Phân lập và tuyển chọn chủng vi khuẩn có khả năng sinh acid lactic cao từ sữa Người và Động vật. (Khóa luận tốt nghiệp)

--------------o0o--------------

: Chính quy
Chuyên ngành
Khoa

: CNSH - CNTP
: 2011 2015

THÁI NGUYÊN - 2015


--------------o0o--------------

:

: Chính quy
Chuyên ngành
Khoa

: K43 - CNSH
: CNSH - CNTP
: 2011 2015
ThS. D

ng M

THÁI NGUYÊN - 2015


i

L IC
Trong su t quá trình th c t p t i phòng Công ngh Lên men, Khoa
Công ngh Sinh h c và Công ngh Th c ph

i h c Nông Lâm

c r t nhi u s
CNSH - CNTP, th

t Ban ch nhi m Khoa

ng d n, b

c h t, em xin chân thành c
Khoa CNSH -

u ki

gi ng viên
ng d n và t

em

hoàn thành khoá lu n này.
Em xin g i l i c
Tu

c t i ThS. D

ng M nh

ng, ThS. Bùi

i Lâm gi ng viên Khoa CNSH -

ng

d n em các thao tác th c hành và ch ra cho em nh ng sai l m giúp em hoàn
thành t t khoá lu n.
Em xin chân thành c

n các th y cô trong Khoa CNSH - CNTP,

ih

n tình ch b

em trong

quá trình h c t p và hoàn thành khoá lu n này.
Cu i cùng em xin g i l i c
bên c

n bè, nh

i

em trong su t th i gian th c hi n

khoá lu n.
Em xin chân thành c
Thái nguyên, ngày

tháng

Sinh viên th c hi n

Nguy n Th H ng Ng c


ii

DANH M C B NG
Trang
ic

8

.......................................................... 14
......................................... 22
............................................ 23
e Man,Rogosa and Sharpes) (g/l)..........23
3.4:

.................................... 35

:

.................................. 35

:

............................... 36

7:

an...................................... 37

:

.. 39
........ 44

3
............................................................................................................. 45

.......................................... 50

......................................................... 51
6:

.............................. 52

7
P2(2) .................................................................................................... 54
8:

............................................. 55

9:

Pichia anomala 9a... 56
:

........................................ 56


iii

Trang
Hình 3.1:

............................................................ 34
.................. 41

3

Hình 4.2:
Hình 4.3:

................. 45
các

.............. 46

Hình 4.4

............................ 47

Hình 4.5:

............................................................ 57


iv

DANH M C T , C M T

VI T T T

ATP

: Adenosin Triphosphat

DNA

: Deoxyribonucleic acid

GRAS

: Generally Recognized As Safe

LAB

: Lactic acid Bacteria

MRS

: de Man, Rogosa and Sharpes

OD

: Optical Density

ONPG : o nitrophenyl- -D-glucoside


v

M CL C
Trang
:

............................................................................................ 1
................................................................................................... 1
..................................................................................... 2
...................................................................................... 2
....................................................................................... 2

1.4.1.

....................................................................................................2
....................................................................................................2

:

................................................................. 3
......................................................... 3
................................................................................................ 3

....................................... 3
........................................................................................ 4

2

......................................................................... 4
.................................................................................. 6

2.2. Enzyme lactase........................................................................................... 6
2.2.1. Lactose .................................................................................................... 6
.............................................................................. 7
.......................................... 7
....................................................................................................7
.............................................................8
............................................................10

tic..............................................................13
...................................................17

:
......................................................................................................................... 22
........................................................... 22


vi

............................................................ 22
..................................................................... 22
.................................................................................................................22
...................................................................................................23

3.4.

.................................................................................. 23
................................................................................ 24
.......................................................................... 24
......................................24

3.6

..........................................................................25
.......................................................27
............................................................................................29
...............................................................29

Vis ..................................................30
.............................................31

............................................................................................................................32
...........................33

:

........................................................ 38

................................................................................................................ 38

........................................................................................................ 41
4.3.

............................ 52
..................... 52

men Pichia anomala 9a .................................................................................. 55
.................................. 56


vii

4.6.1.

...............................56
.........................................................56

:

........................................................ 58
.................................................................................................... 58
.................................................................................................. 58
............................................................................ 60
...........................................................................................................60
....................................................................................................62
..........................................................................................................62


1

1.1.

vang [19]; (Pannapa Powthong và cs, 2015) [31].

tr

t

qua
2011) [15].

(Schillinger và cs, 1989) [35];
(Tserovska và cs, 2006) [37].

m ra các

cao

acid lactic cao


2

1.2.

ài

lactic cao

.

1.3.
-

(bò, dê,

-

có

- Nghiên c

-

1.4.
1.4.1.
-

tích s
1.4.2.
-

sau này.
-


3

2.1

lactic (LAB)

2.1

[20]; [21].
2.1.2.

lactic (LAB)

Carl
Wilhelm
3

m 1857

Joseph
Bacterium lactic

Streptococcus

lactic.

(
14].

[6


4

2.1.3.

cytochromes (

Bifidobacterium

polisaccharid khác.
0,5 - 1,5

-8

lact

=5,5÷6.
0
o

0
0

10÷30 phút [21]; (Moussa M.E. Salem, 2013) [30]; (Sawsan Abdelaziz
Abdullah và cs, 2010) [34].
2.1.4.

nhau


5

Lactobacillaceae, chúng th
Aerococcus,
Carnobacterium, Enterococcus, Lactobacillus, Lactococcus, Leucnostoc,
Oenococcus, Pediococcus, Streptococcus, Tetragenococcus, Vagococcus và
Weissella.Tr

Bifidobacterium

là Lb. bifidum

Bifidobacterium

2.1.4.1.

[21].
(

) [6]

và

các

Hình que: Lactobacillus, Carnobacerium.
Streptococcus, Leuconotoc, Pedicoccus.
Weissella

Bifidobacterium

(Aerococcus, Tetragenococcus, Pediococcus).

2.1.4.2.

(Espina. F và cs, 1979) [25]

enzyme aldolaza

Streptococcus

Streptococcus cermoris

Lactobacterium acidophilum, Lactobacterium helveticum, Lactobacterium
bulgaricus.


6

formic... và CO2
enzyme phosphoketolaza.

: Leucnostoc, Oenococcus, Weissella

Lactobacillus.
2.1.5.

Chi Lactobacillus
ue dài, Lactobacillus
plantarum

-1,1×3Lactobacillus bulgaricus

-0,9×5Chi Streptococcus
Leuconostoc
ovan (0,5-0,8×1,6µm
Lactococcus

- 3µm,
Leuconostoc song chúng

2002) [14].
2.2. Enzyme lactase
2.2.1. Lactose
Lac
s

-D-galactopyranosyl

(1,4)- -D-

c

2

95% (Rohit Sharma và

cs, 2013) [32].
4,4

5,2% (theo Ganzle, 2008) [21

Abdelaziz Abdullah và cs, 2010) [33].

(Sawsan

7

2
-galactosidase.
-

[21].

- -D-

-

nitro
-450
-650
0

2.3.

C [21].

sinh lý, sinh hóa

2.3.1.
Lactobacillaceae

Vi
Eubacteriales.

t

sinh lý

atcacbon và sinh
ax

-

DL (

;
.

[3]

lase;


8

(thiamin, biototin, axit folic, lactoflavin, axit pentotenic, axit n
các axit amin (

[3].

2.1:

c
2007) [6]
DNA

Hình

(%GC)

Streptococus

34 - 46

Leuconostoc

36 43

Pedicoccus

34 42

Lactobacsillus

Que

Bifidobacterium

Khác
nhau

2.3.2.

32 53

Lên men lactic và acetic

55 - 67

[21]

2.3.2.1.

monosaccarit (glucoza, fructoza, manoza), các disaccarit (saccaroza, lactoza,


9

2.3.2.2.

.

pepton.
2.3.2.3.

,

2.3.2.4.

xitric, axit oleic.

n các

2.3.2.5.

10

kali,

quá
2.3.2.6.

hóa hoàn toàn thành CO2 và H2

l

.

2.3.3. Quá trình

vitamin, axit amin và khoáng c
50oC. Tuy nhiên
o

C

(

[6].

v


11

O2
(

[6];

(Axelsson L.T, 2004) [22].
2.3.3.1.
ng hình:
C6H12O6

2CH3

CHOH COOH + 94 Kcal

thành triosophosphat (dihydroxyaxeton-

+

EMP) (

[6];

(Khalisanni Khalid, 2011) [28].
Streptococcus lactics:
, phát
-35o
là 10o
(

40

45oC. M

ch

à cs, 2012) [7].
Lactobacillus plantarum: Là
o

(

) [12].

ng


12

2.3.3.2.

2...

C6H12O6

CH3-CHOH-COOH + HOOC-CH2-CH2-COOH + CH3-COOH +

CH3-CH2-OH + CO2 + H2
aldolaza và

Glucose-6-P, 6-

2

Ribulose-

-3P và

axetyl-

trio

axit lactic còn có CO 2
ATP/Glucoza (

[6].

Lactobacillus brevis (L. brassica fermentati):

CO2

(
à cs, 2012) [7].
Lactobacillus buchneri: L

chua (Liu và cs, 2011) [29].


13

2.3.4.
2002) [14]

2.3.4.1.

.


14

2.2:

Streptococcus spp

Phomát

Leucolostoc spp
Streptococcus lactic

Kefir

Lactobacillus bungaricus
Lactobacillus bungaricus

CHLB Nga,

Lactobacillus leichmannii

Kumiss

Á
Streptococcus lactic vartaette

Taette

Lactobacillus bungaricus

Yoghurt

Streptococcus thermophilus

Pediococcus ceravisiae

Xúc xích khô

Lactobacillus spp

Izushi

Kim Chi
Ôliu

Scandinavia

Ôliu xanh
Leucolostoc mensenterriides
Lactobacillus plantarum

Idli

Leucolostoc mensenterroides

Bánh chua

Leucolostoc mensenterroides
vùng khác


15

2.3.4.2.

không quá 5

2002) [14].
2.3.4.3.
lactic và các

g sinh
áng sinh

(
].


16

-2-lactylat canxi và sterol lactylat

không và

p