Nghiên cứu tổng hợp tạp chất B của Terazosin dùng trong kiểm nghiệm (Khóa luận tốt nghiệp)

B YT
IH

-----

C HÀ N I

------

TR N TH OANH
Mã sinh viên: 1201452

NGHIÊN C U T NG H P
T P CH T B C A TERAZOSIN DÙNG
TRONG KI M NGHI M

2017


-----

------

Mã sinh viên: 1201452

NGHIÊN C U T NG H P
T P CH T B C A TERAZOSIN DÙNG
TRONG KI M NGHI M

ThS.

HÀ N I, 2017


gian qua.
ThS
-

-

18 tháng 5
Sinh viên


M CL C
DANH M C CÁC KÝ HI U, CH

VI T T T

DANH M C CÁC B NG
DANH M C CÁC HÌNH V

TH

TV

1
NG QUAN

2

1.1. Terazosin ..........................................................................................................2
1.1.1. M t s thông tin chung v terazosin .........................................................2
1.1.2. Ch

nh c a terazosin...............................................................................2

1.1.3. M t s thành ph m ch a terazosin trên th

ng ...................................2

1.2. T p ch t B c a terazosintheo USP 37 ..............................................................4
1.2.1. M t s thông tin chung v t p ch t B c a terazosin .................................4
nh v gi i h n t p ch t B c a terazosin trong nguyên li u và thành
ph m ch a terazosin............................................................................................4
nh t p ch t B trongnguyên li u terazosin theo USP
37.........................................................................................................................4
1.3. T ng quan v m t s

d ng trong nghiên c

tài ...5

c ký l p m ng ..................................................................5
c ký l ng hi

...................................................7

h ng ngo i ............................................................11
i ph ............................................................12
c

ng t h t nhân ........................................12
nóng ch y.......................................................13
t tr

các h p ch t h

ng...............................................14
............................................14


1.4.1. Chi t ........................................................................................................14
1.4.2. S c ký c t ................................................................................................15
1.4.3. K t tinh....................................................................................................15
ng h p d n ch t phenol..................................................16
........................................................................................16
........................................................................................16
........................................................................................16
........................................................................................17
1.

........................................................................................17

1.6. Tình hình nghiên c u

Vi t Nam và trên th gi i ........................................17

1.6.1. Tình hình nghiên c u

Vi t Nam ..........................................................17

1.6.2. Tình hình nghiên c u trên th gi i..........................................................18

U, THI T B , N
PHÁP NGHIÊN C U

21

2.1. Nguyên li u ....................................................................................................21
2.2. Thi t b ...........................................................................................................21
2.3. Nôi dung nghiên c u ......................................................................................22
2.4.

u................................................................................22
ng h p t p ch t B ...........................................................22
s n ph m thô .......................................................22

2.4.3. Kh

nh c u trúc ch t t ng h

c ................................................23

nh gi i h n t p ch t ......................................................................23
ng IBT ........................................................................23
nh gi i h n t p ch t B trong nguyên li u ch a terazosin .............23


C NGHI M, K T QU VÀ BÀN LU N

24

3.1. T ng h p t p ch t B c a terazosin .................................................................24
3.1.1. Nguyên t c : ............................................................................................24
3.1.2. Quy trình t ng h p chung: ......................................................................24
l a ch

u ki n ph n ng thích h p ......................25

3.1.4. Kh

n diazo hóa ..................................................................25

3.1.5. Kh

n th y phân ..................................................................29

3.1.6. Quy trình t ng h p t p ch t B c a terazosin...........................................32
3.2. Ki

tinh khi t c a s n ph m thô .......................................................32
nóng ch y ............................................................................32

3.2.2. Ki

tinh khi t c a s n ph m thô b ng TLC ...............................33

3.3. Tinh ch IBT thô ............................................................................................34
3.3.1. Chu n b c t s c ký .................................................................................34
u lên c t ......................................................................................34

3.3.3. Ti n hành r a gi i ...................................................................................34
3.4. Ki

tinh khi t c a s n ph m tinh ch ................................................35
nóng ch y ............................................................................35

3.5. Kh

nh c u trúc c a s n ph m tinh ch ...................................................37
IR................................................................................................37

3.5.2. Ph kh i MS............................................................................................38
3.5.3. Ph NMR ................................................................................................38
3.5.4. K t qu phân tích nhi t tr
nh gi i h n t p ch

ng .......................................................39
ng s n ph m. .....................40

nh t p ch t liên quan b ng TLC ...................................................40


nh t p ch t liên quan b ng HPLC.................................................40
ng IBT ......................................43
3.7. S d ng s n ph

ki m tra gi i h n t p B trong nguyên li u terazosintheo

USP 37...................................................................................................................45
u ki n s c ký ......................................................................................45

3.7.2. Chu n b dung d ch .................................................................................45

N

49

4.1. T ng h p ........................................................................................................49
4.2. Phân l p s n ph m thô....................................................................................49
4.3. Kh o sát các h s
ký tinh ch b

t p ch t c a s n ph m thô và h s c
c ký c t. ............................................................49

4.4. Tinh ch ..........................................................................................................50
tinh khi t c aIBT b

nh nhi

nóng ch y ..50

4.6. Kh

nh c u trúc c a IBT tinh ch ...........................................................50

4.7. V

nh gi i h n t p ch t liê

ng c a IBT b

pháp HPLC............................................................................................................51
4.8. V s d ng s n ph m tinh ch

c ki m tra gi i h n t p ch t B trong

nguyên li u terazosin.............................................................................................52

T LU N VÀ KI N NGH

53

5.1. K T LU N ....................................................................................................53
5.2. KI N NGH ...................................................................................................53

TÀI LI U THAM KH O
PH L C


DANH M C CÁC KÝ HI U, CH

VI T T T

CRS (Chemical reference standard)

: Ch t chu

i chi u

DMSO-d6

: Dimethylsulfoxid deuteri hóa

HPLC (High-performance liquid

: S c ký l ng hi

chromatography)
IBT (Impurity B of terazosin)

: T p ch t B c a terazosin

IR (Infranred)

: H ng ngo i

MS (Mass spectrum)

: Ph kh i

NMR (Nulear magnetic resonance)

:C

PA (Pure analysis)

: Tinh khi t phân tích

ng
ng t h t nhân

RSD (Relative standard deviation)

l ch chu

TLC (Thin layer chromatography)

: S c ký l p m ng

TB

: Trung bình

USP (United States Pharmacopoeia)

nM

i


DANH M C CÁC B NG
B ng 1.1. M t s thành ph m ch a terazosin trên th tr
B ng 1.2. Dãy ch t phenol th

ng ....................................3

c t ng h pt d n ch t halogenid c a vòng

th m...........................................................................................................................19
B ng 3.2. Hi u su tc a các ph n ng t ng h

i t l mol acid sulfuric

...................................................................................................................................25
B ng3.3. Hi u su tc a các ph n ng t ng h

i t l mol NaNO2 ........27

B ng 3.4. Hi u su t c a các ph n ng t ng h

i th i gian diazo hóa...28

B ng 3.5. Hi u su t c a các ph n ng t ng h

i nhi

th y phân ...30

B ng 3.6. Hi u su t c a ph n ng t ng h p kh o sát th i gian th y phân ..............31
B ng 3.7. Hi u su tc a quá trình t ng h p ..............................................................32
B ng 3.8. Nhi

nóng ch y c a s n ph m thô .....................................................33

B ng 3.9. Hi u su t tinh ch IBT thô và toàn b quá trình t ng h p và tinh ch IBT
...................................................................................................................................35
B ng 3.10. Nhi

nóng ch y c a s n ph

.......................................36

B ng 3.11. K t qu ph IR c a s n ph m ................................................................37
B ng 3.12. K t qu phân tích ph

1

B ng 3.13. K t qu phân tích ph

13

H-NMR c a s n ph m ......................................38
C-NMR c a s n ph m.....................................39

B ng 3.14. K t qu phân tích nhi t tr ng l
B ng 3.15. K t qu

ng c a s n ph m................................40

p c a h th ng s c ký.............................41

B ng 3.16. Giá tr th i gian l u c a các pic s c ký ..................................................41
B ng 3.17. Giá tr

phân gi i gi a hai pic li n k .................................................42

B ng 3.18. Di n tích pic c a các t p ch t trong IBT................................................42
B ng 3.19. Gi i h n các t p ch t trong IBT .............................................................43
B ng 3.20. K t qu
B ng 3.21.

nh hàm l

ng IBT tinh ch .............................................44

p c a h th ng s c ký .........................................46

B ng 3.22. Giá tr th i gian l u c a các pic s c ký ..................................................47


DANH M C CÁC HÌNH V

TH

Hình 1.1. Công th c c u t o c a terazosin................................................................2
Hình 1.2. M t vài bi t d

c ch a terazosin ..............................................................3

Hình 1.3. Công th c c u t o c a IBT........................................................................4
Hình 3.1.

n 1 ph n ng t ng h p IBTd ki n ...........................................24

Hình 3.2.

n 2 ph n ng t ng h p IBTd ki n............................................24

Hình 3.4. S

c a ph n ng kh o sát t l mol acid sulfuric ........................26

Hình 3.5. S

c a ph n ng kh o sát t l mol natri nitrit .............................27

Hình 3.6. S

c a ph n ng kh o sát th i gian diazo hóa.............................29

Hình 3.7. S

c a ph n ng kh o sát nhi

Hình 3.8. S

c a ph n ng kh o sát th i gian th y phân ............................31

Hình 3.9. S

n ph m thô .......................................................33

th y phân..............................30

Hình 3.10. S

kh

Hình 3.11. S

s n ph m tinh khi t...............................................................37

Hình 3.12. Gi

n tinh ch IBT qua c t ........................35

nhi t c a s n ph m tinh ch .....................................................39

Hình 3.13. S

m u tr

nh hàm l

Hình 3.14. S

dung d

Hình 3.15. S

dung d ch th

Hình 3.16. S

m u tr ng khi ki m tra gi i h n t p B trong nguyên li u

i chi

ng IBT................................43
nh hàm l

nh hàm l

ng IBT .................44

ng IBT ..........................44

terazosin ....................................................................................................................46
Hình 3.17. S

dung d

i chi ukhi ki m tra gi i h n t p B trong nguyên

li u terazosin .............................................................................................................47
Hình 3.18. S

m u nguyên li u terazosinkhi ki m tra gi i h n t p B trong

nguyên li u terazosin.................................................................................................47


TV
i lành tính tuy n ti n li t là m t b
pháp ph u thu t

ng g p

tuy n ti n li t

t vai trò quan tr ng

nhân có tri u ch ng. Tuy nhiên t l ph u thu
-adrenergic và thu c c ch

Bi n
nh ng b nh

m k t khi thu c ch n kênh

-reductase tr nên ph bi n

u tr

i lành

tính tuy n ti n li t [35], [40]. M t s nghiên c u d ch t h
d ng thu c ch

-adrenergic

ch ng minh r ng thu c ch

u tr

cs

i lành tính tuy n ti n li t và

-adrenergic có kh

m nhi u chi phí liên

n ph u thu t [31], [34].
Thu c ch
b

-adrenergic terazosin hydroc
i lành tính tuy n ti n li t

c s d ng r ng rãi cho

c bi t là nh

huy t áp do thu c làm gi m s co th

n ti n li t và làm gi m huy t áp

[33].
M t trong nh ng y u t

ng t i hi u qu

u tr b nh chính là ch

c a nguyên li u làm thu c và thành ph m thu c. Khi ki m tra ch
li u và thành ph m ch a terazosin, t

nM

thu c vào ngu n t p ch t chu

thành cao và th i gian

ng nguyên

nh v gi i h n t p

ch t B c a terazosin. Tuy nhiên, hi n nay vi c ki m nghi m
nhi

ng

t hàng lâu. Vì v y

c ta còn g p
c ngoài v i giá

c hi

c u t ng h p t p ch t B c a terazosin dùng trong ki m nghi m thu

i các m c

tiêu sau:
1. Xây d ng

t ng h p và tinh ch t p ch t B c a terazosin quy mô

phòng thí nghi m.

2.

nh hàm m, gi i h n t p ch t liên quan,
s n ph m và s d ng s n ph

u

ng c a

nh gi i h n t p ch t B trong nguyên

li u terazosin.

1


T NG QUAN
1.1. Terazosin
1.1.1. M t s thông tin chung v terazosin
- Công th c phân t : C19H25N5O4
- Phân t

ng: 387,43

- Công th c c u t o:

Hình 1.1.Công th c c u t o c a terazosin
- Tên khoa h c: (RS)-6,7-dimethoxy-2-[4-(tetrahydrofuran-2-ylcarbonyl)piperazin-1yl]quinazolin-4-amin.
- Tính ch t:
+ Tinh th màu tr ng, không mùi, tan t

c, ít tan trong

ethanol 96% và cloroform, không tan trong aceton và n-hexan.
+ Có kh
1.1.2. Ch
-S d

p th UV và IR [42].
nh c a terazosin
ng u

u tr

d ng cùng các thu c l i ti u, thu
l pn

t áp v a và nh
u tr

i l n. Có th s

t áp khác ho c s d

c

u tr không hi u qu ho c không phù h p. Tác d ng h

huy t áp hi u qu nh t là trên huy
-S d

gi m tri u ch

i lành tính tuy n ti n li t [30], [32], [36],

[38], [39], [41].
1.1.3. M t s thành ph m ch a terazosin trên th
Các thành ph m ch a terazosin trên th
bào ch

ng
ng v hãng s n xu t, d ng

ng ho t ch t (b ng 1.1 và hình 1.1).

2


B ng 1.1. M t s thành ph m ch a terazosin trên th
STT

Bi

c

ng

Hãng s n xu t

1mg, 2 mg,

1

Hytrin

2

Vicard-T

3

Teraz

4

Olyster

5

Teradip

1 mg

6

Terakare

2 mg

7

Teralfa

2 mg,5 mg

8

Terapress

2 mg

9

Unoter

2 mg, 5 mg

Pharmacia India

10

Terazosin

10mg

Apotex

ng
c s n xu t

Abbott

5 mg
2 mg

Abbott

1 mg,2 mg,

Unichem

5 mg

Laboratories

1 mg, 2 mg,

Zydus Alidac

5mg

Glenmark
Pharmaceuticals
Medley
Pharmaceuticals
Torrent
Pharmaceuticals
Intas
Pharmaceuticals

Hình 1.2. M t vài bi

3

c ch a terazosin

M


1.2. T p ch t B c a terazosintheo USP 37
1.2.1. M t s thông tin chung v t p ch t B c a terazosin
- Công th c phân t : C19H24N4O5
- Phân t

ng: 388,42

- Công th c c u t o:

Hình 1.3. Công th c c u t o c a IBT
- Tên khoa h c: 1-(4-Hydroxy-6,7-dimethoxy-2-quinazolinyl)-4-[(tetrahydro-2furanyl)carbonyl]piperazin.
1.2.2.

nh v gi i h n t p ch t B c a terazosin trong nguyên li u và thành

ph m ch a terazosin
- Trong chuyên lu n terazosin hydroclorid c a USP 37, gi i h n t p ch t B trong
terazosin hydroclorid là không quá 0,1% [42].
- Trong chuyên lu n viên nén terazosin c a USP 37, gi i h n t p ch t B trong viên
nén terazosin là không quá 0,2 % [42].
1.2.3. P

-

nh t p ch t B trong nguyên li u terazosin theo USP 37
ng: h n h

m citrat pH 3,2 và acetonitril (1685:315).

- Dung d ch chu n g c: Hòa tan m
chu n

ng chính xác kho ng 100,0 mg terazosin

nh m c 200 ml b

ng, tr

- Dung d ch chu n g c (1): Hòa tan m
cn

u.

ng chính xác t p chu n B c a terazosin

0,5 mg/ml.

- Dung d ch chu n: Pha loãng 5 ml dung d ch chu n g c và 4 ml dung d ch chu n
g c(1) thành 100 ml b ng h n h

c:acetonitril:methanol (60:30:10), tr

Pha loãng 10 ml dung d ch trên thành 100 ml b

4

ng.

u.


- Dung d ch th : Hòa tan chính xác kho ng 125,0 mg ch ph m trong 25,0 ml h n
h

c:acetonitril (1:1).

- C t: L7 (25cm x 4,
- Nhi

phân tích: 30°C

- Th tích tiêm: 20 µl
-T

dòng: 1,0 ml/phút

- Detector: UV 254 nm
- Th i gian ch y: 60 phút
- Yêu c u gi i h n t p ch t B: Không quá 0,1% [43].
1.3. T ng quan v m t s
1.3.1.

hóa lý s d ng trong nghiên c

tài

c ký l p m ng

1.3.1.1. Nguyên t c
S c ký l p m ng là m t k thu t tách các ch t
mà

ng di chuy n qua pha

ch m h n h p các ch t c n tách.

l a ch n phù h p theo t ng yêu c
cc

t h p ph

c tr i thành l p m

nh trên các phi n kính ho c phi n kim lo

c

ng nh t

ng là m t h dung

c tr n v i nhau theo t l

nh trong t ng

chuyên lu n. Trong quá trình di chuy n qua l p h p ph , các c u t trong h n h p
m u th

c di chuy n trên l p m ng

nhau. K t qu

c là m t s

h p ph , phân b
c a nhi

ngv i nh ng t
trên l p m n

khác

c a s tách có th là

i ion, sàng l c phân t hay s ph i h

ng th i

tùy thu c vào tính ch t c a ch

ng.
1.3.1.2.

-H s

Rf

c

di chuy n c a các ch t phân tích. Tr s c a

c tính b ng t l gi a kho ng cách di chuy n c a ch t phân tích và kho ng
cách di chuy n c

ng:

5


dR là kho ng cách t

m xu

dM là kho ng cách t

m xu

n tâm v t phân tích(cm).
nm

ng (

cùng

a v t, cm).
Rf có giá tr

ng gi a 0 và 1.
i Rr:

-H s

dR,X

a ch t phân tích (cm)

dR, C

a ch t chu n (cm)

Giá tr Rr càng g n 1 thì ch t phân tích và ch t chu

ng nh t.

1.3.1.3. ng d ng
-

nh tính: T

ng d a vào tr s Rf c a m u th và m u chu n ch y s c ký trong

u ki n.
- Th tinh khi t: M

tinh khi t c a h p ch t th hi n các v t l trên s

-

.

ng các ch t trong v t s c ký. M t là tách chi t
ch t phân tích trong v t s c ký b ng dung môi thích h p và
tích b ng m t k thu t thích h p. Hai là

ng ch t phân

ng tr c ti p trên b n m ng [2],

[3], [4].
1.3.1.4. M t s ví d v
Ví d 1
-

nh t p ch t

nh danh b ng TLC

nh t p ch t liên quan trong viên nén ibuprofen [3]
: silicagel GF254.
: n-hexan:ethyl acetat:acid acetic khan (15:5:1)
: Chi t m

ng b

ng kho ng 0,250 g ibuprofen v i

cloroform, chi t 3 l n, m i l n 10,0 ml cloroform
ml, thêm cloroform cho v

5,0 ml.

6

ch chi t còn kho ng 1


: Pha loãng 1,0

cloroform.
-

dung
kali permanganat 1% trong acid sulfuric loãng
120o

.

nh t p ch t liên quan trong nguyên li u cloroquin phosphat [28]

Ví d 2

- B n m ng: silicagel GF254.
- Dung d ch th : Hòa tan chính xác kho ng 0,50 g m u th

c, pha loãng

thành 10,0 ml b ng dung môi hòa tan.
- Dung d ch

i chi u (a): Pha loãng 1,0 ml dung d ch th t i 100,0 ml v

- Dung d

i chi u (b): Pha loãng 5,0 ml dung d

c.

i chi u (a) t i 10,0 ml v i

c.
- Phát hi n v t b ng soi
-

UV 254 nm.

t qu : B t k v t nào trên s
t trên s
không nhi

tv

c a dung d ch th , ngoài v t

c a dung d

i chi u (a) (1,0%) và

t s c ký trong s

c a dung d

i

chi u (b) (0,5%).
1.3.2.

c ký l ng hi

1.3.2.1. Nguyên t c
S c ký l ng hi

c ký tách các ch t ra kh i h n h p
ng là ch t l ng và

a trong c t là ch t r

i

d ng ti u phân ho c m t ch t l ng h p ph trên m t ch t mang r n, hay m t ch t
c liên k t hóa h c v i các nhóm h
h p ph , phân b
1.3.2.2. M t s

ng

. Quá trình s c ký l ng d a trên

i ion ho c phân lo i theo kích c .
a quá trình s c ký

7


R:

- Th

Là th i gian tính t khi ch

s

c phát hi n

-H s

n

c tiêm vào h th ng

tc

i c a nó.

:

- H s ch n l
B

A)

u thì kh
ch

tách riêng hai ch

m trong kho

ng

n 2.

- Hi u l c c t: Hi u l c c

t (N) và chi u

t (H). C t s

ng lý thuy t,

phân b ch

n m t tr ng thái cân b ng. M i t

m i t ng s
c gi

u cao H.
hay

hay

L là chi u cao c t s c ký.
W là chi u r
W1/2là chi u r
-H s b

½ chi u cao pic.

i AF cho bi t m

W1/20: Là chi u r
a: Là kho ng cách t

i c a pic trên s

.

1/20 chi u cao pic.
ng vuông góc h t

ng cong

c t i v trí 1/20 chi u cao c a pic.

ng thì yêu c u 0,9

c a AF càng g n 1 thì pic

i.
-

phân gi i
phân gi i c a 2 pic k

tách 2 ch t khác nhau trên m
c tính theo công th c :

8

u ki n s c


RS= 1,5 : Hai pic tách kh i nhau rõ ràng, ch xen ph nhau 0,3%.
RS= 1,0

n nhau còn xen ph nhau 0,4%.

RS= 0,75
1.3.2.3.
-

.

ng d ng

nh tính: D a vào th

a m u th và m u chu n, ho c

ch ng ph c a pic th và pic chu
-

nh tính ch t th .

ng: D a trên nguyên t c n

c a m t ch t t l v i chi u cao ho c

di n tích pic c

c s d ng :

+ Ph

chu n ngo i: Hai dung d ch m u chu n và m u th

hành s

u ki n.

c ti n

so sánh di n tích (ho c chi u cao) pic

c t m u th v i m u chu

tn

s tính ra n

các ch t

có trong m u th .
+

n: Thêm vào m u th nh

chu n

t c a ch t

ng v i các thành ph n có trong m u th r i ti n hành x lý m u và

s

u ki n. N

s chênh l ch n

t c a m u th

ng ch t chu n thêm vào) và s

c tính d a vào

di n tích (ho c

chi u cao) pic.
+

n hóa di n tích: D a trên nguyên t
a m t ch t trong h n h p nhi u thành ph

ng ph n

c tính b ng t l ph n

n tích pic c a nó so v i t ng di n tích c a t t c các pic thành ph n
trên s
-

.

nh gi i h n t p ch t: D a trên nguyên t
ch t trong h n h p nhi u thành ph

ng ph

c tính b ng t l ph

c a nó so v i t ng di n tích c a t t c các pic thành ph n trên s
th

am t
n tích pic

.

c gi i h n c a t ng t p ch t trong m u th ho c gi i h n t ng t p ch t

trong m u th [3], [4], [6], [9], [18].

9


1.3.2.4. M t s ví d v

nh danh b ng HPLC

nh t p ch t liên quan trong viên nén tenoxicam [3]

Ví d 1:
-

nh t p ch

ng: 0,12 g natri dodecyl sulfat trong 700,0 ml methanol, tr n v i 100,00 ml
dung d ch KH2PO4

- Dung d

u ch

n pH 2,8 b ng H3PO4.

ng b t viên ch a kho ng 0,1 g tenoxicam trong 100,0 ml

acetonitril 50 %, hút 5,0 ml dung d ch trên pha loãng thành 200 ml v
- Dung d ch (2): Pha loãng 1 ml dung d ch (1) thành 200,0 ml v
-

ng.
ng .

u ki n s c ký
+ C t: C8 (25 cm x 4 mm; 10 µm)
+ Detector: UV 254 nm
+T

dòng: 0,7 ml/phút

-

t qu : Trong s

c a dung d

c có b t k

pic ph nào có di n tích l

c a dung d ch (2)

(0,5%) và t ng di n tích c a các pic ph
c a pic chính trong s

cl

n l n di n tích

c a dung d ch (2) (2%).

nh t p ch t liên quan trong nguyên li u niclosamid monohydrat

Ví d 2:
[42]
-

ng: acetonitril:KH2PO4 2 g/l:Na2HPO4 1 g/l:tetrabutylamoni hydrosulfat 2
g/l (1:1:1:1)

- Dung d ch th : Hòa tan chính xác kho ng 50,0 mg ch ph m trong methanol, pha
loãng t i 50,0 ml v i methanol.
- Dung d

i chi u: Pha loãng 1,0 ml dung d ch th

thành 100,0 ml b ng

acetonitril. Pha loãng 1,0 ml dung d ch trên thành 20,0 ml v i acetonitril.
-

u ki n s c ký:
+ C t: 12,5 cm x 4 mm; 5
+T

dòng: 1,0 ml/phút

+ Detector: UV 230 nm
+ Th i gian ch y: g p hai l n th
-

a niclosamid

t qu :

10


c c a dung d ch th , t ng di n tích c a các pic, ngoài

+ Trong s
pic

ng v i niclosamid và pic c a dung môi, không l

tích pic chính trên s

c dung d

+ Gi i h n t p ch
c dung d

n l n di n

i chi u.

nh danh: 0,1 l n di n tích pic chính trên s

thu

i chi u.

1.3.2.5. M t s ví d v

ng b ng HPLC tính k t qu theo

n hóa di n tích
ng 6 h p ch t có trong v thân cây g o [20] v i

Ví d 1:
u kiên s c ký g m:

- C t Zorbax C18 (25 cm x 4,6 mm; 5µm) k t h p c t b o v Phenomenex C18
(ODS, Octadecyl; catrigge 15 x 30 mm ID)
-

ng: acid formic 0,1% trong acetonitril:acid formic 0,1% trong methanol,
ch

.

-T

dòng: 0,7 ml/phút

- Th tích tiêm m u: 10 µl
- Detector SPD- 20A: UV 280 nm
- Nhi

: 25°C
ng t p ch t liên quan c a conessin, kaempferol, nuciferin

Ví d 2:
t

c li u [19] v

i u ki n s c ký g m:

- C t s c ký ODS-3 (25 cm x 4,6 mm; 5µm)
-T

m phosphat pH 2,5: acetonitril (60:40)
dòng: 1,2 ml/phút

- Th tích tiêm: 50 µl
- Th i gian ch y s c ký: 10 phút
- Nhi

: 40°C

1.3.3.

h ng ngo i

1.3.3.1. Nguyên t c

11


S d

c tính h p th ánh sáng trong vùng h ng ngo

c sóng kho ng 760-

1000 nm) c a các ch t hóa h c. M i ch t khác nhau có kh

p th ánh sáng

trong vùng h ng ngo
1.3.3.2.
-

ng d ng

nh tính các ch t b ng cách so sánh v i ph chu n [1], [4], [6], [9].

1.3.4.

i ph

1.3.3.1. Nguyên t c
nt

ng trung bình (50-100

b n phá phân t h u

ng chân không cao (10-3-10-6 mmHg).
b ion hóa và b phá v thành các m nh.

c t o thành trong bu ng ion

c gia t c và tách riêng nh b phân tích kh i
Tín hi

ng v i các ion s

th

ng t

n detector.

c th hi n b ng m t s v ch (

khác nhau t p h p l i thành m t kh i ph

ho c ph kh i

ng

ng.

1.3.3.2. ng d ng
-

nh tính: Phân tích kh i ph có th cho chính xác kh
(M+1)+, (M+2)+

-

ng các ion phân t M+,

ng c a h p ch t hóa h c.

nh công th c c u t o: Dùng k thu t ion hóa thích h p phân tách ch t
nghiên c u thành nhi u m

làm rõ c u t o ghép n i c a chúng. Vi c bi n

gi i ph nên ph i h p v i ph NMR và ph IR.
-

ng: Dùng cách thi t l
v ch ph

1.3.5.

nh n
c

ng chu n ho

ng chu n cùng v

[1], [4].
ng t h t nhân

1.3.5.1. Nguyên t c
N u h t nhân nguyên t có t
ng s d

n h p th

t trong m t t

it

ng c a sóng vô tuy n và xu t hi n ph c ng

ng t h t nhân. Nh ng h t nhân nguyên t s th t nguyên t là s l thì có
momen t và cho tín hi u NMR. Các h t nhân nguyên t có kh

ng và s th t

nguyên t là nh ng s ch n thì không có momen t và không cho tín hi u NMR. V

12


trí c a tín hi u c

ng t proton trong ph NMR ph thu c vào m

nt

vùng lân c n qu
1.3.5.2. M t s
-

:

d ch chuy n hóa h

: Là s khác nhau v v trí h p th gi a proton c a m u

phân tích và c a ch t chu n

:
d ch chuy n hóa h c
X:

T n s c a m u phân tích

C:

T n s c a m u chu n

may :

T n s làm vi c c a máy

- H ng s

: Kho ng cách gi a các v ch c a tín hi u b

hi n b

i là h ng s

s J ph thu

- Di
hi

c bi u

hông gian và m

i tín hi u : Di

nt

vùng lân c n c a 2

i tín hi u t l v i s

ng proton cho tín

ng cong tích phân di

i tín hi u cho bi t s

i

c a proton cho tín hi u.
1.3.5.3. ng d ng
B
hi

d ch chuy n hóa h

ng s

i ta có th bi n gi i ph và k t h p v i thông tin c a các ph khác
nh c u trúc c a các h p ch t h

IR,

[1], [4].

1.3.6.

nóng ch y

- M i ch t khác nhau có nhi

nóng ch y khác nhau.

-N u

m ch y ch chênh l ch nhau 0,5°C thì có th xem s n ph m

-N

m ch y còn th

t.

m ch y lý thuy t ch ng t s n ph m thu

t ph i tinh ch l i.
-

i tín

m ch y:

13


m ch y b ng ng mao qu n.
m ch y b ng d ng c

n có l p kính hi n vi ho c kính lúp [9].

1.3.7.

t tr

ng

1.3.7.1. Nguyên t c

nh kh

ng c a m u v t ch t b m

chuy

t hàm c a nhi

c a chúng có th b m

c nh n vào) trong quá trình

. Khi m t v t ch t b nung nóng, kh

it

ng

c t các ph n

ng hóa h c gi i phóng khí.
1.3.7.2.
-

ng d ng
nh kh

ng c a các ch t có m t trong m t m u ch

1.4.

[22].

các h p ch t h

1.4.1. Chi t
- Nguyên t c: Dung môi có t tr ng nh

l p trên. Khi tr n l n hai pha, pha

này có th khu ch tán m t ít sang pha kia. Khi l c hai pha l i v i nhau, th tích
c a hai pha khi l c không b

c khi l c [7].

N u l c dung d ch A có ch a ch t tan S v i dung môi B (dung môi chi t) thì khi
quá trình phân b

t tr ng thái cân b ng.

- H s phân b K:

CA, CB l

t là n

S trong pha A và B

K là h ng s

m t nhi

nh

nh và trong nh

t ch t tan và m t c
K ph thu c vào nhi

u ki

ng.

nh A và B.

, áp su t, tính ch t c a ch t tan và dung môi.

K càng l n, quá trình chi t càng hi u qu .
- H s phân b bi u ki n KD: Trên th c t

u ki

ng, h s

bi u ki n KD là:

CB, CA là t ng n

các d ng khác nhau c a ch t tan trong dung môi A và B.

14


KD không b t bu c ph i là h ng s .
KD ph thu c vào pH.
- Hi u su t chi

c tính theo công th c sau:

QB bao g m toàn b nh
QA

ng QB

c.

ng ch t tan S trong dung d

u.

1.4.2. S c ký c t
- Trong s c ký c t, ch t h p ph ho c ch t làm n n cho pha c
các ng hình tr g

c nh i trong

v y, có th khai tri n dung môi liên t c v i

nhi u h dung môi khác nhau t phân c c y
- Nguyên t c: Các ch

c tách theo

n phân c c m nh.
h p ph (c t h p ph ) ho c

phân b (c t phân b ).
-P

c ký c t ch y

tách các ch t ra kh i h n h p [3].

1.4.3. K t tinh
- K t tinh là quá trình tách ch t r n hòa tan trong dung d
th là v t r

ng nh t có hình d ng khác nhau, gi i h n b i các m t ph ng.

- K t tinh các ch t hòa tan trong dung d ch d
hòa tan c a v t ch
di n b
-

i d ng tinh th . Tinh

hòa tan h n ch c a ch t r n.
nh b ng th c nghi

ng cong th hi n s ph thu c gi

có th ti n hàn

c quá trình k

c bi u

hòa tan và nhi

.

i ta ph i t o ra tr ng thái quá bão

hòa c a dung d ch. Tr ng thái quá bão hòa c a dung d
hòa tan th a s tách ra kh i dung d

k

ng không b n, ch t
ch s d chuy n

v tr ng thái bão hòa.
i v i nh ng dung d

, khi nhi

gi m xu ng, dung d ch chuy n t tr ng thái bão hòa sang tr ng thái quá bão hòa,
dung d ch s
chuy n v tr ng thái bão

i và pha r n s
k t tinh lo i dung d

hành làm l nh dung d ch.

15

ch s l i
i ta ti n