Thực hành sinh hóa

THỰC HÀNH SINH HÓA
THỰC HÀNH SINH HÓA
TS. ĐỖ HIẾU LIÊM
TS. ĐỖ HIẾU LIÊM
THỰC HÀNH SINH HÓA ĐỘNG VẬT
•
Bài 1: Thực nghiệm các hợp chất glucid
•
Bài 2: Thực nghiệm các hợp chất lipid và enzyme
•
Bài 3: Thực nghiệm các hợp chất amno acid và protein
•
Bài 4: Thực nghiệm các hợp chất vitamin và khoáng chất
•
Nhóm thực hành 4 tiểu nhóm
•
Mỗi tiểu nhóm thực hành 1 bài
Sinh viên mặc áo blouse và tuân theo nội qui
THỰC NGHIỆM CÁC HỢP
CHẤT GLUCID
1. PHẦN ĐỊNH TÍNH
1.1. Phản ứng Molisch
1.2. Phản ứng Seliwanoff
1.3. Phản ứng Benedict
1.4. Phản ứng định tính amidon
- Phản ứng màu amidon với iod
- Phản ứng phân giải amidon bằng acid vô cơ đậm đặc
2. PHẦN ĐỊNH LƯỢNG
Định hàm lượng glucose trong máu
BÀI 1
1. PHẦN ĐỊNH TÍNH

1.1. Phản ứng Molisch
Polysaccharide
Monosaccharide
Glucose
Ribose
Fructose
Hexose
Pentose
H
2
SO
4
đđ
H
2
SO
4
đđ
α.1, 4
α.1, 6
Glucose
FructoseRibose
O
CHO
Furfural
Thuốc thử Màu
đặc
trưng
Hydroxymethyl
furfural

O
CHOHOH
2
C
Dihydroxymethyl
furfural
CH
2
OH
HOH
2
C
O
GLUCOS
E
H
2
SO
4
đđ
α.Napthol
Hydroxymethyl furfural
Vòng nhẫn màu tím
GLUCOSE
OH
α Napthol
H
2
SO
4

đđ
Vòng nhẫn
màu tím
giữa 2 lớp
dung dịch
Xác định sự hiện diện hợp chất glucid
1.2. Phản ứng Seliwanoff
FRUCTOS
E
HCl

đđ
Resorcinol
Dihydroxymethyl furfural
Dung dịch màu
đỏ
Dung dịch màu
đỏ
Fructose
Resorcinol
+
HCl đđ
1.3. Phản ứng Benedict
GLUCOSE
TT Benedict
Nhiệt độ
Kết tủa vàng cam
Kết tủa vàng cam
Kết tủa đỏ
Kết tủa đỏ

Kết tủa đen
Kết tủa đen
Nhiệt độ
Nhiệt độ
Glucose
Sodium Citrate
+ CuSO
4
CuOCu
2
O
Xác định sự hiện diện ketose
Xác định tính khử
1.4. Phản ứng định tính amidon
1.4.1. Phản ứng màu amidon + iod
1.4.2. Phản ứng phân giải amidon bằng
acid vô cơ đậm đặc
AMIDON
AMILOPECTIN
AMILOSE
AMILOSE
Iod
(Lugol)
Na
2
S
2
O
3
Na

2
S
2
O
3
AMIDON
H
2
SO
4
20%PhenolphtaleinNaOH

Benedict
Seliwanoff
Làm lạnh Làm lạnh
2. ĐỊNH HÀM LƯỢNG GLUCOSE TRONG MÁU
(Phương pháp Somogyi-Nelson)
1.Máu + Ba(OH)
2
+ ZnSO
4
2.Ly tâm + lấy nước trong
3.DD Somogyi
DD Somogyi
(Cu
2
SO
4
)
4.DD Nelson

DD Nelson
(Arsenomolybdate)
H
2
O
1
1
Nước cất
2
2
Glucose máu
3
3
Glucose chuẩn

 
5.QUANG PHỔ KẾ
λ = 520 nm
Cách thủy
70
0
C
0.000
A
2

A
3

A

2
: Độ hấp thu của glucose máu xét nghiệm
A
3
: Độ hấp thu của glucose chuẩn
Công thức tính:
0.05x A
100x A x 0.05
(mg%)máu Glucose
3
2
=
THỰC NGHIỆM CÁC HỢP CHẤT
LIPID VÀ ENZYME
1.THỰC NGHIỆM CÁC HỢP CHẤT LIPID
1.1. Độ hòa tan và nhũ hóa triacylglycerol
1.2. Khảo sát sắc tố mật
1.3. Khảo sát thể ketone
2.THỰC NGHIỆM CÁC ENZYME
2.1.Khảo sát enzyme catalase trong hồng cầu
2.2.Khảo sát hoạt lực enzyme amylase trong huyết thanh
BÀI 2