: Nguyễn Văn Duy


THÀNH VIÊN NHÓM

1. Bùi Thùy Hương
2. Cao Thị Kim Hằng
3. Trần Thị Thu Dịu
4. Phan Thị Bích Hội
5. Đào Thị Phương Dung
6. Đặng Thị Kim Chung


MỤC LỤC
Quy trình tách DNA & RNA

I

IV

II

Quy trình tách DNA từ WSSV
gây bệnh đốm trắng ở tôm

III

Quy trình tách RNA từ VNN gây
bệnh hoại tử thần kinh ở cá biển

So sánh quy trình tách DNA & RNA


i. Quy trình tách dna & rna
1. Quy trình tách DNA:

1
Phương pháp
tách chiết DNA

2

gồm 3 bước:

3

Phá vỡ màng tế bào
và màng nhân
Loại bỏ thành phần
không phải DNA, chủ
yếu là protein
Làm kết tủa
acid nucleic

i. Quy trình tách dna & rna
1. Quy trình tách DNA:

Sơ đồ tách chiết DNA tổng số


i. Quy trình tách dna & rna
2. Quy trình tách RNA:
Các

RNA đều là phân tử không bền, dễ bị
phân hủy bởi các Rnase, Rnase có ở khắp nơi.
Chính

vì vậy, phải có nhiều biện pháp để
tránh tạp nhiễm bởi các Rnase từ môi trường:
thao tác trong điều kiện vô trùng.
Tách

RNA cũng gồm 3 bước như tách DNA


i. Quy trình tách dna & rna
2. Quy trình tách RNA:

1

Nghiền tế bào mô

2

Loại bỏ protein bằng phenol

3

Tạo tủa


II. Quy trình tách DNA từ WSSV gây
bệnh đốm trắng trên tôm
1. Giới thiệu khái quát về tôm
 Giá

trị dinh dưỡng cao.

 Giá

thành ổn định.

 Giúp

ngư dân xóa đói, giảm nghèo và làm giàu
trong cơ cấu công tác chuyển dịch cơ cấu kinh tế trong
lĩnh vực thủy sản.


II. Quy trình tách DNA từ WSSV gây
bệnh đốm trắng trên tôm
2. Nguyên nhân xuất hiện bệnh đốm trắng ở tôm

a. Virut WSSV gây bệnh đốm trắng trên tôm
 Virut
 Có

thuộc chi Uwhispovirus, họ Nimaviridae.

dạng hình elip rộng.

 Vật

chất di truyền là DNA, có màng bao, với
phụ bộ đặc trưng giống như lông mao.


II. Quy trình tách DNA từ WSSV gây
bệnh đốm trắng trên tôm
2. Nguyên nhân xuất hiện bệnh ốm trắng ở tôm
a. Virut WSSV gây bệnh đốm trắng trên tôm


II. Quy trình tách DNA từ WSSV gây
bệnh đốm trắng trên tôm
2. Nguyên nhân xuất hiện bệnh đốm trắng ở tôm
b. Bệnh đốm trắng trên tôm:


Do thời tiết bất thường, vùng nuôi ô nhiễm là nguyên
nhân chính.



Theo các nhà khoa học, tác nhân gây ra bệnh đốm trắng
trên tôm bao gồm virus hoặc vi khuẩn gây ra.


II. Quy trình tách DNA từ WSSV gây
bệnh đốm trắng trên tôm
2. Nguyên nhân xuất hiện bệnh đốm trắng ở tôm
b. Bệnh đốm trắng trên tôm:


II. Quy trình tách DNA từ WSSV gây
bệnh đốm trắng trên tôm
3. Tác hại của virut WSSV gây lên tôm
a. Dấu hiệu chính của bệnh


Virus sẽ cư trú ở nhiều bộ phận của tôm như mô dạ dày,
mang, trứng, mắt, chân bơi…



Bệnh đốm trắng có thể xảy ra ở tất cả các giai đoạn nuôi
tôm, nhưng chủ yếu nhất ở giai đoạn từ 20-60 ngày tuổi.



Bệnh có khả năng lây lan rộng và truyền qua nhiều
đường khác nhau như: truyền từ tôm bố mẹ sang tôm
con, từ nguồn nước cấp, truyền trong quá trình lột xác

khi tôm khỏe ăn tôm bệnh.


II. Quy trình tách DNA từ WSSV gây
bệnh đốm trắng trên tôm
3. Tác hại của virut WSSV gây lên tôm
b. Triệu chứng


Tôm ăn nhiều đột ngột, sau đó giam d
̉
ần. 



Tôm có thể bị bệnh đen mang hoặc cụt râu, tôm 
bị bệnh có dấu hiệu bơi lờ đờ trên mặt nước. 



Dấu hiệu  đặc trưng là những đốm trắng tròn 
với kích thước từ 0,5­2mm dưới lớp vỏ kitin  ở 
phần giáp đầu ngực và đốt bụng cuối cùng. 


II. Quy trình tách DNA từ WSSV gây
bệnh đốm trắng trên tôm
3. Tác hại của virut WSSV gây lên tôm
c. Nguyên nhân khiến bệnh đốm trắng ở tôm khó được kiểm
soát

Mật độ nuôi cao và thức ăn công nghiệp

1

4

2

Nhiều loài có thể trở thành vật chủ
trung gian

3

Cấu trúc di truyền đặc biệt
Tôm nuôi có khả năng mắc nhiều bệnh
cùng lúc


4. Quy trình tách chiết DNA từ virut WSSV gây bệnh
đốm trắng trên tôm sú
20mg mẫu lớp biểu
bì vỏ đầu tôm

Li tâm 
(14000v/p, 
15p)
Thu tủa

Nito lỏng

Nghiền

Rửa tủa bằng
cồn 70%

Đặt tủ lạnh
 (­25◦ C, 1h)

Làm khô bằng
speedvac

Kết tủa

Hòa tan bằng dd
TE-Rnase

250µl phenol
Đặt tủ lạnh 
(4◦ C, 30p)
250µl chloroform:isoamyl
alcohol (24:1)
Li tâm 
(14000v/p, 
10p)

Thu dịch 
nổi

Cồn 96%+muối Na
axetat 3M, pH=5,2

Thu DNA


III. Quy trình tách RNA từ VNN gây
bệnh hoại tử thần kinh ở cá biển
1. Giới thiệu tổng quát về cá biển
Cá biển còn có chứa nhiều clo và fluo có tác
dụng tốt đối với xương và răng. Ngoài ra cá còn
có DHA đóng vai trò quan trọng trong quá trình
sinh trưởng của tế bào não và thần kinh.


III. Quy trình tách RNA từ VNN gây
bệnh hoại tử thần kinh ở cá biển
2. Nguyên nhân xuất hiện bệnh hoại tử thần kinh ở cá
a. Nguồn gốc


Vi rút gây bệnh hoại tử thần kinh thuộc giống betanoda
vi rút, họ nodayiridae được bắt nguồn từ tên một ngôi
làng ở Nhật Bản.


III. Quy trình tách RNA từ VNN gây
bệnh hoại tử thần kinh ở cá biển
2. Nguyên nhân xuất hiện bệnh hoại tử thần kinh ở cá
a. Nguồn gốc
Cấu trúc gen


Betanodavirut không có màng bào, hình cầu, đường kính
25-30nm 20 mặt đối xứng, vỏ bao gồm 180 protein.



Bộ gen của betanodavirut là RNA mạch đơn, sợi + ,
tuyến tính hai phía có cấu trúc phân đoạn gồm 2 tiểu
phần RNA-1và RNA-2.



Đôi khi bộ gen của betanodavirut có sở hưu thêm một
phân đoạn RNA-3.


III. Quy trình tách RNA từ VNN gây
bệnh hoại tử thần kinh ở cá biển
2. Nguyên nhân xuất hiện bệnh hoại tử thần kinh ở cá
b. Cơ chế xâm nhập

Chúng xâm nhập vào sinh vật sống, sinh sản bên trong ký
chủ và gây bệnh bằng cách làm tổn hại các mô của ký chủ.


III. Quy trình tách RNA từ VNN gây
bệnh hoại tử thần kinh ở cá biển
3. Tác hại cuả VNN gây lên cá
Triệu chứng




Cá chết và hấp hối hầu hết
bóng hơi trương phồng.
Cá bơi lội hỗn loạn không định
hướng, hàm dưới có vết hoại tử
do chà sát với lưới.


III. Quy trình tách RNA từ VNN gây
bệnh hoại tử thần kinh ở cá biển
3. Tác hại cuả VNN gây lên cá
Cá dưới 20 ngày tuổi bệnh không có dấu hiệu rõ. Cá sau
20-45 ngày tuổi dấu hiệu bệnh cá yếu bơi gần tầng mặt. Cá 45
ngày tuổi đến 4 tháng tuổi khi bị bệnh bơi không định hướng
(bơi quay tròn hoặc xoáy chon ốc), kém ăn hoặc bỏ ăn.


4. Quy trình tách RNA từ virut VNN gây bệnh hoại tử
thần kinh trên cá biển
20mg mẫu
(mắt hoặc não cá)

Ly tâm
12000v/p,
15p, 4◦C

100-200µl trizol

Nghiền
550-600µl trizol

Nghiền

Ủ nhiệt độ
phòng 5p

Thu
dịch nổi

Hòa tan mẫu
với 50-100µl
nước tinh khiết

500µl isopropanol/1ml trizol
Ủ 15-30◦C, 10p

Ủ 15-30◦C, 2-3p

200µl cloroform/1ml trizol

Thu dịch nổi
Ly tâm 12000v/p,
10p, 4◦C

Ly tâm
12000v/p,
10p, 4 ◦C

Bỏ Ethanol
Ly tâm
75000v/p, 5p,
4 ◦C

Bỏ isopropanol

Thu
kết tủa

Rửa tủa bằng
ethanol 75%
(500µl
isopropanol/1m
l trizol)


IV. SO SÁNH NGUYÊN LÝ VÀ QUY
TRÌNH TÁCH CHIẾT DNA & RNA
**Giống nhau


Sử dụng phương pháp kết tủa để tinh sạch nucleic.



Các bước cơ bản giống nha (lấy mẫu, tách chiết acid
nucleic, tinh sạch acid nucleic bằng cồn).



Các kỹ thuật giống nhau (ly tâm, nghiền ủ).


IV. SO SÁNH NGUYÊN LÝ VÀ QUY
TRÌNH TÁCH CHIẾT DNA & RNA
** Khác nhau
DNA
 Phá màng bằng nito lỏng
 Phenol, chloroform,
isoamul alcohol
 Ly tâm 2 lần

RNA
 Phá màng bằng trizol
 Trizol
 Ly tâm 4 lần