Các dẫn xuất của furocoumarin từ rễ cây angelicae dahuricae (bạch chỉ) và ảnh hưởng của chúng tới sự điều hòa phiên mã gene RXRα

Các dẫn xuất của Furocoumarin từ rễ cây Angelicae
Dahuricae (Bạch chỉ) và ảnh hưởng của chúng tới sự
điều hòa phiên mã gene RXRα.


I. Giới thiệu
II.Thực nghiệm
III.Kết quả & thảo luận
IV.Kết luận


I. Giới thiệu

•

Rễ Angelica Dahurica (Bạch Chỉ), được sử
dụng rộng rãi trong y học truyền thống ở
Trung Quốc cho các bệnh như: đau răng,
đau đầu, ho, hen suyễn, sổ mũi …


I. Giới thiệu

•
•
•

Nhiều nghiên cứu gần đây tập trung vào tác dụng chống ung thư của coumarin
chiết xuất từ rễ Angelicae Dahuricae, bởi khả năng điều hòa phiên mã gene
RXRα.
Trong 18 coumarin được tìm thấy, 13, 16, 18 (mỗi chất 20µM) có thể làm tăng

đáng kể chức năng phiên mã gen của nuclear receptor RXRα
Trong khi đó, 7-9, 13, 14 & cấu trúc mới – 1 ( mỗi thứ 20 µM) giảm rõ rệt sự
phiên mã của RXRα kích thích bởi 9-cis-retionid acid.


I. Giới thiệu

•

X receptor-α(RXRα) Retinoid là 1 thành phần trong nhóm nuclear receptor của
nhân tố phiên mã ligand-ativated và là 1 thành phần heterodimer bắt buộc cho
các nuclear receptor khác.

•

Nó đóng vai trò mấu chốt trong nhiều quá trình sinh học khác nhau như ung
thư, tiểu đường, béo phì, xơ vữa động mạch


II. Thực nghiệm

1. Vật liệu
•. Rễ khô của cây Angelicae Dahuricae (Bạch chỉ), xuất xứ:
Trung Quốc

•. Plasmid (pBind RXRα LBD và pG5 luc) được cung cấp từ

Viện Burnham, Medical Research, Trung tâm Ung thư, La
Jolla, CA, USA.

•. Tế bào phôi người 293T


II. Thực nghiệm
2. Ly trích & cô lập
Mẫu được nghiền trích dịch chiết, đun hồi lưu 2 giờ trong ethanol 60%.
Dịch được hòa tan trong EtOAc và sau đó được tinh sạch qua hàng loạt các bước sắc
kí cột sillicagel , YMC gel ODS và rửa bằng methanol, MeOH-H2O


II. Thực nghiệm
3. Cấu trúc tế bào và phương pháp phân tích Dual – Luciferase reporter Gene

•

Tế bào phôi người 293T được nuôi trong DMEM trung bình chứa 10% huyết
thanh bào thai bò (FBS)

•

Tế bào được chuyển nạp với hai plasmid, 30 ng pBind RXRα LBD và 60 ng pG5 luc
sử dụng Lipofectamine 2000 (Invitrogen).


II. Thực nghiệm
3. Cấu trúc tế bào và phương pháp phân tích Dual – Luciferase reporter Gene

•
•

24 giờ sau, các tế bào được tiếp xúc với các hợp chất thử nghiệm trong 12 h
Sau đó, các tế bào rửa bằng PBS và phân giải với bộ đệm passive lysis buffer (1 ×
PLB) trong máy rocking platform trong 15 phút


II. Thực nghiệm
3. Cấu trúc tế bào và phương pháp phân tích Dual – Luciferase reporter Gene

•

Các hoạt động của Firefly luciferase và Rellina luciferase đã được kiểm tra bằng
hệ thống phân tích Dual-Luciferase Reporter.

•

Tỷ lệ hoạt động của Firefly luciferase và Rellina luciferase là cơ sở để đánh giá
hoạt động phiên mã của RXRα.


III. Kết quả & thảo luận

•

Sắc kí dịch chiết EtOAc-soluble của rễ Angelicae Dahuricae cho ra 1
Furocoumarin mới là 1, cùng với 17 Furocoumarin khác là 2-18.


III. Kết quả & thảo luận

III. Kết quả & thảo luận

•

Hợp chất 1 thu được ở dạng bột trắng vô định hình. Công thức phân tử là
C17H6O5, được thành lập bằng phương pháp phân tích quang phổ, HR – ESI –
MS


III. Kết quả & thảo luận

•
•
•

Quang phổ IR -> nhóm α,β-unsaturated lactone, & α,β-unsaturated carbonyl
1
Quang phổ H-NMR -> 2 methyl, 1 methoxyl, 5 olefinic & 1 methylene proton
Quang phổ

13

C-NMR & DEPT ->18 carbon, bao gồm 2 methyl, 1 methoxyl, 5

olefinic methane, 2 ketone carbonyl & 5 quarternary carbon


III. Kết quả & thảo luận

•

Tất cả các hợp chất được phân lập đều là dẫn xuất của furocoumarin. Tác dụng
của chúng lên hoạt động phiên mã của RXRα được đánh giá thông qua hệ thống
phân tích Dual – Luciferase reporter.

•

9-cis-retinoid acid (9-cis-RA) được biết đến rộng rãi như là một yếu tố tăng
cường sự phiên mã


III. Kết quả & thảo luận

Tế bào chuyển gene 293T được xử lý với những hợp chất ( 20 µM) hoặc là 9 – cis –
retinoid acid (RA) (0.1 µM). trong 12h. Hoạt động của Firefly luciferase và Rellina
luciferase được đo đạc. Mức độ ảnh hưởng từ các hoạt động của luciferase được
tính toán thông qua tỉ lệ hoạt động của Firefly luciferase và Rellina luciferase. RA
được sử dụng như một yếu tố kiểm soát dương


III. Kết quả & thảo luận

•

Trong các hợp chất ly trích được, 18 (20 µM) tăng đáng kể (P < 0.01) sự kích hoạt
phiên mã ở RXRα, trong khi 13 và 16 (20 µM) cho thấy ảnh hưởng yếu (P < 0.05)
trên sự tăng cường phiên mã.


III. Kết quả & thảo luận

•

18 với ảnh hưởng phụ thuộc nồng độ trong khoảng 10 – 40 µM


III. Kết quả & thảo luận

•

7 – 9 , 13, 14 và hợp chất mới là 1 (mỗi loại 20 µM) cho thấy sự giảm đáng kể
ảnh hưởng của các hoạt động của luciferase kích thích bởi 9 – cis – RA so với chỉ
sử dụng 9 – cis – RA


III. Kết quả & thảo luận

Xử lí đồng thời 9 – cis – Retinoid acid và các hợp chất thu được.


IV. Kết luận

•
•
•

Trong số những dẫn suất furocoumarin, hợp chất mới 1, và các hợp đã biết là 79, 13, 14, 16 và 18 cho thấy tiềm năng hoạt động trong việc điều chỉnh chức
năng kích hoạt phiên mã của RXRα.
Furocoumarin có thể đem lại một phương thức mới trong việc chống lại các
bệnh nan y có liên quan đến RXRα, ví dụ như chống ung thư và chống bệnh tiểu

đường.
Các hoạt động sinh học của các chất chuyển hóa và cơ chế phân tử hoạt động
của Furocoumarin liên quan đến RXRα nuclear receptor có thể được nghiên cứu
kĩ hơn trong tương lai.


Tài liệu tham khảo

•

Furocoumarin Derivatives from Radix Angelicae Dahuricae and Their Effects on
RXRα Transcriptional Regulation. Dong-Ping Liu , Qiang Luo, Guang-Hui Wang,
Yang Xu , Xiao-Kun Zhang, Quan-Cheng Chen and Hai-Feng Chen