Phân lập và tuyển chọn các chủng nấm mốc có khả năng sinh cellulase, ứng dụng trong xử lý rác thải nông nghiệp (Khóa luận tốt nghiệp)

--------------o0o--------------

M M C CÓ
KH

NG D NG TRONG
X

LÝ RÁC TH I NÔNG NGHI P

Chuyên ngành
Khoa

: Chính quy
:
: CNSH & CNTP
: 2011 - 2015


--------------o0o--------------

tài:

: Chính quy
Chuyên ngành
Khoa
Khóa

: K43 - CNSH
: CNSH & CNTP
: 2011 - 2015

i

L IC

Trong quá trình h c t p và nghiên c
nghi

cs

hoàn thành khóa lu n t t

ng d n, giúp

ng viên c a th y cô, b n

p hoàn thành khóa lu n t t nghi p:
c h t, em xin bày t lòng bi

c t i TS. Tr

-

gi ng viên khoa Công ngh sinh h c - Công ngh th c ph

ih c
ng d n em t n tình,

t quá trình làm khóa lu n t t nghi p.

i l i c
ng

om

Thu

u ki

ng d

em hoàn thành t t lu n

t nghi p c a mình.
Em xin g i l i tri ân t i các th y cô giáo trong và ngoài khoa Công
ngh sinh h c - Công ngh th c ph
t và truy

t cho em không ch ki n th

i trong su t b
Cu i cùng em xin c

i h c Nông Lâm Thái
t

h c qua.
i thân và b

em trong su t quá trình h c t p, nghiên c u và hoàn thành

b n khóa lu n này.
2015
Sinh viên

La Th Bích Ng c


ii

DANH M C CÁC B NG

B ng 2.1: Mu

i v i s phát tri n

c a vi sinh v t .................................................................................... 11
B ng 2.2: M t s VSV s n xu t cellulase ...................................................... 15
B ng 3.1: Các hóa ch

cs d

tài nghiên c u ...................... 32

B ng 3.2. Các thi t b s d ng trong thí nghi m ............................................ 32
B

ng th ho t tính Cellulose ................................................ 33

B

ng CMC ............................................................................ 33

B ng 3.5. Thu c th lugol............................................................................... 34
B ng 4.1: Th

ho t tính cellulase c a các ch ng n m m c.................. 44

B ng 4.2: S li

t bào vi sinh v t ................................... 49

B ng 4.3. Ho t tính enzyme cellulase b ng
B ng 4.4. K t qu
B ng 4.5. T

c l th ch ......... 50

ch ng n m m c phân l p........................ 51
u ki

ng có b

ng glucose. Thay th
ng b ng

ng. ................................................................... 53
B ng 4.6. T

u ki

ng có b

ng saccarose. Thay th
ng b ng

ng................................................................. 54
B ng 4.7. Giá tr OD ng v i 4 công th

c nuôi c y v i th i

gian t 0 - 30h..................................................................................... 55


iii

DANH M C CÁC HÌNH
Hình 4.1: Hình nh c y chuy n khu n l

gi gi ng n m m c ................. 47

Hình 4.2: Hình nh th nghi

ho t tính cellulose v

............ 47

Hình 4.3: Hình nh th nghi

ho t tính cellulose v i c

............ 48

Hình 4.4: Hình nh c y trang vi sinh v

ch .............. 48

nh ho t tính enzyme b

c l th ch.......... 50

Hình 4.6: hình d ng s i n m c a ch ng M17C .............................................. 52


iv

DANH M C CH

Ch vi t t t

VI T T T

Chú thích

CMC

: Carboxymethyl cellulose

VSV

: Vi sinh v t

KL

: Khu n l c

OD

: Optical density


v

M CL C
Trang
L IC

.................................................................................................... i

DANH M C CÁC B NG................................................................................ii
DANH M C CÁC HÌNH................................................................................iii
DANH M C CH

VI T T T ....................................................................... iv

M C L C......................................................................................................... v
U ............................................................................................ 1

Ph n 1: M
tv

1

1.2. M c tiêu c

tài

2

1.3. Yêu c u c

tài

2

c và th c ti n c a

tài

3

c .................................................................................... 3
c ti n ..................................................................................... 3
Ph n 2: T NG QUAN TÀI LI U ................................................................. 4
2.1. T ng quan v n m m c

4

m c a n m m c ........................................................................... 4
2.1.2. VSV sinh t ng h p cellulase................................................................. 15
2.1.3.

ng d ng c a công ngh enzyme ngày nay ......................................... 16
m c a enzyme cellulase ............................................................ 16

2.2. Enzyme Amylase ..................................................................................... 21
m c a enzyme Amylase ............................................................ 21
2.2.2. Ngu n thu enzyme Amylase ................................................................. 21
2.2.3.

ng d ng c a Enzyme Amylase........................................................... 23

2.3. Rác th i nông nghi p................................................................................ 26
m c a rác th i nông nghi p....................................................... 26
2.3.2.

ng d ng c a công ngh vi sinh v t trong x lý rác th i..................... 27


vi

2.4. Tình hình nghiên c

c

30

2.4.1. Tình hình nghiên c u trên th gi i........................................................ 30
2.4.2. Tình hình nghiên c
Ph n 3:

c.......................................................... 30

NG, N

U

......................................................................................................................... 32
ng nghiên c u

32

m và th i gian ti n hành nghiên c u

32

3.3. Hóa ch t và thi t b s d ng

32

3.3.1. Hóa ch t................................................................................................. 32
3.3.2. D ng c và thi t b s d ng .................................................................. 32
ng nuôi c y

33

3.4. N i dung nghiên c u

34
u

34

p và tuy n ch n n m m c t ng s ....................... 34
nh kh
c l th

i cellulose b

ng th nghi m (Gilbert H.J & Hazelwood G.P,

2009)[29]. ........................................................................................................ 41
ch ng vi sinh v t........................................................ 42
3.5.4. T

u ki n nuôi c y: l a ch

ng thích h

có

u ki n lên men thu sinh kh i và thu ch ph m enzyme ............................. 42
Ph n 4: K T QU VÀ TH O LU N ........................................................ 44
4.1. Phân l p và tuy n ch n các ch ng n m m c có kh

i
44

4.1.1. Phân l p n m m c ................................................................................. 44
4.1.2. Tuy n ch n n m m c ............................................................................ 49
t tính enzyme b

các ch ng n m m c

c l th ch

50
51


vii

4.4. T

u ki

ng nuôi c y b ng cách b sung thêm hàm
ng nuôi c y

u

52

Ph n 5: K T LU N VÀ KI N NGH ........................................................ 56
5.1. K t lu n .................................................................................................... 56
5.2. Ki n ngh .................................................................................................. 56
TÀI LI U THAM KH O ............................................................................ 57


1

Ph n 1

M
1.1.

U

tv
c ta là m

c nông nghi

nhìn ra s có m
v c nông nghi

t t n d ng nh ng

ch bi n th

c t n d ng vào nh ng

a mình, ph c v

i s ng sinh ho

xã h i càng phát tri n, nhu c u c
m

i ngày m

ng ph ph ph m m i ngày m t nhi

t nd

c ph n nào vào cu c s ng, m

gi i quy

ch

u

ng l n nh ng ph ph ph m c

c th i ra. T

ngu n ph ph ph
m

n, song song v

nt i
i dân ch có th

a mình thì không th nào

ng ph ph ph m còn l

Chính vì v y, cùng v i s phát tri n c a công ngh sinh h

i

u và nghiên c u ra các lo i enzyme là nh ng ch t xúc tác sinh h c
t cao cho quá trình si
không nh ng th

2005) [22].
Ngày nay ta c

ng và phát tri n c a vi sinh v t,
t quan tr ng trong công ngh ch bi n


2

không

cellulose

1.2. M c tiêu c

tài

.
1.3. Yêu c u c

tài


3

c và th c ti n c

c
-

-

c ti n
-

-

tài


4

Ph n 2
T NG QUAN TÀI LI U

2.1. T ng quan v n m m c
mc an mm c

[3].

[5].

kitin-

h

5

khu

.

nguyên sin

-10µm, chúng có hình thái
, hình cái

[4].


6

a. Sinh

ty sin

c
bào

Thành và cs, 2005) [10].


7

khí (antheridium) và túi

.


8

li

Thành và cs, 2005) [10].


9

Aspergillus flavus
2005) [3].

còn sinh

cellulose
2003) [3].

cs,


10

ammone (NH4)2SO4,
nitrate (KNO3)


11

B ng 2.1: Mu
tri n c a vi sinh v t (Nguy
P

KH2PO4
K2HPO4

S

i v i s phát
[3]

nucleoproteine,phospholipide,

coenzyme,

(NH4)2SO4
MgSO4

Mg

MgSO4

chlorophyll.
Ca

CaCl2
Ca(NO3)2

Na

NaCl

K

KH2PO4

enzyme, duy trì áp

-5

- 10-6


12


13

(Thomas
Nilsson, 1974) [26].

trao

[3].

-800
0

C.


14

26-320C

[1].

6,0 - 7,0 (E. A. Zvereva, 2006) [28]; (Gilbert H.J & Hazelwood G.P, 1993) [29].


15

2.1.2. VSV sinh t ng h p cellulase

[18].
B ng 2.2: M t s VSV s n xu t cellulase (Lý Kim B ng và cs, 1999) [18]. [18]

Aspergillus niger

Actinomyces aureus

Preudomonas

A.oryzae

Act.cellulose

Fluorescens

A.terreus

Act.diastaticus

B.megaterium

A.flavus

Act.griseus

Clostridium sp.

Fusarium culmorum

Act.melamocylas

Fusarium oxysporum

Act.coelicolor

Ruminoccus albus

Pen. notatum

Act. hygroscopicus

Bacteroides

Trichoderma reesei

Act.ochroleucus

Clos.butiricum

Trichoderma lignorum Act.griseofulvin

Amylophillus sp.

Trichoderma viride

Act.thermofulcus

Clos.locheheadil

Trichoderma

Act.xanthostrums

Cellulosemonas


16

2.1.3.

ng d ng c a công ngh enzyme ngày nay

-

-

.

-

.

- Trong s
-

e.

-

e

cs, 2004) [11].
2.1.4

m c a enzyme cellulase

2.1.4
cellulase (cellulose).

[4].