TT HÓA SINH ĐẠI CƯƠNG

<span class='text_page_counter'>(1)</span><div class='page_container' data-page=1></div>
<span class='text_page_counter'>(2)</span><div class='page_container' data-page=2></div>
<span class='text_page_counter'>(3)</span><div class='page_container' data-page=3>

<b>1. Phản ứng biure</b>

Trong mt kiềm, các chất chứa từ hai liên kết peptide

trở lên sẽ tạo phức chất màu tím hồng với Cu

++

(muối

đồng)

Cơ chế phản ứng:

</div>
<span class='text_page_counter'>(4)</span><div class='page_container' data-page=4></div>
<span class='text_page_counter'>(5)</span><div class='page_container' data-page=5>

b. Ứng dụng



Phát hiện protein



Định lượng protein: Dự vào cường độ

</div>
<span class='text_page_counter'>(6)</span><div class='page_container' data-page=6>

c. Cách làm

+ ố 1: cho kho ng 0,1g ure. un trên ngọn lửa đèn

ả

Đ

cồn

đế

n khi ure nóng ch y; để nguội s đ c

biure.

+ ố 2: 1 ml lòng trắng trứng

+ è 3: 1 ml dung dÞch gelatin 1%

+ è 4: kho ng 1 ml s a t ơI

Thêm vào mỗi ống 1 ml NaOH 10%, 1-2 giọt

CuSO4 1%.

</div>
<span class='text_page_counter'>(7)</span><div class='page_container' data-page=7>

<b>2. Phản ứng xantoprotein</b>

a. Nguyên lý

:

C¸c protein có chứa aa mạch vòng nh : Phe, Tyr, Trp, vv<b>…</b> d

ới td của HNO3 đặc, b nit ị ơ húa thành màu vàng,nếu gặp

m«i tr ờng kiềm mạnh thỡ dẫn xuất này sẽ tạo thành muèi cã

màu da cam. C ch ph n ng:ơ ế ả ứ

</div>
<span class='text_page_counter'>(8)</span><div class='page_container' data-page=8>

b. Tiến hành

Lấy

3 èng nghiÖm

- èng 1: cho1 ml dd

lòng

tr

ắ

ng tr ng

ứ

- èng 2: cho kho ng 1 ml s

ả

ữ ươ

a t

i

- èng 3: cho 1 ml dd gelatin 1%

Cho ti p vào mỗi ống 1 ml HNO

ế

3

đặc , đun trên

đèn cồn, đến khi xuất hiện màu vàng. Sau khi ể

<b>đ</b>

nguội, cho từ từ từng giọt NaOH 20% (kho ng 1-2

ả

ml) cho đến khi xuất hiện màu vàng da cam.

</div>
<span class='text_page_counter'>(9)</span><div class='page_container' data-page=9>

c. Ứng dụng

</div>
<span class='text_page_counter'>(10)</span><div class='page_container' data-page=10>

II.

CÁC PHẢN ỨNG SA LẮNG PROTEIN

Trong dd, protein ở trạng thái keo bền, nhờ 2 yếu tố:

-

Sức đẩy tĩnh điện

-

Lớp vỏ thủy hóa

</div>
<span class='text_page_counter'>(11)</span><div class='page_container' data-page=11>

<i><b>Lµm mÊt ®iƯn tÝch cđa protein b»ng c¸ch :</b></i>

+ Đưa pH của dd protein về pH đẳng điện (pHi), khi đú đa

sè các protein ở dạng l ỡng cực, không mang điện tích.

+ Thêm NaCl, (NH₄)₂SO₄<b></b>: các ion sẽ trung hòa điện tÝch

cđa protein.

<i><b> Lµm mÊt líp vë thđy hãa b»ng c¸ch :</b></i>

</div>
<span class='text_page_counter'>(12)</span><div class='page_container' data-page=12>

Hai loại biến tính:

+ Thuận nghịch: dd dịch keo có thể trở lại trạng thái ban
đầu sau khi khử tác nhân đi. Thuộc loại biến đổi này gồm
có các ph/ứng: ph/ứng diêm tích, tác dụng nhẹ của cồn,
axeton ở nhiệt độ thấp...

+ Khơng thuận nghịch: protein bị biến đổi hồn tồn, bị hủy
hoại, mất tính hịa tan trong n ớc. Thuộc loại biến đổi này
gồm: ph/ứng gây sa lắng bởi các muối kim loại nặng,

</div>
<span class='text_page_counter'>(13)</span><div class='page_container' data-page=13>

1. Phản ng diờm tớch

<i><b>a. Nguyên lý</b></i>

- Diêm tích là ph ơng ph¸p dïng c¸c muèi nh : NaCl,

(NH₄)₂SO₄... để kết ta protein.

Nguyên nhân kết tủa là do các tiểu phần protein bị trung hòa

điện tích bi cỏc ion. Các protein kh¸c nhau sÏ tđa ë nh ng ữ

nồng độ muối khác nhau. Vỡ vậy có thể tách riêng các protein

ra khỏi hỗn hợp.

- VD globulin cú KLPT lớn hơn albumin, trong n ớc globulin tích
điện (-) ít hơn albumin, globulin bị kết tủa ở nồng độ amoni

</div>
<span class='text_page_counter'>(14)</span><div class='page_container' data-page=14>

<i><b>b. TiÕn hµnh</b></i>

L y 2 ng nghi m:ấ ố ệ

- ống 1: lấy 3 ml LTT, 3 ml dd (NH₄)₂SO₄ bão hòa, lắc đều

đ ợc dd bán bão hòa, globulin bị sa lắng, để 5 phút, lọc
sang ố.2.

- ống 2: Cho vào 2 bột (NHố ₄)₂SO₄, v a ừ cho v a l c, ừ ắ đến

khi b·o hßa, albumin s sa l¾ng. ẽ Để 5 phút. L c sang è.3.ọ

</div>
<span class='text_page_counter'>(15)</span><div class='page_container' data-page=15>

<i><b>c. øng dơng</b></i>

KÕt tđa b»ng c¸ch này các protein không bị biến tính

</div>
<span class='text_page_counter'>(16)</span><div class='page_container' data-page=16>

2. Sa lắng bằng cồn

<i><b>a. Nguyên lý</b></i>

- Protein bị kết tủa bông hoặc vẩn trong dung môi h/cơ nh :
cån, aceton, eter,... Do protein bÞ mÊt líp vá thđy hóa

- Tủa càng dễ nếu có thêm NaCl.

- Kết tủa bằng cồn có thể là kết tủa thuận nghịch nÕu tiÕn

hành ở nhiệt độ thấp (00_{đến 15}<i><b>_–</b></i> 0_{C) và tủa đ ợc tách khỏi}

</div>
<span class='text_page_counter'>(17)</span><div class='page_container' data-page=17>

<i><b>b. TiÕn hµnh</b></i>

- èng 1 : cho 1 ml cån 96o

- èng 2: cho 1 ml cån 96o_{, thªm 1-2 giọt NaCl bÃo hòa}

Cho vào mỗi ống 1 ml dd lòng trắng trứng.

- ống 3: 1ml cồn 96o_{, 1ml dd gelatin 1%.}

NhËn xÐt vµ gi/thÝch kÕt qu .ả

<i><b>c. øng dơng</b></i>

- Dïng cån s¸t trïng

</div>
<span class='text_page_counter'>(18)</span><div class='page_container' data-page=18>

<b>3. Sa lắng bởi nhiệt độ cao</b>

<i><b>a. Nguyªn lý</b></i>

- Protein khi b đun nóng sẽ bị xáo trộn về mặt c u truc

phân tử, mất lớp vỏ thủy hóa nên mất tính hòa tan và bị

ụng vún. Hin t ợng này x y ra mạnh ở điểm đẳng điện. ả

- NÕu sù biÕn tÝnh nµy x y ra ë pH khác nhau (trong môi tr

</div>
<span class='text_page_counter'>(19)</span><div class='page_container' data-page=19>

<i><b>b. Tiến hành</b></i>

Lấy 5 ống, cho vào mỗi ống 2 ml dd lòng trắng trứng.
+ ống 1: đun sôi, theo dõi sù kÕt tña.

+ ống 2: thêm 1 giọt a. acid 1% để tạo điểm đẳng điện, đun sôi.
+ ống 3: thêm 0,5 ml a. acid 10%, đun sôi.

+ èng 4: thêm 0,5 ml NaOH 10%, đun sôi.

+ ống 5: thêm 0,5 ml a.acid 10%, 3-4 giọt NaCl bÃo hòa, đun sôi.

Nhận xét và gi i thích kết qu .

<i><b>c. øng dông</b></i>

</div>
<span class='text_page_counter'>(20)</span><div class='page_container' data-page=20>

Bài 2: THỰC NGHIỆM VỀ ENZYME

<b>1. Thuỷ phân tinh bột bởi </b>

<b>amylase</b>

<i><b>a. Nguyên lý</b></i>

Tinh bột là polysaccharide, gåm nhiỊu đơn vị glucose n i víi nhau ố

bëi lk  - 1,4 glycoside vµ -1,6 glycoside. TB kh«ng cã nhãm

aldehyde tù do , nên khơng cho phản ứng tromer dương tính.

</div>
<span class='text_page_counter'>(21)</span><div class='page_container' data-page=21></div>
<span class='text_page_counter'>(22)</span><div class='page_container' data-page=22>

<i><b>b. TiÕn hµnh</b></i>

- Sóc miƯng b»ng n íc cÊt. NgËm mét Ýt n íc cÊt kho ng 1-3 ả

phút, khẽ cử động l ỡi để trộn đều n ớc bọt với n ớc cất, rồi cho

qua phÔu läc vào ống c dd ch a amylase.

- Nhỏ lên phiÕn sø 2 d·y dd lugol 1% : 1TN, 1 C.<b>Đ</b>

- LÊy 2 èng nghiÖm

+ èng A: cho 3 ml TB 1%, 2 ml dd amylase (èng TN)

+ èng B: cho 3 ml TB 1%, 2 ml n íc cÊt (èng C)<b>Đ</b>

Lắc đều hai ng, nhỏ ố vài gi t t ng TN ọ ừ ố vào 1 l ỗ ở dóy TN,

vài gi t t ng C ọ ừ ố Đ vào 1 l ỗ ở dãy C. Sau kho ng 2 Đ ả phút l i ạ

nh ỏ vào l ti p theo. Quan sát sự đổi màu và nhận xột.

- Phần còn lại của 2 ống thử bằng p.ø. Tromer. Nh n ậ xét kÕt

</div>
<span class='text_page_counter'>(23)</span><div class='page_container' data-page=23>

<b>2. nh h ởng của nhiệt độẢ</b>

<i><b>a. Nguyªn lý </b></i>

Phần lớn các enzyme có hoạt lực mạnh ở thân nhiÖt. NÕu

nhiệt độ quá thấp thỡ enzym sẽ hoạt động rất yếu, ngựơc lại

nếu nhiệt độ cao thỡ enzyme sẽ bị tê liệt và bị huỷ hoại.

<i><b>b. TiÕn hµnh</b></i>

LÊy 3 èng nghiƯm

+ ống 1: cho 1 ml ddamylase, ngâm vào chậu n ớc đá 15 .<b>’</b>

+ ống 2: cho 1 ml dd amylase, đun sôi , để nguội
+ ống 3: cho 1 ml ddamylase

Sau đó cho mỗi ống 1 ml dd tinh bột 1% lắc đều, để yên

trong 5-10 råi thö b»ng ph n øng Tromer ho c dd lugol 1%. ’ ả ặ

</div>
<span class='text_page_counter'>(24)</span><div class='page_container' data-page=24>

<b>3. Tỏc dng c hiu</b>

<i><b>a. Nguyên lý</b></i>

Amylase và sucrase là 2 enzyme th/ph©n lk glycoside, nh ng

amylase chØ th/ph©n lk , 1-4 glycoside cđa tinh bét, cßn

sucrase chỉ th/phân lk , 1-2 glycoside của sucrose.

<i><b>b. Tiến hành</b></i>

Lấy 4 èng nghiÖm

+ èng 1: cho 1 ml dd tinh bét 1%, 1 ml dd amylase
+ èng 2: cho 1 ml dd sucrose 1%, 1 ml dd amylase

+ èng 3: cho 1 ml dd sucrose 1%, 1 ml dd sucrase (men bia)
+ èng 4: cho 1 ml dd tinh bét 1%, 1 ml dd sucrase

Lắc đều rồi thử bằng ph n ứng Tromer, quan sát màu của ả

</div>
<span class='text_page_counter'>(25)</span><div class='page_container' data-page=25>

<b>4. nh h ëng cđa pHẢ</b>

<i><b>a. Nguyªn lý</b></i>

Vì cã b n ch t protein, nªn enzyme rÊt mÉn c m víi pH cđa mt. ả ấ ả

Mỗi loại enzyme có một pH tối u trong hđộng, VD pepsin có hoạt

lực mạnh ở pH 1,5-2,5. pH mt càng gần pH tối u, tốc độ p cng

cao, nghĩa là enzyme h càng mạnh. <b></b>

S thay đổi pH dù nhỏ cũng /h đến hoạt độ của enzyme, do /h ả ả

</div>
<span class='text_page_counter'>(26)</span><div class='page_container' data-page=26>

<i><b>b. Cách tiến hành</b></i>

Ly tht chớnh xỏc vo cỏc ng nghiệm đánh số
từ 1- 8 theo chỉ dẫn d ới đây:

<b>Sè èng</b>

<b>pH (ml)</b> 1 2 3 4 5 6 7 8

5,4 1
5,8 1
6,2 1
6,6 1
6,8 1
7,2 1
7,6 1
8 1

Tinh bét 1% 1 ml 1ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml

Amylase 0,5ml 0,5ml 0,5ml 0,5ml 0,5ml 0,5ml 0,5ml 0,5ml

</div>
<span class='text_page_counter'>(27)</span><div class='page_container' data-page=27></div>
<span class='text_page_counter'>(28)</span><div class='page_container' data-page=28></div>
<span class='text_page_counter'>(29)</span><div class='page_container' data-page=29>

-

-- Đun sôi, quan sát thấy màu sắc biến đổi

</div>

<!--links-->