TR
NG
I H C C N TH
KHOA S PH M
KH O SÁT S B THÀNH PH N TRÁI G C
VÀ LY TRÍCH CAROTENOID T MÀNG H T G C
(Momordica cochinchinensis (Lour) Spreng)
Lu n v n T t nghi p
Ngành : S Ph m Hóa H c
GV h
ng d n: Th.S Thái Th Tuy t Nhung
Sinh viên: Lý Hoàng Di m
L p:
Ph m Hóa H c
Mã s SV: 2060395
n th , 2010
IC M
N
hoàn thành
tài này ngoài s n l c h c h i c a b n thân, tôi còn nh n
cs
giúp , ng viên c a th y cô, b n bè và m i n
i xung quanh trong quá trình th c
hi n
tài. Vì lí do ó, trong trang u c a bài báo cáo này tôi xin chân thành c m n
n:
Cô Thái Th Tuy t Nhung, gi ng viên B Môn Hóa, Khoa S Ph m, Tr ng i H c
C n Th ã tr c ti p h ng d n, ch d y m t cách t n tình
tôi hoàn thành t t lu n v n
t t nghi p.
Cô Lê Th L c, th y Nguy n V n Hùng, th y Nguy n Phúc m, th y Nguy n M ng
Hoàng, cùng các th y cô khác trong b môn ã t n tình giúp , ch d y trong quá trình
th c hi n tài.
K s Nguy n V n Hai, gi ng viên th c hành b môn Sinh lý – Sinh hóa, Khoa Nông
Nghi p – Sinh h c ng D ng và các b n Khoa Nông Nghiêp - Sinh h c ng D ng ã
giúp
tôi nguyên li u có th th c hi n tài.
Gia ình, th y cô, b n bè luôn
ng viên, h tr tôi trong su t quá trình th c hi n
tài.
M t l n n a tôi xin chân thành c m n !
ii
M K T LU N C A H I
NG CH M
LU N V N T T NGHI P
i m: 9,33 (Chín i m ba m
i ba)
C n th , ngày 17 tháng 05 n m 2010.
Ch t ch h i
ng ch m lu n v n t t nghi p
Nguy n Th Thu Th y
iii
M CL C
L IC M N
I M K T LU N C A H I
NG CH M LU N V N T T NGHI P
M CL C
TÓM T T N I DUNG
TÀI
Trang
M
U ..................................................................................................................... 1
N I DUNG ................................................................................................................. 2
1. LÝ THUY T ........................................................................................................... 2
1.1. Mô t cây g c..................................................................................................... 2
1.1.1. Gi i thi u........................................................................................................ 2
1.1.2. Mô t .............................................................................................................. 2
1.2. Phân b .............................................................................................................. 3
1.3. Công d ng ch a b nh c a cây g c trong dân gian .............................................. 3
1.3.1 R .................................................................................................................... 3
1.3.2. Thân (Dây) ..................................................................................................... 3
1.3.3. H t.................................................................................................................. 3
1.3.4. Lá ................................................................................................................... 4
1.4. Các nghiên c u v g c ....................................................................................... 4
1.4.1. Các nghiên c u trong n c v g c .................................................................. 4
1.4.2. Các nghiên c u trên th gi i v g c ................................................................ 5
1.5. S c t trong th c ph m th c v t......................................................................... 6
1.5.1. S c t chlorophylls.......................................................................................... 6
1.5.2. S c t flavonoids............................................................................................. 7
1.5.3. Betalains ......................................................................................................... 8
1.5.4. S c t carotenoid............................................................................................. 8
1.5.4.1. Lycopene ................................................................................................... 10
1.5.4.2. Betacarotene .............................................................................................. 10
1.5.4.3. Alphacarotene ............................................................................................ 11
1.5.4.4. Lutein ........................................................................................................ 11
1.5.4.5. Zeaxanthin ................................................................................................. 11
1.5.4.6. Astaxanthin ............................................................................................... 11
1.6. Vài nét v vitamins và vitamin A..................................................................... 12
1.6.1. Gi i thi u...................................................................................................... 12
1.6.2. Vitamin A ..................................................................................................... 13
2. TH C NGHI M.................................................................................................. 15
2.1. D ng c , hóa ch t ............................................................................................ 15
2.1.1. D ng c ........................................................................................................ 15
2.1.2. Hóa ch t........................................................................................................ 15
2.2. Kh o sát s b thành ph n hóa h c h u c c a g c.......................................... 16
2.2.1. Thu hái và x lí m u ..................................................................................... 16
2.2.2. nh tính các h p ch t .................................................................................. 16
2.2.2.1. Kh o sát s hi n hi n c a các h p ch t flavonoids ..................................... 16
2.2.2.2. Kh o sát s hi n di n c a các h p ch t alkaloid......................................... 16
2.2.2.3. Kh o sát s hi n di n c a các h p ch t saponin ......................................... 17
2.2.2.4. Kh o sát s hi n di n c a các h p ch t tatin .............................................. 18
2.2.2.5. Kh o sát s hi n di n c a các h p ch t glycoside....................................... 19
iv
2.3. K t qu ............................................................................................................ 19
2.4. Ly trích và tinh ch carotenoid......................................................................... 20
2.4.1. Quy trình ly trích carotenoid ......................................................................... 20
2.4.2. Các b c ti n hành ly trích và tinh ch carotenoid ........................................ 21
2.4.3. Cô l p và tinh ch ch t tinh khi t .................................................................. 21
2.4.4. Cô l p và tinh ch d ch ether d u h a............................................................ 21
2.4.5. o nhi t nóng ch y c a A1 ...................................................................... 22
2.4.6. nh tính A1 ................................................................................................. 22
2.5. Phân tích A1 b ng ph IR ................................................................................ 22
K T LU N VÀ KI N NGH ................................................................................ 23
v
TÓM T T N I DUNG
TÀI
Cây g c, tên khoa h c là Momordica cochinchinensis (Lour) Spreng, h b u bí –
Curcubitaceae
c tr ng khá ph bi n Vi t Nam c ng nh m t s n c ông Nam Á.
G c là lo i cây d tr ng có th thích nghi t t v i m i
u ki n khí h u và t ai. N u
c ch m sóc t t cây có th s ng t 10 – 15 n m.
D u g c là d u trích
c t màng c a h t g c có tác d ng b o v s c kh e con ng i
r t tuy t v i. Trong ó, h p ch t carotenoid ch y u là beta-carotene và lycopene là m t
trong nh ng thành ph n quan tr ng nh t quy t nh ph m ch t c a d u g c. Hàm l ng
beta-carotene trong g c cao g p 68 l n so v i cà chua, có tác d ng ch ng lão hóa và b
sung ngu n vitamin A h p lý. Lycopene cùng v i các ch t khác trong d u g c làm vô
hi u hóa 75% các ch t gây ung th , ng n ng a ch ng nh i máu c tim và b o v h gen
kh i b t n th ng. Ngoài ra, d u g c còn ch a l ng l n vitamin E, acid linoleic
(Omega 6), acid oleic (Omega 9) và các nguyên t vi l ng khác nh : Co, Fe, Zn, Se…
h a h n nhi u ng d ng tuy t v i trong các l nh v c th c ph m, m ph m và d c ph m
t ng c ng và b o v s c kh e con ng i.
Vi t Nam, nghiên c u v g c t p trung ch y u vào vi c phân l p carotenoid.
tài
ly trích carotenoid t màng h t g c v i mong mu n góp ph n t o ngu n thu c cho y h c
mà không ph i th c hi n b ng con
ng hóa h c.
Ph ng pháp ly trích carotenoid trong
tài này là s d ng ph ng pháp ngâm d m
v i dung môi là ether d u h a t ngu n nguyên li u ban u là màng h t g c. Sau ó xà
phòng hóa v i l ng KOH trong ethanol, dùng s c ký c t v i ch t h p thu là Al2O3
cô
l p carotenoid. Phân tích s n ph m b ng ph IR và o nhi t nóng ch y.
V i ph ng pháp ly trích này thu
ph IR và o nhi t nóng ch y.
Sau ây là n i dung trình bày c a
c s n ph m là ch t A1 và A2. Ch t A1 phân tích
tài.
vi
U
G c là lo i th c ph m
c s d ng lâu i n c ta. Vi c phát tri n tr ng r ng rãi
cây g c
cung c p s n ph m có ch a β-caroten, vitamin E và d u g c ã
c khuy n
khích và u t t nh ng n m 90. Trong ch ng trình Công ngh sinh h c qu c gia
(1996 – 2000) ã có D án Khoa h c Công ngh KC-02
s n xu t các ch t ch ng oxy
hóa t trái g c, phòng ch ng b nh thi u vitamin A và t ó nhi u s n ph m ã
c bào
ch t trái g c.
Trong m y th p k qua, th t h t g c ã
c các tác gi nhi u n c quan tâm và ã có
nhi u công trình nghiên c u v thành ph n hóa h c c ng nh tác d ng sinh h c c a nó
nh : màng h t g c có ch a các h p ch t carotenoid.
G c là ngu n cung c p t t nh t carotenoid, nh ng ch t d ng h p thu sinh h c cao,
ng c ng s kh e m nh cho làn da và b máy phòng ch ng các g c t do c a riêng c
th mình.
Carotenoid, s c t c a cây, có ch c n ng b o v cây kh i l ng ánh sáng quá l n. Giá
tr dinh d ng c a nó c bi t quan tr ng i v i da. Ngu n cung c p beta-carotene t
nhiên d i dào nh t
c tìm th y trong các lo i rau c qu màu vàng, da cam và lá xanh.
Thông th ng, màu rau c qu càng m nh, l ng beta-carotene trong nó càng nhi u. G c
ch a l ng beta-carotene nhi u g p 10 l n cà r t. Beta-carotene là m t ch t carotenoid
ch ng oxy hóa
c tìm th y trong g c. Ch t này giúp t ng c ng h th ng mi n d ch và
h tr c u trúc nguyên v n c a mô.
Ngoài beta-carotene là lo i carotenoid ph bi n nh t trong th c ph m, còn có nhi u
lo i carotenoid khác có giá tr cho s c kh e nh lutein, lycopene, alpha-carotene,
cryptoxanthin, astasanthin,…
Vitamin E và lycopen cùng v i lutein, zeaxanthin, beta-cryptoxanthin trong qu g c
d ng thiên nhiên, còn có tác d ng quét lo i các g c t do, g c peroxyd trong c th ,
phòng và i u tr nh i máu c tim, t qu , nguy c gãy x ng ph n , c bi t ph n
sau mãn kinh, ái tháo
ng, ung th vú, tuy n ti n li t, d dày, ung th gan, x gan và
phòng b nh mãn tính, kéo dài tu i th .
Chính vì v y vi c ch n
tài “kh o sát s b thành ph n trái g c và ly trích
carotenoid t màng h t g c” v i mong mu n
c u tìm hi u và nghiên c u quy trình
ly trích carotenoid t màng h t g c nh m góp ph n t o ngu n thu c cho y h c mà không
c n t ng h p b ng con
ng hóa h c.
tài “kh o sát s b thành ph n trái g c và ly trích carotenoid t màng h t g c” ch
gi i h n nghiên c u ly trích d u g c t màng h t g c v i dung môi là ether d u h a b ng
ph ng pháp ngâm d m. Sau ó, cô l p carotenoid b ng s c ký c t v i ch t h p thu là
Al2O3. Phân tích s n ph m b ng ph IR.
1
I DUNG
1. LÝ THUY T
1.1 Mô t cây g c:[11], [15], [16]
1.1.1 Gi i thi u
- Tên khoa h c: Momordica cochinchinensis (Lour) Spreng.
- H : B u bí (Cucurbitaceae)
- Tên Vi t Nam: G c
Ngoài ra, còn có m t s tên g i khác :
•
Tày: Mác kh u.
•
Thái: Má kh u.
•
- Tên n
•
•
•
•
•
•
Dao: ìa tá pi u
c ngoài:
Anh: Spiny bitter gourd, Cochinchin gourd, Sweet gourd
Trung Qu c: Moc Niet Tu.
Nh t: Kushika, Mokubetsushi
Lào: Mak kao
Thái : Fak kao
Malaysia: Teruah
1.1.2. Mô t
Cây g c thu c lo i dây leo, m i n m khô héo m t l n nh ng n m sau vào mùa xuân,
t g c l i m c ra nhi u thân m i. M i g c có nhi u dây, m i dây có nhi u t, m i t có
lá.
Lá m c so le, chia thùy khía sâu t i 1/3 hay hay 1/2 phi n.
cm. Phía áy là hình kim, m t trên lá màu xanh l c th m [1]
Hoa n vào các tháng 4, 5,
m c n c k lá.
ng kính phi n lá 12 – 20
c cái riêng bi t. Cánh hoa màu vàng nh t. Hoa
n tính,
Qu có hình b u d c dài 15 – 20 cm, ít nh n, ngoài có nhi u gai m m, khi còn non
có màu xanh, khi chín có màu . Trái non th ng có tháng 6 - 7, qu chín
c thu
ho ch vào tháng 8 - 12.
H t d t, hình g n nh tròn x p thành hàng d c, quanh h t có màu
máu, khi bóc
màng
s th y m t l p v c ng en, quanh mép có r ng c a tù và r ng, h t dài kho ng
25 - 35 mm, r ng 19 - 30 mm, dày 5 - 10 mm, gi ng nh con ba ba nh nên còn
cg i
là “m c mi t t ” (ngh a là con ba ba g ). Trong h t còn có nhân ch a nhi u d u.
2
1.2. Phân b : [11], [12].
n
c ta g c
c tr ng
kh p n i, m c hoang, nhi u nh t là
Trên th gi i, g c có h u h t
Lào, Campuchia, n …
các n
mi n B c.
c Châu Á: Philipin, mi n Nam Trung Qu c,
1.3. Công d ng ch a b nh c a cây g c trong dân gian:[4], [11], [15], [16]
Các b ph n c a cây g c
u có th dùng làm thu c ch a b nh.
1.3.1.R
R g c
c thu hái vào mùa ông r a s ch và ph i khô. R g c sao vàng tán nh
ho c s c u ng v i li u 6 - 12g ch a
c b nh tê th p, s ng chân.
1.3.2. Thân (Dây)
G c dây g c, n g i h c, m c thông, t gi i m i v 15g, s c u ng ho c ngâm r
xoa bóp ch a phong th p, s ng chân.
u
1.3.3. H t
Màng h t: Màng h t ã ph i ho c s y khô
c ép l y d u g c.
- D u g c r t h u ích i v i nh ng tr ng h p thi u vitamin A nh tr con ch m l n
hay m c b nh khô m t, quáng gà, ng i kém n, m t m i.
- D ug c
c dùng bôi vào v t th
ng, v t b ng
giúp nhanh lên da non.
-D ug c
c dùng kèm v i m t s v thu c kháng khu n
b nh tr ng cá có nhân.
c hi u s ch a
c
- D u g c có tác d ng nhu n tràng, thích h p cho ng i b táo bón. Ng i l n m i
ngày dùng 10 - 20 gi t, chia làm 2 l n, u ng tr c b a n chính. Tr em 5 - 10 gi t m i
ngày.
Nhân h t
H t g c ã tách b màng, ph i hay s y khô kho ng 40 - 50 0C.
Theo kinh nghi m nhân dân h t g c
c dùng ch a m n nh t, quai b , s ng vú, t c
tia s a, tr , lòi dom. Có n i còn dùng ch a s t rét có báng; ch y u dùng ngoài, m i ngày
1 - 2 g.
Các bài thu c:
- Nhân h t g c mài v i n
c, bôi ch a m n nh t, gh l .
- Nhân h t g c giã v i m t ít r
u 30 - 40
,
p ch a vú s ng au.
- Nhân h t g c giã nát, thêm m t ít gi m, gói b ng v i,
êm.
p ch a tr , lòi dom,
su t
- Nhân h t g c và v y tê tê hai v b ng nhau, s y khô tán b t, m i l n dùng 2g hòa v i
u m u ng lúc ói ch a s t rét có báng.
3
- Nhân h t g c (gi c màng h t) giã nát thêm m t ít r u tr ng 35-40 0 dùng ch a
chai chân (do d t t g m vào da, gây s ng hóa các t bào bi u bì m t vùng c a gan bàn
chân). L y h n h p trên b c trong m t cái túi nilon dán kín mi ng túi, khoét m t l nh
r ng g n b ng ch chai chân, bu c vào n i t n th ng, 2 ngày thay thu c m t l n. B ng
liên t c cho n khi ch chai r ng ra (kho ng 5 - 7 ngày).
1.3.4. Lá
M t s vùng nông thôn Vi t Nam và c
còn non làm rau n và dùng lá giã nh
m t s vùng
n
ng
p m n nh t, s ng m …
i ta dùng lá g c
1.4. Các nghiên c u v g c
1.4.1. Các nghiên c u trong n
cv g c
Theo các tài li u mà chúng tôi thu th p
nghiên c u v g c nh sau:
c thì
Vi t Nam ã có m t s k t qu
- N m 1990 Bùi inh Ng c Lâm và Hà V n M o ã xác nh trong d u g c có trên
0,1 % β-caroten, lycopen, các acid béo không no (acid oleic 44 %, acid palmatic 33% và
acid linoleic 14 %). Nh v y, d u g c có h n 1,81% β-caroten so v i d u có trong gan cá
thu và 15 l n h n so v i carot. [15]
- Các nhà khoa h c Vi t Nam ã xác nh h t g c có tác d ng b o v gà ã b nhi m
siêu vi khu n gây suy gi m mi n d ch. Trong y h c c truy n Vi t Nam và Trung Qu c,
h t g c là m t d c li u có th thay th m t g u
u tr các tr ng h p ch n th ng,
ng au… [16].
- Các tác gi
inh Ng c Lâm và Hà V n M o Vi n Quân y 108 ã có nghiên c u
t o ra m t ch ph m m i t d u g c. ó là Gacavit. Trên th c nghi m và lâm sàng
Gacavit có tác d ng t t trong
u tr m t s th ng t n do dioxin gây ra trên ng v t
v i k t qu cao h n vitamin A và β-caroten. Ngoài ra, nó còn cho k t qu kh quan trong
vi c phòng ung th gan, kéo dài th i gian s ng c a ng i b ung th và làm gi m hàm
ng AFP (Alpha fero protein) cao c a ng i b x gan.[12], [16].
- Vitamin E ã
c phát hi n trong ch ph m Gacavit s n x t t d u g c [12]. Theo
[6], [9], [15], [18] vitamin E dùng cùng v i vitamin A, vitamin C, vitamin D, βcaroten… có tác d ng phòng và kìm hãm s phát tri n c a ung th , kéo dài th i gian
s ng c a ng i b ung th ác tính.
- T i H i ngh sinh h c qu c t , Hà N i vào ngày 25/7/2001 tác gi Ph m Th Trân
Châu và các C ng tác viên ã có bài báo cáo “Tác d ng tr sâu h i rau c a ch ph m
Momosertatin tách t h t g c”. Tác gi ã s d ng h t c a qu g c ã chín, tách bao
màng
và s y khô
phòng tr sâu khoang (Spodoptera litura F.), sâu t (Plutella
xylostella L.).
- Các tác gi Lê Th Anh ào và Hoàng Th Y n, Khoa Hóa,
i h c S ph m Hà
N i ã ti n hành th ho t tính sinh h c c a d u g c và d u h t g c trên vi sinh v t ki m
4
nh. K t qu cho th y các lo i d u này có tính kháng khu n Gr(-) (E.coli, P.aeruginosa),
Gr(+) (B.subtillis), n m m c, không kháng n m men [5].
1.4.2. Các nghiên c u trên th gi i v g c
ã có m t s công trình nghiên c u v các b ph n c a cây g c trên th gi i:
- Theo công trình nghiên c u c a m t nhóm chuyên gia Nh t, lycopen có r t nhi u
trong màng h t g c. L ng lycopen
c tìm th y kho ng trên 380 µg/g màng h t g c.
ng lycopen trong màng h t g c g p kho ng 10 l n l ng lycopen có trong các lo i
rau trái
c xem là giàu lycopen. Lycopen
c ch ng minh là m t ch t ch ng oxy hóa
có kh n ng trung hoà các g c t do gây h i cho các t bào c th . Ho t tính ch ng oxy
hóa c a lycopen giúp phòng ng a b nh mãn tính m nh g p n m n b y l n so v i ch t
ti n sinh t A [10].
- Ngoài ra, nhóm chuyên gia ng i
c c ng ã có công trình nghiên c u thành ph n
các acid béo và tocopherol trong h t g c Vi t Nam [1] v i k t qu :
• Các acid béo
Acid tetradecanoic (14:0)
Thành ph n (%)
0,03
Acid hexadecanoic (16:0)
2,05
Acid octadecanoic (18:0)
17,99
Acid 9-octadecenoic (18:1 9c)
7,92
Acid 7-octadecenoic (18:1 7c)
0,10
Acid 9,12-octadecadienoic (18:2 9c,12c)
10,49
Acid 9,12,15-octadecatrienoic (18:3 9c,12c,15c)
Acid 7,9,11-octadecatrienoic (18:3conj)
0,24
58,61
Acid eicosanoic (20:0)
0,25
Acid 11-eicosenoic (20:1 11c)
0,25
Acid docosanoic (22:0)
0,22
Acid 13,16-docosadienoic (22:2 13c,16c)
0,06
Acid tetracosanoic (24:0)
T NG C NG:
• Tocopherols
-Tocopherol
0,03
98,24 %
Thành ph n (mg/kg)
176,00
-Tocopherol
3,00
-Tocopherol
2,00
-Tocopherol
T NG C NG:
93,00
274,00 mg/kg
• Thành ph n d u: chi m 52.70% tr ng l
5
ng h t g c.
- Theo [13], [14] trong h t g c và r g c còn có ch a các h p ch t saponin. R g c
còn ch a sterylglicosid v i ho t tính kháng sinh [8].
1.5. S c t trong th c ph m th c v t [7], [17], [22], [23]
S c t là m t trong nh ng y u t r t quan tr ng, quy t nh tr c ti p n ch t l ng
th c ph m. Nó cho bi t tr ng thái (m i, c , t i, héo…),
tinh khi t, trình
k thu t
ch bi n c a lo i th c ph m ó. Bên c nh ó, màu s c còn có tác d ng kích thích s thèm
n, giúp n ngon mi ng và tiêu hóa t t. Do ó, màu s c trong th c ph m có giá tr th ng
m i r t l n.
Màu s c ph thu c r t l n vào s phân tán c a ánh sáng chi u vào c ng nh s h p
th và ph n x ánh sáng c a v t ch t. Màu s c bi n i a d ng trong su t quá trình t n
tr sau thu ho ch, quá trình s n xu t c ng nh làm l nh th c ph m. Trong th c t các c
s s n xu t th c ph m luôn s d ng các bi n pháp công ngh
b o v màu s c v n có
trong các lo i th c ph m hay nhu m màu khi màu t nhiên không
m nh ho c b m t
trong quá trình ch bi n.
Th gi i th c v t c a chúng ta muôn màu muôn v , nh ng chung quy ch có b n s c
t c b n: chlorophylls, flavonoids (anthocyanines, flavones và flavonols), betalains
(betacyanins và betaxanthins) và carotenoid [17], [22].
c
m màu s c t nhiên c a
các nhóm s c t trong th c v t
c cho b ng 1.1 trong ph l c 2.
1.5.1. S c t chlorophylls
Chlorophylls hay còn g i là di p l c t , là s c t xanh c a lá cây, bình th ng nó t o
ph c v i protein, nó xúc tác cho quá trình t ng h p CO2 và H2O t o thành carbohydrate
hay còn g i là quá trình quang h p.
Có nhi u lo i chloropphyll a, b, c, d…, nh ng quan tr ng nh t là chlorophyll a và
chlorophyll b. Chlorophyll a có màu s m h n, th ng chi m t l cao h n và kém b n
n trong su t quá trình già y u c a th c v t.
R
R: CH3 - Chlorophyll a
N
N
R: CHO - Chlorophyll b
Mg
N
N
O
O
O
O
O
Hình 1.1. Công th c c u t o c a chlorophylls
6
- Chlorophylls r t d bi n màu khi th c v t bi n
- Không tan trong n
- Khó gi
n
i sinh lý.
c, tan trong dung môi h u c không phân c c.
nh trong b o qu n.
- D tham gia ph n ng hóa h c trong môi tr
ng acid và ki m
nhi t
cao.
- D b enzyme chlorophylase phân h y 60-820C.
- D t o ph c v i cations kim lo i (Cu2+, Zn2+, Fe3+…)
- D b oxi hóa trong r
các pH thích h p.
u, không khí và ánh sáng làm m t màu xanh và hóa tr ng.
1.5.2. S c t Flavonoids
Flavonoids có màu
, vàng, xanh ho c không màu.
R1
3'
4'
1
O+ 2
R7
7
R6
6
R2
5' R 3
3 R4
5
R5
Anthocyanidins
Hình 1.2 M t lo i c u trúc c b n c a Flavonoids
Tùy thu c vào g c R mà ta có các h p ch t khác nhau. Các h p ch t này không t n t i
d ng t do trong th c v t. Anthocyanines là h p ph n c a anthocyanidins v i glucose
ho c các acid h u c (phenolic, maloic, acetic acid,…) ho c các cation kim lo i. Chúng
là s c t tan trong n c, r t ph bi n trong th c v t. Nó hi n di n trong hoa, lá, thân, r
có màu
ho c xanh da tr i. Chúng hòa tan trong không bào, chi m 0,1 - 1% tr ng
ng khô. D i ây là m t h p ch t c a anthocyanidin v i glucose.
OH
OH
O+
HO
O
O
OH
OH
OH
OH
Hình 1.3. Cyanidin-3-glucoside
7
OH
Màu s c c a flavonoids ph thu c vào c u trúc hóa h c và môi tr ng bên ngoài nh :
pH, t l t ng i c a các flavonoids, s hi n di n c a các s c t khác và k c dung môi
mà chúng t n t i.
- D b oxy hóa b i các enzyme, các tác nhân oxy hóa và ánh sáng.
- B phân h y ch m
nhi t
th
ng và nhanh
nhi t
cao.
- M t s anthocyanine b phân h y b i vitamin C.
- Anthocyanine có th ng ng t v i chính nó ho c các h p ch t h u c khác t o thành
ph c có màu s m và b n h n ho c không màu.
Flavonoids xu t hi n nhi u trong b p c i, cà r t, c c i
ng, khoai lang, c c i
tr ng. ây là nh ng h p ch t có vai trò r t quan tr ng trong vi c tring hòa các g c t do
cho c th .
1.5.3. Betalains
Betalains là s c t
hay vàng, có c u t o t ng t nh anthocyanidins nh ng có
ch a thêm nito trong phân t , tan
c trong n c. Màu s c c a chúng ch u nh h ng
c a d ng c ng h ng trong phân t , chúng có nh ng bi u hi n t ng t anthocyanidins
nh b oxy hóa b i các h p ch t h u c ,..
HO
O
OH
O
OH
O-
OH
O
N+
HO
O
OH
N
OH
H
O
Hình 1.4. Betalain (Betacyanine)
Trong th c t r t khó phân bi t gi a anthocyanines và betalains b ng th giác nh ng
có th thay i nhi t , pH thì bi u hi n màu s c c a betalains s rõ h n, pH n nh
trong kho ng 4 - 5. Isoascorbic
c coi là r t có hi u qu trong vi c duy trì màu
c a
betalains . Trong c d n ch a kho ng 75 - 95% betalain.
1.5.4. S c t carotenoid.
Trong th c v t ng i ta tìm th y h n 600 carotenoid, có kho ng 50 lo i
c h p th
trong máu. Lycopene và betacarotene chi m 30% t ng carotenoid. Nhi t , tác d ng c
h c thích h p giúp gi i phóng carotenoid thu n l i cho quá trình h p thu c a c th .
8
Chúng
c c u t o g m nhi u n v isoprene t 35 - 40 nguyên t C. D a vào
thành ph n nguyên t trong phân t , có th chia làm hai nhóm: xanthophyll có ch a oxy
trong phân t và carotene không có ch a oxy trong phân t . Màu s c c a carotenoid ph
thu c r t l n vào s l ng n i ôi trong phân t , bi n i t vàng nh t n cam sáng và
m. S hi n di n c a carotenoid trong các lo i th c v t tiêu bi u
c cho trong
b ng 1.2 ph l c 2.
- Là h p ch t không tan trong n
- n
nh trong môi tr
c, tan trong dung môi h u c .
ng ki m, nh y c m trong môi tr
ng acid.
- D b phân h y b i các tác nhân oxy hóa, enzyme lipoxygenase, ánh sáng, không khí
m, kim lo i,… (do ó, có tính ch t ch ng oxy hóa).
-
ng phân cis-trans có nh h
ng
n ho t tính vitamin A c a carotenoid.
Trong lá cây, màu c a carotenoid b che ph b i chlorophylls, th ng t n t i d i
d ng ph c chlorophyll-carotenoid-protein. Carotenoid có kh n ng
u hòa sinh tr ng,
mang thông tin hóa h c, h tr cho chlorophylls th c hi n ch c n ng quang h p b ng
cách h p thu n ng l ng ánh sáng r i truy n cho chlorophylls. Nhóm s c t này có kh
ng d n s ch các g c t do trong c th m t cách áng k nh t là lycopene và m t s là
ch t ti n sinh t A c bi t là betacarotene (ho t tính ti n vitamin A c a t ng tr ng h p
c th
c cho trong b ng 1.3 ph l c 2). Hai h p ch t này có ý ngh a c c k quan
tr ng trong vi c phòng và i u tr nhi u b nh nguy hi m hi n nay.
Trong quá trình t n tr và ch bi n d i tác d ng c a nhi t , ánh sáng, không
khí,…h th ng n i ôi c a carotenoid r t d b c t t, t ng tác v i nhau ho c v i các
g c t do khác sinh ra m t s h p ch t không mong mu n. ó là, các ng phân không
có ho t tính sinh h c, các s n ph m c a ph n ng oxy hóa: toluen, m-xylene, p-xylene,
2,6-dimethylnaphthalene, β -cyclocitral, acid geronic, 1,2-epoxy- β -ionone, 4-oxo- β ionone, 4-methylacetonphenone, dehydroactinidiolide,… ây là nguyên nhân chính d n
n s bi n màu c ng nh m t màu, làm gi m áng k ch t l ng c a th c ph m. Ph n
ng t oxy hóa v i g c t do peroxy có th
c ng n ch n b i ch t ch ng oxy hóa
phenolic nh butylhydroxytoluen (BHT), tocopherol (vitamin E), c bi t khi hi n di n
trong d u m . Do ó, trong quá trình ch bi n ta c n quan tâm n nh ng y u t trên
s n ph m làm ra t ch t l ng cao.
Bên c nh ó, s phân h y c
damascenones,… là nh ng h
ngành công nghi p s n xu t ch
nhi u trái cây khác là k t qu c
a carotenoid tr nên có l i khi t o ra ionons, damascene,
ng quan tr ng
c s d ng r ng rãi trong n c hoa và
t th m. Th c t , nhi u h ng th m trong hoa, trà, nho và
a s b gãy m ch các carotenoid.
9
O
Ionene
Beta-ionone
Damascenone
CHO
OH
Beta-cyclocitral
Vitamin A
Hình 1.5. M t vài s n ph m oxy hóa c a carotenoid
Sau ây s gi i thi u vài carotenoid quan tr ng nh t [25]
1.5.4.1. Lycopene
Hình 1.6. Công th c c u t o c a Lycopene
- Màu
n.
, nhi t
, ánh sáng bi n
i
ng phân trans thành cis có ho t tính sinh h c
- K t n i ch t ch v i ch t x , b gi i phóng b i s c nóng.
- Không tan trong n
c, tan trong d u.
- Ho t tính sinh h c trong cà chua nghi n nát g p 4 l n cà chua t
i.
- B o v AND và proteins kh i b oxy hóa, b o v da ch ng tia UV.
- Chi m g n 50% t ng carotenoid trong huy t thanh.
- Gi m nguy c gây h i c a cholesterol, ng n ch n s phát tri n c a kh i U.
1.5.4.2. Betacarotene
Hình 1.7. Công th c c u t o c a Betacarotene.
- Nhi t
nóng ch y 1780C.
- Ch ng oxy
c thân m nh,
y m nh ho t
10
ng c a t bào mi n d ch.
- B o v giác m c ch ng tia UV.
- Kh c ph c s t n th
ng AND, gi m nguy c gây h i cholesterol.
1.5.4.3. Alphacarotene
Hình 1.8. Công th c c u t o c a Alphacarotene
- Ch ng ch t sinh ung th m nh h n betacarotene.
- H tr t bào mi n d ch.
1.5.4.4. Lutein
OH
HO
Hình 1.9. Công th c c u t o c a Lutein
- Lutein và zeaxanthin chi m 50% t ng carotenoid trong võng m c.
- B o v s thoái hóa và bênh
c nhân m t.
- H p thu ánh sáng có h i cho m t.
- Ch ng l i ung th ru t k t.
1.5.4.5. Zeaxanthin
OH
HO
Hình 1.10. Công th c c u t o c a Zeaxanthin
Có nh ng tác d ng t
ng t lutein.
1.5.4.6. Astaxanthin
O
OH
HO
O
Hình 1.11. Công th c c u t o c a Astaxanthin.
11
- Màu s c c a cá h i, tôm, cua.
- Tác d ng ch ng oxy hóa
ng th hai sau lycopene.
- B o v t bào.
- Ng n ch n g c t do cho vitamin C.
1.6. Vài nét v vitamins và vitamin A [23]
1.6.1.Gi i thi u
Vitamins là nh ng h p ch t h u c có tr ng l ng phân t th p. ây là h p ch t mà
th
ng v t không t t ng h p mà ch nh n
c t th c v t. Nó có vai trò c n thi t
cho quá trình chuy n hóa n ng l ng, u hòa sinh tr ng c a c th .
Nhu c u vitamins h ng ngày c a con ng
s c kh e và ch
n u ng c a m i ng i.
i r t ít và bi n
i tùy theo tu i, tình tr ng
Vitamins tham gia vào các h enzyme là xúc tác cho ph n ng oxy hóa kh , chuy n
hóa n ng l ng..., h tr tuy n n i ti t, b o v h th n kinh. Thi u vitamins, có th gây ra
nh ng b nh v dinh d ng r t nguy hi m, làm ình tr r t nhi u ph n ng bi n d ng
trong c th và có th d n n t vong.
Hi n nay, các nhà khoa h c ã tìm ra nhi u lo i vitamins khác nhau nh ng ch kho ng
15 vitamins quan tr ng và thi t y u th ng
c
c p n trong l nh v c dinh d ng
và nh ng ho t ng sinh bi n hóa c a c th
ng v t. Trong ó, có b n vitamins hòa tan
trong ch t béo (A, D, E, K) và các vitamins còn l i hòa tan trong n c. Hai nhóm này có
m ts
c m nh sau:
- Nhóm hòa tan trong ch t béo (fat-soluble vitamins)
•
Có kh n ng t n t i nhi u ngày trong c th .
•
Không ti t ra ngoài c th .
•
Tri u ch ng s thi u th n phát sinh ch m ch p.
•
Không c n cung c p h ng ngày.
•
Có ch t ti n vitamins.
- Nhóm hòa tan trong n
c (water-soluble vitamins)
•
T n t i th i gian r t ng n trong c th .
•
Ti t ra
•
D thi u h t.
•
Ph i cung c p h ng ngày.
•
Th
c b ng
ng ti u.
ng không có ch t ti n vitamins .
12
Ch t ti n vitamins: là nh ng ch t có liên quan n nh ng tác ng sinh h c c a
vitamins nh ng ch a có
c nh ng tác ng nh vitamins. Khi vào c th cùng v i ch t
khác th c hi n m t s chuy n hóa m i tr thành vitamins.
Ch t kh ng vitamins: là nh ng ch t ng n c n ho t
cho vitamins tr nên vô d ng.
ng hay phá h y vitamins, làm
1.6.2. Vitamin A
Kho ng n m 1937, ng i ta ã cô l p
c vitamin A t gan cá halibut. Vitamin A là
m t lo i vitamin tan trong ch t béo có vai trò quan tr ng cho s t ng tr ng bình th ng
c a ng v t. Hi n nó ã
c t ng h p trong phòng thí nghi m v i kho ng 4000-5000
n v cho m t gam s n ph m.
Vitamin A d b nhi t , oxy, tia t ngo i phá h y, th ng
c g p d i d ng d u
quánh, màu vàng nh t. Vitamin C, E giúp b o v vitamin A ít b phá h y h n. Trong th c
v t, vitamin A
c cung c p ch y u b ng ch t ti n vitamin thu c carotenoid trong ó
ch y u là beta-carotene
cho hai phân t vitamin A d i vai trò xúc tác c a enzyme
carotenase, c th nh sau:
Betacarotene
CH2OH
Hình 1.12. S c t
S bi n
Retinol
t m ch beta-carotene thành vitamin A
i trên ph thu c vào các y u t chính sau:
- Th c ph m c n có m t ít ch t béo.
- Kích thích t c a tuy n giáp tr ng làm quá trình di n ra nhanh h n.
- H p ch t nitrat ng n c n tác
- Vai trò chuyên tr c a ch t
- Thay
ng kích thích t c a tuy n giáp tr ng.
m.
i theo gi ng loài.
Vitamin A trong c th t n t i
hình 1.13.
nhi u d ng khác nhau, g m b n d ng
13
c cho
CH2OH
Retinol
H
C
O
Retinal
CO O H
Retiocic acid
CH 2OH
Dehydro-retinol
Hình 1.13. Các d ng t n t i c a vitamin A trong c th .
Trong ó d ng retinol hay còn g i là vitamin A quan tr ng nh t, tìm th y h u h t
th c ph m g c ng v t. Nh ng d ng trên có th bi n i
thay th cho nhau qua
nh ng tác ng c a s oxy hóa kh
thích ng v i vai trò c a nó trong c th .
Nhu c u vitamin A c a c th thay i theo gi i tính, s c kh e, tu i tác...Theo nh ng
nghiên c u g n ây,
m t ng i có
c tình tr ng kh e m nh, cân b ng v sinh t A
thì nhu c u hàng ngày c a t ng i t ng
c cho trong b ng 1.4 ph l c 2.
Vitamin A và nh ng carotene
c h p th cùng v i d u m trong th c n qua
ng
d dày-ru t. Khi thi u vitamin A các bi u mô s teo i, t n th ng n s m nh t b nh
quáng gà, r i d n n ch ng khô m t. Tr c h t khô màng ti p h p c a nhãn c u, r i
d n n khô giáp m c, nhi m khu n, viêm m và h ng m t. Các niêm m c khác c ng có
th teo, nhi m khu n (niêm m c m i, t cung, tuy n n c b t…), th n kinh, không i
ng
c, không n
c, da khô, d b c tóc. Tr em thi u vitamin A s ch m l n do
gi m photpho trong c th , gi m acid nucleic, cholesterol trong t ch c.
Bên c nh ó n u n nhi u vitamin A quá c ng có h i cho c th nh : n không ngon,
r ng tóc, chóng m t, au x ng và kh p, x ng m m d gãy, xung huy t da, làm gi m
sút th i gian ông máu, thú có thai t o quái thai, thai nhi phát tri n không bình th ng
m t, não, x ng.
14
2. Th c nghi m
2.1. D ng c , hóa ch t
2.1.1 D ng c
- Becher 50 ml.
- Erlen 100ml.
- Mu ng th y tinh.
- Becher 100 ml.
- Erlen 1000ml.
- N i un cách th y.
- Bercher 200 ml.
- Giá
- ng ong 5ml, 10ml, 25ml.
- Bercher 500 ml.
- Gi y l c.
- ng nghi m
- Bercher 1000 ml.
- H th ng ng sinh hàn.
- ng nh gi t.
-B p
- H bi.
- Ph u không uôi.
- Bình c u un hoàn l u.
-
- Ph u có uôi.
- Bình
- Máy cô quay.
n.
nh m c 100 ml.
ng ng nghi m.
i ami ng.
- C t s c ký.
- Máy o nhi t
-
- Máy s y
a th y tinh.
- T s y.
nóng ch y.
- Vi qu n.
2.1.2. Hóa ch t
- Acetat chì.
- Ethanol
- Magie.
- Acid picric.
- Ether d u h a.
- Methanol.
- Aceton.
- FeCl3.
- NaCl.
- AgNO3.
- HgCl2.
- NaOH.
- Bi(NO3)3.
- H2SO4.
- Na2SO4.
- Cloroform.
- I2 .
- NH4OH.
- Diethyl ether.
- KI.
-
2.2. Kh o sát s b thành ph n hóa h c h u c c a g c
15
c c t.
2.2.1. Thu hái và x lí m u
Các b ph n: v trái g c, nhân h t g c, màng h t g c
c thu ho ch t i khoa Nông
Nghi p và Sinh H c ng D ng, khu 2, tr ng i h c C n Th . Các nguyên li u
c
0
riêng, ph i khô s y nhi t
50-60 C n kh i l ng không i, xay thành b t và
c
dùng làm nguyên li u kh o sát s b thành ph n hóa h c h u c .
2.2.2.
nh tính các h p ch t
2.2.2.1. Kh o sát s hi n di n c a các h p ch t flavonoid: [1], [2], [11]
Ph
ng pháp xác
nh flavonoid:
Trong dung d ch, flavonoid t o k t t a màu vàng cam ho c màu
k t t a màu xanh l c, ôi khi màu nâu
v i clorur s t (III), FeCl3.
v i acetate chì, t o
Flavonoid
c xác nh b i ph n ng Shibata, còn g i là ph n ng Cyanidin c a
Willstater. Thu c th là t p h p các hóa ch t g m: dung d ch HCl m c, b t Mg kim
lo i, ancol isoamyl [CH3(CH3)CHCH2CH2OH]
nh tính flavonoid:
Thí nghi m:
un hoàn l u 5g b t m u trong 50ml alcol 95% trong 30 phút. L c, l y 1 ml d ch
alcol cho vào ng nghi m, thêm vài gi t HCl m c, sau ó cho m t ít b t Mg vào và
l c. Quan sát màu trong ng nghi m.
N u th y dung d ch có màu tím cam
m thì
nh tính có flavonoid trong m u.
2.2.2.2. Kh o sát s hi n di n c a các h p ch t alkaloid: [1], [11]
Ph
ng pháp xác
nh alkaloid:
Có r t nhi u thu c th cho ph n ng màu ho c k t t a v i alkaloid.
• Thu c th Dragendorff:
- Công th c:
+ Dung d ch A: Hòa 850mg Bi(NO3)3 vào 40ml H2O và 10ml acid acetic b ng.
+ Dung d ch B: Hòa tan 8g KI trong 20ml H2O.
Khi s d ng tr n hai th tích b ng nhau c a hai dung d ch A và B.
- Nh n bi t: Ph n ng cho k t t a màu t vàng cam
• Thu c th Mayer:
n
.
- Công th c: Hòa 1,35g HgCl2 trong 100ml dung d ch KI 5%.
- Nh n bi t: T o k t t a vô
• Thu c th Wagner:
nh hình màu tr ng vàng.
- Công th c: Hòa tan 5g iod trong 100 ml dung d ch KI 10%.
- Nh n bi t: T o k t t a màu nâu sáng
• Thu c th Bouchardat:
16
n nâu en.
- Công th c: I2 2,5gam. KI 5,0 gam,
c c t 10ml.
- Nh n bi t: Cho k t t a màu nâu ho c vàng
m.
nh tính alkaloid:
Thí nghi m:
T m 10g b t m u b ng 5 ml NH4OH 25%. y kín b ng gi y l c r i qua êm. Sau
ó em chi t v i 25ml CHCl3. D ch CHCl3
c l c v i 10ml dung d ch H2SO4 2%. L y
d ch acid làm m u th .
- Thu c th DRAGENDORFF: dung d ch có màu cam.
- Thu c th MAYER: dung d ch có màu tr ng
N u quan sát có các hi n t
c.
ng trên thì k t lu n trong m u có alkaloid.
2.2.2.3. Kh o sát s hi n di n c a các h p ch t saponin [1], [10], [11]
Ph
ng pháp xác
nh saponin:
n c vào ch s t o b t
xác
nh s hi n di n c a saponin:
c
n c a Pháp nh ngh a ch s t o b t nh sau: Ch s t o b t c a saponin là
loãng c a nguyên li u b ng n c
có chi u cao b t 1 cm sau khi l c trong ng
nghi m có kích th c xác nh, ti n hành trong i u ki n quy nh.
Cách ti n hành: Cân 1 gam b t d c li u cho vào erlen 500 ml ch a s n 100 ml n c
sôi. Ti p t c cho n c trong erlen sôi nh trong 30 phút n a. L c,
ngu i, thêm n c
c t cho n 100ml (thu
c n c s c). L y 10 ng nghi m có chi u cao 16 cm,
ng
kính 16 mm. Cho vào các ng nghi m l n l t 1, 2, 3, 4, 5,….10 ml n c s c. Thêm
c c t vào m i ng cho
10 ml. B t mi ng ng nghi m r i l c theo chi u d c c a ng
trong 15 giây. M i giây l c 2 l n.
yên trong 15 phút. Sau ó o chi u cao các c t b t.
N u c t b t trong các ng th p d i 1 cm thì ch s b t là d i 100, ngh a là không có
saponin.
Ch s b t
c tính theo công th c: CSB = 100 x
10
i
V i: CSB: Ch s b t
i: ng nghi m th i có c t b t cao 1cm
Thí d : B t
ng th 2 có chi u cao 1cm. Kh i l
100 x
ng này coi nh
10
= 500 l n. Nh v y, nguyên li u có ch s t o b t b ng 500.
2
• Ph n ng Liebermann:
Hòa m u b ng 1ml anhydric acetic, thêm t t 0,3-0,5 ml H2SO4.
N u xu t hi n vòng ng n cách:
+ Có màu h ng n
tím thì s b nh n nh có saponin triterpen.
+ Có màu xanh lá cây thì s b nh n nh có saponin steroid.
17
ã pha loãng
• Ph n ng Kahlenberg:
Hòa tan m u b ng 0,5ml dung d ch SbCl3 bão hòa trong cloroform, khu y
soi UV.
N u có hu nh quang:- Màu xanh thì s b nh n nh có saponin triterpen.
- Màu vàng thì s b nh n nh có saponin steroid.
u, em
nh tính saponin:
Thí nghi m:
Cân 1 g b t g c cho vào erlen 500 ml ch a s n n c sôi. Ti p t c cho n c trong
erlen sôi nh trong 30 phút n a. L c,
ngu i. Cho kho ng 1 ml d ch l c vào ng
nghi m nh và l c m nh trong 15 giây.
Quan sát: N u có nhi u b t (c t b t cao) thì k t lu n m u có ch a saponin.
2.2.2.4. Kh o sát s hi n di n c a các h p ch t tanin [2]
Ph
ng pháp xác
nh tanin:
Các thu c th tanin:
- Stiasny: Formol (36%)
Dung d ch HCl m
- Dung d ch gelatin m n:
c
20ml
10ml
Gelatin
Dung d ch NaCl bão hòa
2 gam
10 ml
- Dung d ch acetat chì bão hòa cho k t t a màu vàng nh t.
- Dung d ch FeCl3 1% trong n
c t o ph c màu en.
nh tính tanin:
Thí nghi m:
L y 5g b t g c, thêm 100ml n c c t r i un sôi trong 10 phút. L c.
L y d ch l c làm m u th :
- L y 2 ml d ch l c, thêm 2 – 4 gi t dung d ch acetat chì bão hòa th y xu t hi n t a
màu vàng nh t.
- L y 2 ml d ch l c, thêm vài gi t dung d ch gelatin m n, xu t hi n t a tr ng.
- L y 2 ml d ch l c, thêm 2 ml dung d ch FeCl3 1%, dung d ch chuy n thành màu nâu
en.
N u quan sát có các hi n t ng trên thì k t lu n trong m u có tanin.
2.2.2.5. Kh o sát s hi n di n c a các h p ch t glycoside [1], [2]
18
Ph
ng pháp xác nh glycoside:
Các thu c th glycoside:
• Thu c th tác d ng lên ph n
ng:
- Thu c th Tollen (xác nh theo
ng kh trong glycoside):
+ Công th c: pha 0,5 ml dung d ch AgNO3 10% v i 0,5 ml dung d ch NaOH
10%. Sau ó nh t t dung d ch NH4OH n khi tan h t k t t a.
+ Nh n bi t: có Ag k t t a.
- Thu c th Molish:
+ Công th c: Nh 1–2 gi t dung d ch thymol 2% vào 1ml H2SO4
+ Nh n bi t: xu t hi n màu
th m.
m
c.
• Thu c th tác d ng lên ph n aglycon:
- Thu c th Baljet:
+ Công th c: Pha dung d ch acid picric 1% trong c n v i dung d ch NaOH 10%
trong n c theo t l th tích 1:1
+Nh n bi t: Nh 3 – 4 gi t thu c th vào 1 mg ch t th , n u có màu vàng cam
ho c h ng x n là ph n ng d ng tính.
- Thu c th Legal:
+ Công th c: hòa tan 1mg ch t th trong 2 – 3 gi t pyridin, thêm 1 gi t dung d ch
Natrinotroprussiat 0,5% m i pha, sau ó cho t t t ng gi t dung d ch KOH 2N.
+ Nh n bi t: xu t hi n màu
tím.
nh tính glycoside:
Thí nghi m:
L y 10g b t g c, lo i các ch t không phân c c b ng ether petrol. Ti p theo chi t b ng
Soxhlet v i dung môi ethanol 50%. D ch l c ethanol 50%
c lo i t p b ng acetat chì
cho n khi không còn tr m hi n. Sau ó, lo i acetat chì d b ng Na2SO4 bão hòa. Cô
c n d ch l c
c cao glycoside thô. Hòa tan cao b ng ethanol 95% và l y dung d ch này
làm m u th .
- Dùng thu c th TOLLEN: xu t hi n k t t a tr ng.
- Dùng thu c th BALJET: màu vàng cam.
N u th y có các hi n t
ng trên thì k t lu n trong m u có ch a glycoside.
2.3. K t qu
K t qu nh tính các h p ch t trong v trái g c và trong nhân h t g c
các b ng sau 1.5 và 1.6 trong ph l c 2.
19
c ghi trong