Tuyển chọn, định tên và khảo sát một số yếu tố ảnh hưởng đến chủng vi khuẩn Lactic sinh tổng hợp Cellulase, có hoạt tính probiotic

Công ngh sinh h c & Gi ng cây tr ng

TUY N CH N, NH TÊN VÀ KH O SÁT M T S Y U T
NH H
NG
N CH NG VI KHU N LACTIC SINH T NG H P
CELLULASE CAO,CÓ HO T TÍNH PROBIOTIC
Nguy n Th Thu1, Tr n Liên Hà2, Nguy n Chí D ng3
Tr ng i h c Bách Khoa, Hà N i
Trung tâm Công ngh sinh h c và Cơng ngh th c ph m

1,2
3

TĨM T T
N c ta là n c nông nghi p, l ng ph ph ph m t o ra t ngành ch bi n nông s n là vô cùng l n, phong
phú và đa d ng. S d ng ph , ph ph m đ làm th c n ch n nuôi là cách ti t ki m ngu n n ng l ng, gi i
quy t v n đ ô nhi m môi tr ng là xu h ng hi n nay. Vì v y, chúng tơi ti n hành nghiên c u: tuy n ch n,
đ nh tên và kh o sát m t s y u t nh h ng đ n ch ng vi khu n lactic có kh n ng sinh t ng h p cellulase, đ
ng d ng trong s n xu t th c n ch n nuôi. T ba ngu n v i m i m u đã phân l p đ c 8 ch ng vi khu n
lactic t o enzym cellulase và ch n đ c ch ng G5 sinh axit t ng cao nh t là 14,4 g/l; sinh t ng h p cellulase: t
l vòng th y phân so v i đ ng kính l th ch D3 - d3 = 22, kháng v i Samonella typhimrium ATCC 14028 là 9,
Staphylococus epidermidis ATCC 12228 là 8, Bacillus cereus ATCC 13061 là 10, Listeria innocua
ATCC33090là 13. B ng các ph ng pháp sinh lý, sinh hóa và 16S Rrna, k t qu đ nh tên ch ng G5 có đ
t ng đ ng 100% v i ch ng Lactobacillus casei ATCC334. i u ki n nuôi thu sinh kh i đ i v i ch ng L.casei
G5: nhi t đ = 37°C; pH 6,5; n ng đ đ ng 20g/l; t l c p gi ng 5%, t c đ l c 75 vịng/phút sau 36 gi ni
c y giá tr OD (600 nm) thu đ c là 11,76.
T khóa: Bã dong ri ng, cellulose, lactic acid, lactobacillus casei, probiotic.

I.

TV N
Vi c s d ng công ngh vi sinh trong ch
bi n th c n ch n nuôi b ng ph ng pháp
chua ph , ph ph m nông nghi p
v i vi
khu n lactic trong đi u ki n y m khí lên men
t o ra axit lactic làm pH gi m, kéo dài th i
gian b o qu n đang đ c các nhà nghiên c u
quan tâm. Vi khu n lactic sinh t ng h p
cellululase phân gi i cellulose thành các phân
t nh h n giúp gia súc d h p th . Ngồi ra,
chúng cịn sinh bacteriocin c ch s phát tri n
c a n m m c và các vi khu n gây b nh, các vi
sinh v t gây th i r a. Ph ng pháp này giúp
t n d ng đ c l ng ph , ph ph m d th a,
gi m chi phí th c n ch n ni. Th c n
chua đó khơng b t n th t dinh d ng l i b
sung các vi sinh v t có l i cho đ ng tiêu hóa,
giúp gia súc ít b b nh h n.
ã có m t s nghiên c u trong và ngoài
n c v vi c ch bi n và s d ng ph ph
ph m nông nghi p nh r m, lá s n, bã s n...
làm th c n ch n nuôi b ng ph ng pháp
chua (Nguyen Thi Lo và c ng s , 2000;
Preston. T.R and Leng.R. A, 1987; Nguy n

Xuân Tr ch, 2004). S d ng các vi sinh v t
v i ph ph ph m nông nghi p, ch y u là vi
khu n lactic nh L. plantarum, Enterococcus
lactis ( ào Th L ng, 2010), L. casei, L.

bulgaricus,
L.
termofil,
Streptococcus
pyogenes, Streptococcus lactics... thành axit
lactic và các axit h u c trong đi u ki n y m
khí (Lê V n Li n và Nguy n H u Tào, 2004).
Hàm l ng axit lactic t ng do quá trình sinh
tr ng, phát tri n c a vi sinh v t làm cho môi
tr ng pH gi m gây c ch các vi khu n gây
th i. Ngồi ra, vi khu n lactic cịn sinh
bacteriocin c ch toàn b s phát tri n c a
n m m c và các vi khu n gây b nh ( ào Th
L ng, 2010; Lê Ng c Thùy Trang và Ph m
Minh Nh t, 2014). S d ng vi khu n
Lactobacillus plantarum lên men bã s n làm
th c n cho gia súc (Nguy n Minh Trí và c ng
s , 2014). S d ng thân cây đ u ph ng (l c)
chua v i ch ph m vi sinh làm th c n cho bị
( ồn
c V , 2008). Tuy nhiên, đ nâng cao
hi u su t và giá tr dinh d ng c a các quá
trình ch bi n ph , ph ph m thành th c n gia
súc thì các y u t nh h ng t i q trình sinh

T P CHÍ KHOA H C VÀ CÔNG NGH LÂM NGHI P S

1-2018

11

Công ngh sinh h c & Gi ng cây tr ng
tr ng, phát tri n c a ch ng vi khu n là r t
quan tr ng.
Vì v y, chúng tôi ti n hành nghiên c u:
“Tuy n ch n, đ nh tên và kh o sát m t s y u
t nh h ng đ n s sinh tr ng và phát tri n
c a vi khu n lactic có kh n ng sinh t ng h p
cellulase, có ho t tính probiotic”.
II. PH
NG PHÁP NGHIÊN C U
2.1. V t li u nghiên c u
Ngu n vi sinh v t: t các m u lên men: d a
mu i, cà mu i, bã dong ri ng.
Các ch ng vi sinh v t ki m đ nh l y vi n
công ngh sinh h c.
Thành ph n môi tr ng:
Môi tr ng là môi tr ng MRS (Man
Rogosa Sharpe): Pepton (10g/l), cao n m men
(5g/l), cao th t (5g/l), glucose (20g/l),
amonicitrat (2g/l), CH3COONa (5g/l), K2HPO4
(2g/l), MgSO4.7H2O (0,1g/l), MnSO4.4H2O
(0,05g/l), Agar (15g/l), pH 6.5.
Môi tr ng CMC: (NH4)2SO4 (1 g/l),
K2HPO4(1g/l), MgSO4.7H2O (0,5g/l) NaCl
(0,003 g/l), CMC (1 g/l), Agar (2 g/l). i u
ch nh pH 7.
Môi tr ng nuôi vi sinh v t ki m đ nh: môi
tr ng NA: 3g/l cao th t, 10g/l pepton, 5g/l

NaCl.
Mơi tr ng th ho t tính:
Mơi tr ng th ho t tính lactic: MRS + 5
(g/l) CaCO3.
Mơi tr ng th ho t tính cellulase: CMC
(1g/l), agar (2 g/l).
Các môi tr ng thanh trùng 110°C trong
30 phút.
2.2. Ph ng pháp nghiên c u
Ph ng pháp phân l p và tuy n ch n vi
sinh v t:
Phân l p theoph ng pháp pha lỗng (Phí
Th Thanh Mai và c ng s , 2015). S d ng
môi tr ng MRS có b sung CaCO3 ( ào Th
L ng, 2010).
Ph ng pháp tuy n ch n s d ng các
ph ng pháp sau: đ nh tính axit lactic b ng
12

thu c th Uffelmann (Nguy n
c L ng và
c ng s , 2003); d a vào kh n ng phân gi i
CaCO3 (c y ch m đi m và đ c l th ch); đ nh
l ng axit theo Therner (Emanuel, V. và c ng
s , 2005); d a vào kh n ng phân gi i
cellulose (c y ch m đi m và đ c l th ch) (Võ
V n Ph c Qu , Cao Ng c i p, 2011), kh
n ng kháng khu n và sinh bacteriocin (Mai
àm Linh và c ng s , 2007; Lê Ng c Thùy
Trang và Ph m Minh Nh t, 2014).

Ph ng pháp đ nh tên
Xác đ nh đ c tính sinh lý, sinh hóa (Nguy n
c L ng và c ng s , 2003; Mai àm Linh
và c ng s , 2007).
Ph ng pháp đ nh tên b ng sinh h c phân
t : gi i trình t 16S rRNA.
Phân lo i d a trên gi i trình t 16S rRNA
c a các ch ng vi khu n v i c p m i 518F:
5’CCAGCAGCCGCGGTAATACG3’; 800R:
5’TACCAGGGTATCTAATCC3’(Sakiyama,
Y. và c ng s , 2009). Chu trình nhi t: B c 1:
95°C trong 5 phút; b c 2: 95°C trong 45 giây;
b c 3: 52°C trong 1 phút; b c 4: 72°C trong
1 phút 30 giây; l p l i t b c 2 đ n 4: 35 chu
k ; b c 5: 72°C trong 5 phút (Khu t H u
Thanh, 2006).
S n ph m PCR đ c tinh s ch và xác đ nh
trình t trên máy ABI PRISM® 3100 Genetic
Analyzer. K t qu đ c trình t đ c x lý trên
ph n m m Clustal X và so sánh v i trình t
16S rRNA c a các lồi đã đ c cơng b t d
li u c a DDBJ, EMBL và GenBank.
Ph ng pháp kh o sát y u t nh h ng
Ch ng tuy n ch n đ c nuôi trong môi
tr ng MRS l ng 37oC, trong 48 gi và canh
tr ng đ c s d ng làm gi ng cho t t c các
thí nghi m.
nh h ng c a nhi t đ : S d ng v i môi
tr ng MRS pH ban đ u 6,5; t l c p gi ng
10% và nuôi t nh các nhi t đ : 30oC, 35oC,

37oC, 40oC, 45oC.
nh h ng c a pH: Nuôi nhi t đ đã l a
ch n trên, t l c p gi ng 10% và pH ban

T P CHÍ KHOA H C VÀ CƠNG NGH LÂM NGHI P S

1-2018


Công ngh sinh h c & Gi ng cây tr ng
đ u

các giá tr : 5; 5,5; 6; 6,5; 7; 7,5; 8.
nh h ng c a n ng đ đ ng: Nhi t đ ,
pH đã đ c ch n trên, t l c p gi ng 10%
vào môi tr ng MRS. Thay đ i hàm l ng
đ ng các m c: 5, 10, 15, 20, 25 g/l.
nh h ng c a t l c p gi ng: Nhi t đ , pH,
n ng đ đ ng đ c l a ch n t các k t qu
trên. Thay đ i t l gi ng: 5, 10, 15, 20, 25%.
B ng 1.

nh h ng c a t c đ l c: V i các đi u
ki n nhi t đ , pH, n ng đ đ ng, t l c p
gi ng đ c l a ch n trên. Ta ti n hành kh o
sát t c đ l c các t c đ : 0, 25, 50, 75, 100,
125 vòng/phút.
III. K T QU VÀ TH O LU N
3.1. Phân l p và tuy n ch n ch ng vi khu n
sinh axit

c đi m c a 8 ch ng vi khu n đ

c tuy n ch n

Sinh t ng h p
cellulase
Hàm l ng axit
t ng sinh ra (g/l)
c l th ch
c l th ch
(D1 - d1) (mm)
(D3 - d3) (mm)
4
9
8
5
12
9
7
11,5
12
8
11,7
20
9
13,5
21
9
12,6

24
10
14,4
22
4
10,8
9
ng kính khu n l c; d2, d4: đ ng kính l th ch.

Lên men sinh axit

Tên
ch ng

C y ch m đi m (D/d)
(mm)
DC1
4
DC2
5,5
C1
5
G1
5
G3
6
G4
5,5
G5
7

G6
4,5
D: đ ng kính vịng phân gi i; d1, d3: đ

B ng 2. Kh n ng sinh bacteriocin c a 4 ch ng đ c ch n
Ch ng
D1 - d (mm)
D2 - d (mm)
Ch ng ki m đ nh
lactic
Không b sung pepsin
B sung pepsin
G1
8
6
G3
6
5
Samonella
G4
7
4
typhimrium
G5
9
5
ATCC 14028
Staphylococus
epidermidisATCC
12228

Bacillus cereus
ATCC 13061

Listeria innocua
ATCC33090

G1
G3
G4
G5
G1
G3
G4
G5
G1
G3
G4
G5

6
8
5
8
4
4
4
10
14
13

10
13

4
7
4
13
2
3
4
6
9
13
9
11

D1 - D2
(mm)
2
1
3
4
2
1
1
3
2
1
0
4

5
0
1
2

D1: đ ng kính vịng kháng khu n khi khơng b sung pepsin (mm);
D2: đ ng kính vịng kháng khu n khi b sung pepsin (mm);
d: đ ng kính l th ch (mm).
T P CHÍ KHOA H C VÀ CÔNG NGH LÂM NGHI P S

1-2018

13


Công ngh sinh h c & Gi ng cây tr ng
T ba ngu n v i m i m u đã tuy n ch n
đ c 8 ch ng vi khu n lactic trên môi tr ng
MRS, sinh t ng h p cellulase: DC1, DC2, C1,
G1, G3, G4, G5, G6. Các ch ng vi khu n đ c
nuôi trong môi tr ng MRS, đem th b ng
Uffelmann. K t qu cho th y canh tr ng 8
ch ng vi khu n làm cho thu c th t màu tím
đen chuy n sang màu vàng r m, ch ng t 8
ch ng vi khu n có kh n ng sinh axit lactic.
Dùng các ph ng pháp tuy n ch n: d a vào
kh n ng phân gi i CaCO3 (c y ch m đi m và
đ c l th ch); đ nh l ng axit; d a vào kh
n ng phân gi i cellulose (đ c l th ch) (b ng
1), ta ch n đ c 4 ch ng: G1, G3, G4, G5 có

t l vịng phân gi i cao nh t. Ch n ch ng sinh
bacteriocin cao nh t (b ng 2). Ta ch n đ c
B ng 3.
Ch ng

Hình thái
khu n l c

Hình
thái t
bào

G5

Tr ng s a,
khu n l c to,
tròn, m t nh n

Tr c
khu n

ch ng G5 sinh axit t ng cao nh t là 14,4 g/l;
D/d = 7, D1 - d1 = 10; sinh t ng h p cellulase
t t D3 - d3 = 22; sinh bacteriocin t t nh t, kích
th c vịng kháng (D4 - d4) đ i v i Samonella
typhimrium ATCC 14028 là 9, Staphylococus
epidermidis ATCC 12228 là 8, Bacillus cereus
ATCC 13061 là 10, Listeria innocua ATCC
33090 là 13.
T các ph ng pháp tuy n ch n trên, chúng

tôi l a ch n ch ng G5 đ ti n hành đ nh danh
b ng ph ng pháp sinh h c phân t .
3.2. nh tên b ng ph ng pháp sinh h c
phân t
Ti n hành quan sát đ c đi m sinh lý, sinh
hóa c a ch ng G5. K t qu th hi n b ng 3.

c đi m sinh lý, sinh hóa ch ng G5
Kh n ng
T o
axit hóa
Catalase
Gram bào
mơi
t
tr ng
+

–

+

–

Hemicellulase

+

Sinh
khí

–

Hình 1. K t qu đi n di s n ph m sau PCR

T hình 1 ta th y đã xu t hi n v ch trên b n
đi n di xu t hi n 1 v ch, đi u đó th hi n m u
14

s n ph m sau PCR là đ ng nh t và có kích
th c là 1400bp.

T P CHÍ KHOA H C VÀ CƠNG NGH LÂM NGHI P S

1-2018


Công ngh sinh h c & Gi ng cây tr ng
Ti n hành ch y trên ch ng trình Blast® đ
xem m c đ t ng đ ng v i các ch ng

Hình 2. Các ch ng có đ t

DNA h gen c a ch ng G5 đ c tách chi t
và đo n gen mã hóa cho 16S rRNA đ c
khu ch đ i nh ph n ng PCR s d ng c p
m i 518F/800R. K t qu gi i trình t đo n gen
16S rRNA c a G5 cho th y đo n gen g m
1400 bp và trình t này đ c so sánh v i các
gen16S rRNA vi khu n trên Genbank v i ph n

m m Blastn. K t qu cho th y đo n gen 16S
rRNA c a ch ng G5 có đ t ng đ ng đ n
100% v i ch ng Lactobacillus casei
ATCC334. Ch ng G5 có tên Lactobacillus
casei G5. Theo m t nghiên c u khác, vi khu n
lactic sinh t ng h p cellulase, ho t tính
enzyme cellulase đ c th hi n qua t l vòng
th y phân và đ ng kính l th ch cao nh t là

Hình 3. nh h

trong ngân hàng gen ta thu đ
trong hình 2.

c k t qu

ng đ ng cao v i ch ng G5

12. Kháng v i M. luteus t 2 - 6 mm, E. coli t
8 - 12 mm, Samonella typhi t 3 - 6 mm,
Shigella flexneri 10 - 12 mm. 2 ch ng vi khu n
lactic c ng sinh t ng h p cellulase là
Lactobacillus plantarum và Enterococcus
lactics ( ào Th L ng và c ng s , 2010).
3.3. Kh o sát m t s y u t nh h ng đ n
kh n ng sinh tr ng và phát tri n ch ng G5
nh h ng c a nhi t đ : K t qu
hình 3
o
cho th y r ng nhi t đ 37 C, pH ban đ u là

6,5 và sau 36 gi nuôi c y, ch ng đ t sinh kh i
cao nh t có giá tr OD600nm là 9,12 . nhi t đ
40°C, giá tr OD600nm là 7,14 th p h n so v i
nhi t đ 37oC. Ch n nhi t đ 37oC cho các
nghiên c u ti p theo.

ng c a nhi t đ đ n s sinh tr

ng và phát tri n c a ch ng

T P CHÍ KHOA H C VÀ CÔNG NGH LÂM NGHI P S

1-2018

15


Công ngh sinh h c & Gi ng cây tr ng
nh h ng c a pH: K t qu cho th y pH
ban đ u 6,5 ch ng sinh tr ng và phát tri n t t
nh t, giá tr OD600nm là 9,52 sau 36 gi ni
c y (hình 4). Khi pH xu ng 5 giá tr OD t i

Hình 4. nh h

ng c a pH đ n s sinh tr

nh c a n ng đ đ ng: K t qu cho th y
n ng đ đ ng nh h ng đ n s sinh tr ng
và phát tri n c a ch ng. n ng đ đ ng 20

g/l cho giá tr OD 600 nm là 9,59 t i 36 gi .
Tuy nhiên, khi t ng n ng đ đ ng lên 25g/l

Hình 5. nh h

16

ng và phát tri n c a ch ng

thì giá tr OD 600 nm đ t 10,10 t i 36 gi , t c
là t ng 1,05 l n, t ng không đáng k so v i
n ng đ đ ng 20g/l. Vì v y ch n n ng đ
đ ng 20g/l cho các nghiên c u ti p theo.

ng c a n ng đ đ

nh h ng c a t l c p gi ng:
hình 6
cho ta th y t l c p gi ng 10% cho giá tr OD
600 nm cao nh t là 9,43 sau 36 gi nuôi c y.
Tuy nhiên, giá tr OD t l c p gi ng 10%

Hình 6. nh h

600 nm ch đ t 2,79. Khi môi tr ng ki m t i
pH 8 giá tr OD t i 600 nm đ t 4,95. Vì v y,
ch n pH 6,5 cho các nghiên c u ti p theo.

ng

cao không đáng k so v i t l c p gi ng 5%
là 8,56 đi u này là không kinh t . Vì v y,
ch n t l c p gi ng 5% cho các nghiên c u
ti p theo.

ng c a t l c p gi ng đ n s sinh tr

ng và phát tri n c a ch ng

T P CHÍ KHOA H C VÀ CƠNG NGH LÂM NGHI P S

1-2018


Công ngh sinh h c & Gi ng cây tr ng
nh h ng c a t c đ l c: Hình 7 cho ta
th y, giá tr OD th p nh t t c đ l c 25 và
125 vòng/phút. Giá tr OD cao nh t t c đ

Hình 7. nh h

l c 75 vòng/phút 36 gi đ t 11,76. Ta ti n
hành ch n t c đ l c 75 vòng/phút cho các
nghiên c u ti p theo.

ng c a t c đ l c đ n s sinh tr

IV. K T LU N
T 3 ngu n v i 10 m u đã tuy n ch n đ c
8 ch ng vi khu n có kh n ng lên men axit

lactic, sinh t ng h p cellulase. Qua các b c
tuy n ch n thì ch ng G5 sinh axit cao nh t,
sinh t ng h p cellulase t t, sinh bacteriocin t t
nh t. G5 là tr c khu n gram (+), không t o bào
t , catalase âm tính, hemicellulase d ng tính,
khơng sinh khí. nh tên theo ph ng pháp
sinh h c phân t 16S rRNA ch ng G5 có đ
t ng đ ng 100% v i ch ng Lactobacillus
casei ATCC334. Ch ng G5 là ch ng
Lactobacillus casei G5. i u ki n đ nuôi
ch ng G5 t t nh t t i 37°C; pH 6,5; n ng đ
đ ng 20g/l; t l c p gi ng 5%, t c đ l c 75
vòng/phút sau 36 gi nuôi c y giá tr OD thu
đ c là 11,76.
TÀI LI U THAM KH O
1. ào Th L ng, Nguy n Th Anh ào, Nguy n
Th Kim Quy, Tr n Th L Quyên, D ng V n H p,
Tr n Qu c Vi t, Ninh Th Len, Bùi Th Thu Huy n
(2010). Phân l p và tuy n ch n vi khu n lactic dùng
trong ch bi n và b o qu n th c n thô xanh và ph
ph m nông nghi p cho gia súc nhai. Di truy n h c và
ng d ng - Chuyên san Cơng ngh sinh h c, s 6/2010.
2. ồn
cV ,
ng Ph c Chung, Nguy n Th
Hi p (2008). Nghiên c u k thu t
chua than đ u
ph ng (l c) làm th c n cho bò s a, bò th t. T p chí

ng và phát tri n c a ch ng

Ch n nuôi, s 6, tr.21-25.
3. Emanuel, V., Adrian, V., Ovidiu, P., Gheorghe, C.
(2005). Isolation of a Lactobacillus plantarum strain
used for obtaining a product for the presvervation of
fodders. African Journal of Biotechnology 4(5): 403-408.
4. Khu t H u Thanh (2006). K thu t gen: Nguyên
lý và ng d ng. NXB. Khoa h c và K thu t.
5. Kozaki M., Uchimura T. & Okada S. (1992).
Experimental manual of lactic acid bacteria.
Asakurasyoten, Tokyo, Japan.
6. Lê Ng c Thùy Trang, Ph m Minh Nh t (2014).
Phân l p và kh o sát các y u t nh h ng đ n kh n ng
s n sinh ch t kháng khu n c a Lactobacillus plantarum.
T p chí sinh h c, 36, tr.97-106.
7. Lê V n Li n, Nguy n H u Tào (2004). K th t
ch bi n b o qu n ph ph m nông nghi p và th y s n
làm th c n ch n nuôi. NXB. Lao đ ng xã h i.
8. Mai àm Linh, MP, Ph m Th Tuy t, Ki u H u
nh, Nguy n Th Giang (2007). c đi m sinh h c c a
các ch ng vi khu n lactic phân l p trên đ a bàn Hà N i.
T p chí Khoa h c
i h c Qu c gia HN, Chuyên san
Khoa h c t nhiên và công ngh , 24: tr. 221-226.
9. Nguy n
c L ng, Phan Th Huy n và Nguy n
Ánh Tuy t (2003). Thí nghi m cơng ngh sinh h c, t p
2, thí nghi m vi sinh v t h c. NXB.
i h c Qu c gia
TP. H Chí Minh, trang 72-73, 414-434, 450-461.

10. Nguy n Minh Trí, Mai Th Tuy t Nga, H Thúy
Di m (2014). Tuy n ch n ch ng vi khu n lactic kh
cyanua t ng thích h p trên mơi tr ng bã s n, s 2,
tr.67-72.
11. Nguyen Thi Lo, Nguyen Thi Hoa Ly, Vo Thi
Kim Thanh and Hoang Nghia Duyet (2000). Ensiling

T P CHÍ KHOA H C VÀ CƠNG NGH LÂM NGHI P S

1-2018

17


Công ngh sinh h c & Gi ng cây tr ng
Techniques and evaluation of cassava leaf silage for
Mong Cai Sow in central Viet Nam, Sustaimable
Livestock production on local feed resources, Ho Chi
Minh City, Viet Nam Famury, 18-20 th c hi n, P 25.
12. Nguy n Xuân Tr ch (2004). nh h ng c a x
lý ki m hóa b ng vôi ho c ure đ n l ng n vào t l
tiêu hóa r m. T p chí Ch n ni, s 11, tr. 16-18.
13. Phí Th Thanh Mai, Tr n Liên Hà, Nguy n
Thanh H ng, Nguy n Th Thùy (2015). Phân l p và
tuy n ch n ch ng vi khu n có kh n ng lên men s n
xu t axit lactic t xyloza. T p chí Khoa h c Nông
nghi p, s 10, tr. 91-94.
14. Preston. T.R and Leng.R. A (1987). Matching
ruminant production systems with available resources in

the tropics and sub-tropics. Penambul Books Ltd,
Mmidale. NSW. Australia, pp. 25-37.
15. Sakiyama, Y., Nguyen, K. N. T., Nguyen, M. G.,
Miyadoh, S., Duong, V. H. & Ando, K (2009).
Kineosporia babensis sp. nov., isolated from plant litter
in Vietnam. Int J Syst Evol Microbiol, 59: 550-554.
16. Thompson J.D., Gibson T.J., Plewniak F.,
Jeanmougin F. & Higgins D.G. (1997). The
CLUSTAL_X windows interface: flexible strategies for
multiple sequence alignment aided by quality analysis
tool. Nucleic Acids Res 25: 4876-4882.
17. Võ V n Ph c Qu , Cao Ng c i p (2011).
Phân l p và nh n di n vi khu n phân gi i cellulose. T p
chí Khoa h c, H C n Th , 18ª, tr.177-184.

SELECTION, IDENTIFICATION AND CHARACTERIZATION
OF LACTIC ACID BACTERIA, WHICH PRODUCE CELLULASE
TO APPLICATION FOR ANIMAL FEED PRODUCTION
Nguyen Thi Thu1, Tran Lien Ha2, Nguyen Chi Dung3
1,2

3

Hanoi University of Science and Technology
Center of Biotechnology and Food Technology

SUMMARY
At present, the area of cultivating edible canna is 30,000 hectares in the whole country, with an annual output
of about 300,000 tons of fresh tubers. The starch producting process from edible canna tubers creates a large
amount of canna dregs of about 70 to 75%. Using the brewed edible canna paste as animal feed is a way to save

energy and solve the problem of environmental pollution, which is the current trend. Therefore, we had done
research: “selection, identification and characterization of lactic acid bateria, which produce cellulase and
application for animal feed production”. Among them, G5 was selected because it has produced the highest
total acid of 14.4 g/l; cellulase (D - d4 = 22), and bacteriocin inhibition growth of Samonella typhimrium
ATCC 14028 is 9, Staphylococus epidermidis ATCC 12228 is 8, Bacillus cereus ATCC 13061 is 10, Listeria
innocua ATCC 33090 is 13. G5 was identified Lactobacillus casei by physiological and 16S rRNA. The
condition for biomass production: temperature of 37°C; pH 6.5; sugar concentration of 20 g/l; inoculum of 5%,
shaking rate of 75 rpm/minute after 36 hours of culturing OD value (600 nm) was 11.76.
Keywords: Edible canna dregs, cellulose, Lactic acid, Lactobacillus casei, probiotic.

18

Ngày nh n bài

: 18/4/2017

Ngày ph n bi n
Ngày quy t đ nh đ ng

: 10/5/2017
: 17/5/2017

T P CHÍ KHOA H C VÀ CÔNG NGH LÂM NGHI P S

1-2018