Tách chiết nghiên cứu tách dòng xác định trình tự và biểu hiện gen mã hoá Mannanase từ nấm mốc Aspergillus Niger

Tóm tắt luận văn
Endo--1,4-mannanase [EC 3.2.1.78] l enzyme xỳc tỏc thủy phân một
cách ngẫu nhiên liên kết β-1,4-mannosidic của các mannan, galactomannan và
glucomannan tạo thành mannobiose, mannotriose, mannooligosaccharide và một
lượng nhỏ mannose. Nó được ứng dụng trong nhiều ngành cơng nghiệp như:
công nghiệp sản xuất thức ăn gia súc, công nghiệp dược, công nghiệp giấy và bột
giấy, công nghiệp khai thác khí đốt và dầu mỏ, cơng nghiệp thực phẩm v
ung.
Bằng kỹ thuật RT-PCR, tách dòng và xác định trình tự, đoạn gen 1293 bp
mà hoá cho -mannanase (Manan Endo--1,4-mannosidase [EC 3.2.1.78]) từ
nấm mốc Aspergillus niger đà được xác định. RNA tổng số của Aspergillus niger
đà tách chiết được nguyên vẹn. Bằng việc sử dụng vector tách dòng PCR2.1 trong
bộ kít TA TOPO Cloning kit, dòng gen mà hoá mannanase đà được tách thành
công sau khi khuyếch đại gen này bằng phản ứng RT-PCR với cặp mồi chuyên
biệt. Trình tự gen của đoạn DNA 1293 bp mà hóa cho 429 acid amin (trừ bộ mở
đầu và kết thúc) đà được xác định trên máy xác định trình tự gen tự động. Việc
nghiên cứu biểu hiện gen mà hoá cho mannanase được tách từ A. niger đang được
tiến hành trên nÊm men Pichia X-33 sau khi ®· thiÕt kÕ vector biểu hiện pPicZ.

Từ khoá:
Mannanase, Aspergillus niger, tách dòng, xác định tr×nh tù, biĨu hiƯn