Báo cáo thực hành Vi sinh vật học IUH

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CƠNG NGHIỆP TP. HỒ CHÍ MINH
VIỆN CƠNG NGHỆ SINH HỌC – THỰC PHẨM

-------o0o-------

BÁO CÁO THỰC HÀNH VI SINH VẬT HỌC
PHÂN LẬP VÀ QUAN SÁT HÌNH THÁI ĐẠI THỂ VÀ VI THỂ CỦA VI SINH
VẬT TRONG MẪU
GVHD: NGUYỄN THỊ LAN HƯƠNG
LỚP: DHTP15B
NHĨM: 2 TỔ 1

Thành phố Hồ Chí Minh ngày 18 tháng 12 năm 2020


1.Tên vấn đề: Phân lập và quan sát hình thái đại thể và vi thể của vi sinh vật
trong mẫu
2.Thành viên: nhóm 2 – tổ 1 DHTP15B
Sinh viên

MSSV

Huỳnh Thị Kim Ngọc

19488101

Nguyễn Thị Bích Ngọc

19504401

Huỳnh Nguyễn Minh Phượng

19492741

Huỳnh Thị Trúc Nguyên

19496661

Nguyễn Võ Thùy Linh

19493851

Hà Kim Phụng

19489331

3. Qui trình thực hiện:

chọn mẫu

chọn VK(-),
VK(+), nấm men,
nấm mốc,cầu
khuẩn

cấy truyền làm
thuần vi sinh vật
vào ống nghiệm

chọn môi
trường nuôi

cấy

nhuộm Gram

nộp mẫu vsv
thuần chủng

nuôi cấy

quan sát vsv

ủ

tách từng vsv


4. Kế hoạch
⁕ Tuần 1: (Ngày 6/11-10/11/2020): lên kế hoạch phân công chi tiết, chọn mẫu.
⁕ Tuần 2: (Ngày 11/11-16/11/2020): tiệt trùng dụng cụ đĩa petri, pha chế và đổ môi trường.
⁕ Tuần 3: (Ngày 17/11-23/11/2020): nuôi và cấy truyền vi sinh vật.
⁕ Tuần 4: (Ngày 24/11-30/11/2020): quan sát dưới kính hiển vi, cấy truyền làm thuần vsv
trên đĩa petri.
⁕ Tuần 5: (Ngày 1/12-7/12/2020): nhuộm gram, cấy truyền trên ống thạch nghiêng.
⁕ Tuần 6: (Ngày 8/12-12/12/2020): xem, kiểm tra kết quả đạt được, hấp bỏ đĩa môi trường,
nộp báo cáo.
5. Nhật ký:
⁂ Ngày 6/11/2020
• Cơng việc: - Đọc và hiểu quy trình làm ni cấy vi sinh vật.
- Lên kế hoạch phân công công việc cho từng thành viên.
- Chọn mẫu vi sinh vật ni cấy.

• Phương pháp ni cấy:
- MT tự nhiên: MT cao thịt-peptone ( nuôi VK)
- MT nhân tạo: MT hansen(nuôi nấm men)
- MT bán tự nhiên: MT Potato Glucose Agar (PGA) (nuôi nấm mốc)
- 15 đĩa peptri (6 đĩa cao thịt, 5 đĩa hansen, 4 đĩa PGA)
• Kết quả:chọn mơi trường rắn ni cấy vi sinh và chia đều 3 mơi trường cho 4 nhóm pha
chế, chọn mẫu khơng khí và mẫu chung để ni cấy vsv.
• Thảo luận với giáo viên: 1 đĩa peptri chứa 8-10ml mơi trường.
• Phương hướng giải quyết: chọn ngày lên pha mơi trường dinh dưỡng.
⁂ Ngày 14/11/2020
•Cơng việc: -Đổ mơi trường dinh dưỡng.
-Ni vi sinh vật.
• Người thực hiện: cả nhóm
• Phương pháp thực hiện:
1.Chuẩn bị đĩa petri đổ mơi trường (15 đĩa):Trước khi sử dụng đĩa petri phải rửa
sạch, sấy khơ, sau đó gói giấy báo và sấy tiệt trùng.


*THAO TÁC GÓI ĐĨA PETRI
Bước 1: Rửa sạch đĩa petri bằng nước sạch và lau khô đĩa.
Bước 2: Chuẩn bị giấy báo để gói đĩa petri.
Bước 3: Cho 3-4 cái đĩa petri vào giữa giấy báo
Bước 4: Gói giấy báo chứa đĩa cẩn thận và gói chặt giấy báo và đưa vào tủ sấy tiệt
trùng ở 180 độ trong vòng 30 phút.

*Chú ý: Các dụng cụ trên cần phải sạch sẽ về mặt hóa học (khơng dính các chất hữu
cơ, vơ cơ, thủy tinh cần phải trung tính) và sạch về mặt vsv học (khơng chứa bất kì
tế bào vsv, các dụng cụ phải vô trùng).
*CÁC BƯỚC SỬ DỤNG TỦ SẤY
Bước 1: mở cửa tủ và đặt mẫu cần sấy vào buồng tối sao cho không đụng vào thành

của tủ, đóng cửa tủ lại.
Bước 2: cắm điện và khởi động tủ sấy.
Bước 3: tùy vào đối tượng cần khử khuẩn mà sấy ở nhiệt độ thích hợp (dụng cụ
thủy tinh, kim loại) , thường sấy ở 160 độ C trong 2 giờ hoặc 180 độ C
trong 30 phút.
Bước 4: khi tủ vận hành,nhiệt độ sẽ đạt đến giá trị điều chỉnh.
Bước 5: đợi nhiệt độ trong tủ bằng nhiệt độ mơi trường xung quanh thì mở tủ lấy
mẫu vật ra.
2.Pha chế mơi trường
*Mỗi nhóm pha một mơi trường cho tất cả các nhóm trong lớp cùng sử dụng.
- Nhóm 1: Pha mơi trường cao thịt- peptone
- Nhóm 2: Pha mơi trường cao thịt-peptone
- Nhóm 3: Pha mơi trường hansen


- Nhóm 4: Pha mơi trường PGA
- Tính tỉ lệ pha môi trường: Kim Ngọc
- MT tự nhiên: MT cao thịt-peptone ( ni VK)
Bước 1: Cân đong từng hóa chất ( Cao thịt 0,6g , Peptone 2g , Nacl 1g , Agar 4g ,
Nước cất 200 ml )
Bước 2: Phối trộn từng hóa chất với nước cất cho vào cốc theo thứ tự tránh tạo kết
tủa
Bước 3: Khuấy đều, thêm nước cất cho đủ 200ml, tiếp tục khuấy cho hỗn hợp hịa
tan
Bước 4: Đem vào lị vi sóng đun sơi cho agar tan hết hoàn toàn ( đun 2-3 lần/phút,
tránh để sơi tràn ra ngồi)

* Chú ý:
- Cân, đong thật chính xác từng thành phần mơi trường và pha chế theo đúng
trình tự hướng dẫn trong tài liệu. Dùng đĩa cân nhựa hoặc cốc thủy tinh để cân

đong các loại hóa chất dễ hút ẩm
- Các thành phần của mơi trường được hòa riêng rẽ trong nước cất trước khi
phối trộn.
- Phối trộn các thành phần theo đúng trình tự nhất định, tránh sự tương tác trực
tiếp của các thành phần có thể phẩn ứng tạo kết tủa với nhau. Phối trộn dựa theo
nguyên tắc thể tích tăng dần.
- Đối với môi trường rắn, sau khi phối trộn các thành phần phải tiến hành nấu
sơi mơi trường để làm hịa tan hồn tồn agar trước khi phân phối vào bình.


*CÁCH SỬ DỤNG LỊ VI SĨNG
- Cắm điện, ấn Start để lị bắt đầu hoạt động.
- Cho mơi trường mới phối trộn xong vào lò.
- Đặt thời gian khoảng 2-3 phút cho môi trường sôi để tan agar .
- Ấn Start để bắt đầu q trình làm sơi.
*CÁCH SỬ DỤNG NỒI HẤP
Bước 1: kiểm tra nồi hấp, khoá các van (van thơng 2 nồi, vặn xả khí). Kiểm tra mật
độ nước (mực nước đạt từ 1/2 đến 2/3 ống nước) khơng có bọt khí, khóa
van nước.
Bước 2: bật cầu dao.
Bước 3: khi đồng hồ nồi ngoài lên 1at -121độ C. Cho dụng cụ mơi trường cần hấp
vào nồi, khóa nắp theo quy tắc đối xứng hai bên. Mở van thông hai nồi.
Bước 4: chờ đồng hồ nồi trong lên 1at, mở van xả khí (3-5phút). Sau đó đóng van
xả khí chờ đồng hồ lên 1at rồi bắt đầu tính giờ trong 30 phút ở 121 độ.
Bước 5: Sau khi thời gian hấp tiệt trùng đóng van thơng hai nồi, tắt cầu dao, xả khí
,đồng hồ trên xuống 0at, mở nắp
3.Đổ môi trường
Bước 1: Chuẩn bị đĩa petri đã được sấy tiệt trùng và bình mơi trường đã hấp tiệt
trùng, đèn cồn.
Bước 2: Lau mặt bàn làm việc và rửa tay bằng cồn 70o .

Bước 3:Tay phải cầm bình mơi trường,tay trái nhẹ nhàng gỡ giấy báo và nút bông,
hơ miệng bình xung quanh đèn cồn.
Bước 4: Tay trái cầm đĩa petri hơ nhẹ đĩa xung quanh ngọn lửa để khử trùng xung
quanh miệng đĩa.
Bước 5: Mở hé nắp đĩa petri đổ từ từ môi trường vào đĩa cho đến khi lớp thạch được
trải đều.


*Chú ý: Đối với đĩa petri, môi trường chỉ được phân phối vào đĩa sau khi hấp tiệt
trùng. Thể tích môi trường khoảng 12-15ml mỗi đĩa, lớp môi trường dày
khoảng 2mm.

• Kết quả: pha được 200ml mơi trường và mơi trường nhận từ các nhóm khác, đỗ được 15
đĩa mơi trường (6 cao thịt, 5 hansen, 4 PGA),có 2 đĩa bị dính mơi trường trên bề mặt nắp
đậy.

• Thảo luận với giáo viên : việc đo pH trong việc pha chế mơi trường
• Phương hướng giải quyết:
- Khơng cần đo Ph vì đây là những mơi trường cơ bản.
- Có 2 đĩa sai xót và số đĩa cịn lại vẫn đủ để tiến hành thí nghiệm.
4.Ni cấy vsv:
A.Mẫu khơng khí
- Lấy 7 đĩa môi trường (3 cao thịt, 2 hansen, 2 PGA), mở ra lấy mẫu vsv từ khơng khí
đặt trong phịng thí nghiệm T3.09 trường Đại Học Cơng Nghiệp TPHCM.
- Sau 30 phút đậy nắp 7 đĩa petri gói lại gọn gàng cẩn thận bằng giấy báo đem đi ủ 3
ngày.


B.Mẫu chung
Bước 1: khử trùng khu vực cấy và bàn tay bằng dung dịch cồn 70 độ.

Bước 2: các thao tác đều thực hiện quanh ngọn lửa đèn cồn, tay trái cầm micropipet
gắn vào đầu tuýp đã tiệt trùng (121 độ trong 30 phút) hút 0,1ml dịch canh
khuẩn có sẵn trong ống, tay phải cầm đĩa petri hơ quanh miệng đĩa sau đó
dùng micropipet chuyển 0,1ml dịch canh khuẩn lên trên bề mặt môi trường
thạch trong đĩa petri.
Bước 3: Nhúng đầu que cấy trải vào cồn 96 độ và hơ qua ngọn lửa để tiệt
trùng (2-3 lần). Sau đó, để đầu que nguội trong không gian vô trùng của ngọn
lửa đèn cồn.
Bước 4:Mở đĩa petri nhẹ nhàng, dùng que cấy trải đặt lên nắp petri dùng ngón tay
cái áp vào để cảm nhận độ nóng, xem que nguội hay chưa sau đó nhẹ nhàng
để lên bề mặt thạch của đĩa petri. Dùng đầu que cấy trải đều dịch vi khuẩn
lên trên bề mặt thạch. Quá trình thực hiện hãy xoay đĩa một vài lần, mỗi lần
khoảng nửa chu vi đĩa để tạo điều kiện cho que cấy trải dịch vi khuẩn đều
khắp bề mặt môi trường.
Bước 5: Lật ngược đĩa và ủ (gói bằng giấy báo) để ở nhiệt độ, thời gian thích hợp
trong tủ.

• Kết quả: ni thành cơng mẫu vsv trong khơng khí, mẫu chung thì do q trình cấy trải
chưa khơ dẫn đến là mẫu vsv tạo thành từng bệch nên không tách được từng khuẩn lạc.


Mẫu chung

Cấy ria lại mẫu chung

Mẫu khơng khí ni vi sinh vật

• Thảo luận với giáo viên: Cấy lại mẫu chung
• Phương hướng giải quyết:
- Mẫu vsv tạo thành từng bệch thì dùng que cấy lấy một ít vsv từ mẫu đó cấy ria trên đĩa

mơi trường khác.
⁂ngày 17/11/2020
• Cơng việc: pha mơi trường dinh dưỡng (hansen, PGA)
• Người thực hiện: Phụng, Linh, Kim Ngọc, Bích Ngọc, Ngun.
• Phương pháp thực hiện:
- Hấp bỏ đĩa nuôi mẫu vsv bị hư ( tiến hành như hấp lấy)


- Sau đó đổ mơi trường bị hư vào túi rác, rửa lại các đĩa bằng xà phòng và lau khơ đĩa.
- Gói đĩa peptri vào giấy báo đem đi sấy tiệt trùng 181 độ 30 phút (như trên)
- Cân hóa chất để pha mơi trường PGA, hansen
- Tính tỉ lệ pha môi trường: Kim Ngọc
(Cách pha chế môi trường như ngày 14/11)
- Môi trường Hansen (Nguyên, Phụng ,Kim Ngọc)
+
+
+
+
+
+

Glucose: 10g
Peptone: 2g
K2HPO4: 0,6g
MgSO4.H2O: 0,6g
Agar: 4g
Thêm nước cất cho đủ 200ml.

- Mơi trường PGA (Linh, Bích Ngọc):
+ Khoai tây: 40g

+ Agar: 4g
+ Glucose: 4g
+ Thêm nước cất cho đủ 200ml.
- Cho 2 mơi trường vừa phối trộn vào lị vi sóng cho tan agar rồi lấy ra đem đổ vào lọ,
đậy nút bông và đem hấp tiệt trùng ở 121°C trong 30 phút.

- Đổ mơi trường vào đĩa petri (đã trình bày 14/11).


• Kết quả: pha chế thành công 4 đĩa môi trường (2 hansen, 2PGA) để chuẩn bị cho
18/11/2020 lên tiến hành cấy truyền vsv.

⁂ngày 18/11/2020
• Cơng việc: cấy truyền làm thuần vsv lên đĩa petri
• Người thực hiện: Phượng, Kim Ngọc
• Phương pháp thực hiện.
Cấy truyền bằng que cấy đầu tròn (đối với vi khuẩn và nấm men).
Bước 1: Vệ sinh tay trước khi làm việc và mặt bàn bằng cồn
70.
Bước 2: Chuẩn bị que cấy đầu tròn và tiệt trùng que cấy bằng
lửa đèn cồn.
Bước 3: Tay phải cầm que cấy hơ trên ngọn lửa cho nóng đó
và hơ phần thân gần nơi đầu que cấy.
Bước 4: Tay trái cầm đĩa chứa mẫu vi sinh vật hơ xung quanh
đĩa mở nghiêng đĩa gần ngọn lửa sao cho vừa đủ để
que cấy vào trong đĩa.
Bước 5: Để que cấy nguội rồi đưa que cấy vào đĩa petri lấy 1 ít
sinh khối vi sinh vật và đậy nắp đĩa petri và hơ kỹ.
Bước 6: Lấy đĩa petri có mơi trường mới và cấy vào đĩa.

Cấy truyền bằng que cấy đầu móc (đối với nấm mốc)
Bước 1: Vệ sinh tay trước khi làm việc và mặt bàn bằng cồn 70.
Bước 2: Chuẩn bị que cấy đầu móc và tiệt trùng que cấy bằng lửa
đèn cồn.
Bước 3: Tay phải cầm que cấy hơ trên ngọn lửa cho nóng đó và
hơ phần thân gần nơi đầu que cấy.
Bước 4: Tay trái cầm đĩa chứa mẫu vi sinh vật hơ xung quanh
đĩa khẽ mở nghiêng đĩa gần ngọn lửa sao cho vừa đủ để que cấy
vào trong đĩa.
Bước 5: Để que cấy nguội rồi đưa que cấy vào đĩa petri lấy 1 ít
bào tử hoặc sợi nấm và đậy nắp đĩa petri và hơ kỹ phần mở nắp
lúc nãy úp ngược đĩa đẩy đĩa vng góc mặt bàn.
Bước 6: Lấy đĩa petri có mơi trường mới và cấy vào đĩa.

• Kết quả: nấm men bị nhiễm và đường cấy khơng đẹp, cấy thành cơng nấm mốc
Nấm men

Nấm mốc

• Thảo luận với giáo viên: nhóm đã thảo luận với giáo viên về quá trình cấy truyền vsv
bị nhiễm hay là do khi cấy tryền lấy quá ít vsv hoặc hơ lửa quá lâu làm chết vsv.
• Phương pháp giải quyết: khắc phục bằng việc chọn một ngày khác lên pha môi trường,
tiếp tục cấy truyền để thu được mẫu thuần khiết để kịp hồn thành tiến độ cơng việc.


⁂ngày 21/11/2020
• Cơng việc: Hấp bỏ đĩa cấy vsv bị hư
• Người thực hiện: Cả nhóm
• Phương phápthực hiện

- Gói các đĩa vào giấy báo đem đi hấp bỏ trong 30 phút
- Sau đó đổ mơi trường bị hư vào túi rác, rửa lại các đĩa bằng xà phòng và lau khơ đĩa.
- Gói đĩa petri vào giấy báo đem đi sấy tiệt trùng 181 độ 30 phút (như trên)
• Kết quả: thu được đĩa đã sấy tiết trùng
• Phương pháp giải quyết: tiếp tục chuẩn bị đĩa để cấy truyền vsv.
⁂ngày 24/11/2020
• Cơng việc: cấy truyền làm thuần vsv, hấp và đổ mơi trường
• Người thực hiện: Cấy vi khuẩn (cao thịt):Linh
Cấy nấm men (hanse): Bích Ngọc
Hấp và đổ mơi trường vào đĩa: Phụng, Phượng, Ngun
• Phương pháp thực hiện:
1.Cấy truyền (đã trình bày ngày 18/11/2020)

2.Hấp và đổ mơi trường
- Cho 3 lọ môi trường ( cao thịt, hansen và PGA ) còn dư đem hấp tiệt trùng trong 30 phút
- Sau đó lấy mt đổ vào đĩa petri. Đợi đĩa nguội rồi gói vào giấy báo


• Kết quả: cấy thành công nấm men, đường cấy đĩa vi khuẩn vẫn chưa đẹp, đĩa nấm mốc
của ngày 18/11 vẫn tiếp tục phát triển, có 2 đĩa vi khuẩn màu trắng và màu vàng có thể
tiếp tục cấy truyền.

nấm men

vi khuẩn và nấm mốc

• Phương pháp giải quyết: chuẩn bị làm tiêu bản để xem nấm men có thuần khiết hay
khơng.

⁂ngày 27/11/2020

• Cơng việc: - Quan sát trên kính hiển vi.
- Tiến hành nhuộm Gram.
• Người thực hiện: Linh, Ngun, Bích Ngọc,
• Phương pháp thực hiện:


1 Sử dụng kính hiển vi
Bước 1: Chuẩn bị kính
- Cắm điện, bật cơng tắc kính, điều khiển núm chỉnh ánh sang ở đế kính để có được
ánh sáng thích hợp. Xoay vật kính nhỏ nhất (vật kính 10x) về trục kính.
Bước 2: Đặt tiêu bản vào mâm kính
- Trước khi đặt tiêu bản vào mâm kính, phải chọn mặt phải, mặt trái của tiêu bản.
Mặt phải của tiêu bản thường có dán lamen, dán nhãn (nếu có lamen và nhãn)
hoặc làm giảm bớt độ lóa của gương khi để nghiêng soi ra ánh sáng (nếu khơng
có lamen, khơng có nhãn).
- Để mặt phải của tiêu bản lên trên, tay phải mở kẹp tiêu bản, tay trai cầm phía
đầu nhãn tiêu bản, đặt tiêu bản vào mâm kính và tay phải thả kẹp giữ tiêu bản
ra. Tiêu bản được giữ chặt vào xe đẩy, trên mâm kính.
- Dùng ốc xe đẩy để điều chỉnh sao cho mẫu vật nằm đúng vào trục kính (giữ
lỗmâm kính).
BẢO QUẢN KÍNH HIỂN VI
- Sau khi sử dụng xong, xoay tất cả các vật kính ra trước, mở kẹp tiêu bản, lấy tiêu
bản ra trả về chỗ cũ, hạ mâm kính, hạ hộp tụ quang. Dùng hai tay bê kính cất vào tủ
chống ẩm.
- Khi lau kính, khi sử dụng kính, khơng thao rời các bộ phận của kính. Khơng được
dùng tay xoa lên mặt các thấu kính, mà nên dùng một bút lơng nhỏ sạch để chải bụi
ở các mặt kính hoặc dùng bơng mềm, sạch để lau.
- Nếu sử dụng vật kính x100 thì phải thấm giấy lau kính với một giọt dầu xylen để
lau vật kính.
* Khi sử dụng kính hiển vi quan sát tiêu bản vsv sống cần chú ý: có thể dùng điểm

sáng của hộp tụ quang để làm điểm chuẩn khi điều chỉnh mẫu vật về điểm trục kính,
nếu mẫu vật quá nhỏ.
2 Làm tiêu bản VSV sống
Bước 1: Nhỏ 1 giọt nước muối sinh lý NaCl lên phiến kính.
Bước 2: Dùng que cấy chuyển giống vi sinh vật từ đĩa petri lên phiến kính.
Bước 3:Hịa sinh khối vi sinh vật vào giọt nước muối này.
Bước 4: Đặt lá kính lên giọt canh trường thật nhẹ nhàng.
Bước 5: Đưa tiêu bản lên quan sát trên kính hiển vi ở vật kính x10 rồi x40.


• Kết quả: phát hiện nấm mốc có tên là Aspergillus niger vì nấm có hệ sợi bao phủ như
mạng lưới, phát triển nhanh, bao trùm lên khắp đĩa với đầu là những chấm màu đen.

Sợi nấm

3. Tiến hành nhuộm Gram đối với vi khuẩn:
- Dụng cụ: que cấy, cốc 100ml, đèn, bình tia, chậu thuỷ tinh, kính hiển vi, phiến kính,
lamen…
- Hố chất: cồn 96o, dung dịch xylen, thuốc nhuộm Fuchsin Zeihl, thuốc nhuộm
Safranin O, thuốc nhuộm Crystal violet, dung dịch lugol, dầu soi kính.
- Nhóm nhuộm màu vi sinh vật bằng phương pháp nhuộm Gram (nhuộm kép)
LÀM TIÊU BẢN NHUỘM MÀU VSV CỐ ĐỊNH
✓ Nhỏ một giọt nước muối sinh lý NaCl 0.9% lên phiến kính, hồ sinh khối vi
sinh vật vào giọt nước.
✓ Hơ khô trên ngọn lửa đèn cồn.
✓ Nhuộm vết bơi bằng dung dịch tím kết tinh nhỏ 3 giọt methyl violet lên vết bôi
giữ trong vòng 1 phút.


✓ Sử dụng bình tia chứa nước rửa sạch phẩm nhuộm trong vòng 30 giây cho đến

khi màu nhạt dần (lưu ý rửa nhẹ không tia nước trực tiếp vào vết bôi để tránh
trôi hết vi sinh vật).
✓ Nhuộm vết bơi bằng dung dich Lugol giữ trong vịng 1 phút.
✓ Sử dụng bình tia chứa cồn 96 độ rửa sạch phẩm nhuộm trong vòng 30 giây cho
đến khi màu nhạt dần, tiếp theo dùng bình tia chứa nước rửa 30 giây. (lưu ý rửa
nhẹ, không tia trực tiếp lên vết bôi để tránh trôi hết vi sinh vật).
✓ Hơ khô trên ngọn lửa đèn cồn.
✓ Nhuộm màu bổ sung bằng dung dịch Safranin 0 hoặc Suchsin Ziehl trong vòng
1 phút, rửa nước, làm khô.
✓ Nhỏ 1 giọt dầu lên vết bơi .
✓ Quan sát bằng vật kính X100 với dầu soi kính:
*Cách nhận biết :
- Gram dương: bắt màu xanh đen hoặc tím;
- Gram âm: bắt màu đỏ vàng hoặc màu đỏ tía.
*Ý nghĩa của việc nhuộm gram:
- Giúp dễ dàng hóa việc quan sát hình dạng tế bào, các thành phần cấu trúc của
tế bào vsv trên kính hiển vi.
-Giúp phân biệt các lồi vi khuẩn thành hai nhóm gram dương và gram âm
• Kết quả: phát hiện được chủng vi khuẩn Gram dương hình que và chủng vi khuẩn
Ecoli Gram âm hình que

Trực khuẩn Gram dương

Ecoli Gram âm


• Thảo luận với giáo viên: Nhờ cô hướng dẫn quan sát nhuộm đơn nấm men.
• Phương hướng giải quyết: tiếp tục cấy truyền làm thuần 2 mẫu vi khuẩn đã nhuộm
⁂ ngày 30/11/2020
• Cơng việc: làm thạch nghiêng và cấy truyền làm thuần

• Người thực hiện: Kim Ngọc, Nguyên, Phụng,Phượng
• Phương pháp thực hiện:
- Mơi trường pha sẵn cịn dư đem đi hấp tiệt trùng 121 độ C trong 30 phút.
- Làm thạch nghiêng: cần tiến hành ngay sau khi khử trùng môi trường vừa kết thúc
và môi trường chưa đông đặc. ống nghiệm được đặt nghiêng cố định trên giá đỡ.
Phần đỉnh nghiêng phải cách nút đậy 3-5cm. Phần đáy phải có một phần thạch đứng
0,5-1cm.
- Đổ mơi trường vào đĩa petri ( đã trình bày ).
*Lưu ý khi tiến hành:Các thao tác phân phối môi trường vào dụng cụ phải nhanh,
gọn, khéo léo để môi trường không dính lên miệng dụng cụ hoặc nút bơng và việc
phân phối cần thực hiện xong trước khi môi trường bị đơng đặc.

• Kết quả: Thu được 9 ống nghiệm mơi trường thạch nghiêng (2 PGA, 2 hansen, 5 cao
thịt ), 5 đĩa môi trường (3 cao thịt, 2 hansen) và 2 đĩa cấy truyền vẫn chưa đẹp.


• Phương hướng giải quyết: dự kiến ngày 1/12/2020 sẽ tiếp tục cấy truyền làm thuần,
cấy vào 2 ống thạch nghiêng đối với nấm mốc.
⁂ ngày 1/12/2020
• Cơng việc: - Xem kính hiển vi
- Cấy nấm mốc đã thuần vào ống thủy tinh
• Người thực hiện: Cả nhóm
• Phương pháp thực hiện:
•
1.Xem kính hiển vi làm tiêu bản: (đã trình bày ở ngày 27/11/2020)

2.Cấy nấm mốc Aspergillus niger vào ống thủy tinh thạch nghiêng:
- Các kiểu cấy trong ống nghiệm: +Hình vịng xoắn
+Hình chữ chi
+Hình vạch ngang song song.

CÁC THAO TÁC CẤY VÀO ỐNG NGHIỆM
Bước 1 :Chuẩn bị ống nghiệm thạch nghiêng có mơi trường phù hợp và 1 ống mẫu chứa vi
sinh vật.
Bước 2: Sử dụng khẩu trang trong suốt quá trình cấy; khử trùng sạch tay và bàn trước khi
làm việc.
Bước 3: Tay trái cầm 2 ống nghiệm, tay phải cầm que cấy, ngón út và lòng bàn tay của tay
phải cầm và giữ nút ống.
Bước 4: Đưa que cấy đã khử trùng vào bên trong ống nghiệm chứa vi sinh vật, lấy 1 ít
sinh khối vi sinh vật và đậy nút ống nghiệm.
Bước 5: Mở nút bông ở ống thạch cần cấy, khử trùng miệng ống nghiệm, rồi đưa que cấy
trơn vào đáy ống nghiệm ria theo vòng xoắn từ dưới kéo lên hướng gần miệng
ống (đối với vi khuẩn), dùng que cấy nhọn đâm 3 điểm vào thạch ( đối với nấm
mốc).
Bước 6: Rút que cấy ra, hơ miệng ống nghiệm; đóng nút ống nghiệm, khử trùng que cấy.

• Kết quả: phát hiện nấm men, thu được 2 ống thủy tinh thạch nghiêng đã cấy nấm mốc
.
Nấm men soi tươi và nhuộm màu


2 ống nghiệm đã cấy nấm mốc

• Thảo luận với giáo viên: nhờ cô xem 2 ống nấm mốc đã cấy vào ống.
• Phương hướng giải quyết: đợi thêm vài ngày cho nấm mốc phát triển để cấy vào ống
nghiệm và tiếp tục cấy truyền mẫu vi khuẩn đến khi thuần khiết.
⁂ngày 04/12/2020
• Cơng việc: - Cấy truyền làm thuần vsv lên đĩa petri (cấy ria)
- Nhuộm gram và xem kinh hiển vi

• Người thực hiện: cả nhóm
• Phương pháp thực hiện:
1. Nhuộm Gram và xem vsv trên kính hiển vi (đã trình bày 27/11/2020)

2. Cấy truyền: Cấy VK (cao thịt): Phụng, Bích Ngọc ( trình bày ngày 18/11/2020)


• Kết quả: tìm được chủng vi khuẩn cầu khuẩn gram dương và 3 đĩa vi khuẩn cấy truyền
vẫn tiếp tục phát triển
Cầu khuẩn gram dương
Cầu khuẩn gram dương

Trực khuẩn Gram dương

Ecoli Gram âm

• Phương hướng giải quyết: 3 đĩa vi khuẩn cấy trên đã thuần khiết và dự kiến ngày 7/12
sẽ cấy vào ống thạch nghiêng


⁂ngày 7/12/2020
• Cơng việc: - Cấy vi khuẩn và nấm men vào ống nghiệm
-Xem vsv trên kính hiển vi
• Người thực hiện: cả nhóm
• Phương pháp thực hiện:
1.Cấy cầu khuẩn,nấm men vào ống thạch nghiêng (trình bày 1/12)

2.Nhuộm đơn chủng vi khuẩn cầu khuẩn Gram dương ( đã trình bày ngày 27/11 )
• Kết quả: nấm mốc, nấm men, vi khuẩn mọc đúng yêu cầu.

Nấm mốc

Trực khuẩn (+)

Cầu khuẩn(+)

Nấm men


Nhuộm màu và soi tươi chủng cầu khuẩn Gram dương
⁂Ngày 09/12/2020:
• Cơng việc: Cấy truyền làm thuần vào ống nghiệm và đĩa petri
• Người thực hiện: cả nhóm
• Phương pháp thực hiện: ( đã trình bày 1/12)
• Kết quả: cấy thành công 2 đĩa vi khuẩn Ecoli và 3 ống nghiệm vi khuẩn

Ecoli Gram âm

Ecoli (-)

cầu khuẩn (+)

trực khuẩn (+)


• Thảo luận với giáo viên: nhờ cô xem giúp 3 ống nghiệm trên và nghi ngờ ống Ecoli vẫn
chưa thuần khiết

• Phương pháp giải quyết: Ngày 11/12 nhuộm Gram xem kính hiển vi ống vk Ecoli vì nghi
ngờ vẫn chưa thuần khiết .

⁂Ngày 11/12/2020
• Cơng việc: xem kính hiển vi, kiểm tra kết quả đạt được trong ống nghiệm
• Người thực hiện: cả nhóm
• Phương pháp thực hiện:
Nhuộm Gram Ecoli (-) và xem vsv trên kính hiển vi (trình bày 27/11/2020)